一种高压静电场协同1,3-甘油二酯和胶原蛋白肽提高T4噬菌体效价的方法技术

本发明专利技术公开了一种高压静电场协同1,3

【技术实现步骤摘要】
一种高压静电场协同1,3
‑
甘油二酯和胶原蛋白肽提高T4噬菌体效价的方法


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及高压静电场协同1,3
‑
甘油二酯和胶原蛋白肽共同作用于T4噬菌体，得到一种效价较高的T4噬菌体。

技术介绍

[0002]细菌污染已经成为全球性问题，已经破坏了环境、食品、医疗系统的社会和经济稳定性。大肠杆菌病是导致全球畜禽业发病率、死亡率高和经济损失居高不下的原因。大肠杆菌被认为是一种重要的人畜共患病原体，食用受污染的家禽，会导致人类患食源性尿路感染（GoudarztalejerdiA,MohammadzadehA,NajafiSV,etal.Serogrouping,phylotyping,andvirulencegenotypingofcommensalandavianpathogenicEscherichiacoliisolatedfrombroilersinHamedan,Iran[J].ComparativeImmunology,MicrobiologyandInfectiousDiseases,2020,73:101558.）。噬菌体是感染细菌的病毒，在调节细菌种群的数量方面起着重要作用。由于噬菌体对宿主的高度特异性，它们已在临床、食品和农业领域中被用于对抗或预防细菌感染。近几十年来，抗生素耐药性的上升已经成为一个世界性的问题，噬菌体的疗法有望取代抗生素成为一种有前景的抗菌方法（MaloneLM,BirkholzN,FineranPC,etal.ConqueringCRISPR:howphagesovercomebacterialadaptiveimmunity[J].CurrentOpinioninBiotechnology,2021,68：30
–
36.）。
[0003]甘油二酯（Diglyceride，DAG）是由丙三醇（甘油）与两个脂肪酸酯化后得到的产物，包括1,3
‑
DAG和1,2
‑
DAG两种异构体，特别是1,3
‑
DAG，在预防体内脂肪堆积、肥胖症等具有重要作用(Devi,BLAP,Gangadhar,KN,Prasad,RBN,etal.Nutritionallyenriched1,3
‑
diacylglycerol
‑
richoil:Lowcaloriefatwithhypolipidemiceffectsinrats［J］.FoodChemistry,2018,248:210
‑
216)。1,3
‑
DAG不同于甘油三酯的独特代谢方式，使得其具有重要的潜在价值(SaitoS，HernandezonoA，GinsbergHN.Dietary1,3
‑
diacylglycerolprotectsagainstdiet
‑
inducedobesityandinsulinresistance［J］．Metabolismclinical＆Experimental，2007，56(11):1566
‑
1575)。1,3
‑
DAG不仅可以作为保健油脂，还可以作为医药辅料、化妆品辅料、药物合成中间体、饲料添加剂等(Xu,TC，Li,JP，Zou,JY,etal.Ratsmallintestinalmucosalepithelialcellsabsorbdietary1,3
‑
diacylglycerolviaphosphatidicacidpathways［J］．Lipids,2018,53(3):335
‑
344;Wang,J,Choi,H,Kim,WK.Effectsofdietaryenergyleveland1,3
‑
diacylglycerolongrowthperformanceandcarcassyieldinbroilers［J］．JournalofAppliedPoultryResearch,2020,29(3):665
‑
672)。1,2
‑
DAG作为1,3
‑
DAG的同分异构体，虽然代谢方式有别于1,3
‑
DAG，但是其作为食用油脂的重要成分，同样被广泛地应用于食品行业中。
[0004]胶原蛋白肽是通过酶处理降解胶原蛋白而产生的一种小分子产物。除了具有高生物活性，分子量小，易吸收，无毒无害等典型特征外，胶原蛋白肽还具有抗氧化性能以及促进愈合的能力（Zhang C, Yang X, Hu W, et al. Preparation and characterization of carboxymethyl chitosan/collagen peptide/oxidized konjac composite hydrogel[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2020, 149：31
‑
40.），因此被广泛应用于化妆品、医疗、食品等领域。此外，有研究表明胶原蛋白肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌和沙门氏菌都有抑制作用（杨志荣，恒泰，莎丽娜. 羊软骨中Ⅱ型胶原蛋白肽的制备和抑菌活性[J]. 食品科技，2016，41(03)：134
‑
138.）。
[0005]高压静电场技术已广泛用于食品工业中，用来控制病原微生物和腐败微生物。高压静电场可以电解空气产生臭氧，臭氧使细胞活性所需的酶失活，增加细胞膜的通透性，破坏细胞质中的遗传物质或使其失去功能（Huang H, Sun W, Xiong G, et al. Effects of HVEF treatment on microbial communities and physicochemical properties of catfish fillets during chilled storage[J]. LWT
‑
Food Science and Technology, 2020, 131:109667.）。对大肠杆菌进行高压静电场处理，降低了大肠杆菌的存活率，可应用于工业消毒杀菌（白爱枝，赵巧燕，闫祖威，等. 不同处理方式下高压电场对大肠杆菌杀菌效应的比较研究[J].食品科学，2009，30(09)：56
‑
58.）。但目前，关于高压静电场协同1,3
‑
甘油二酯和胶原蛋白肽，应用于T4噬菌体使其效价提高的研究未见报道。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种高压静电场协同1,3
‑
甘油二酯和胶原蛋白肽提高T4噬菌体效价的方法，通过添加1,3
‑
甘油二酯和胶原蛋白肽，并在高压静电场下培养T4噬本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高压静电场协同1,3
‑
甘油二酯和胶原蛋白肽提高T4噬菌体效价的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将保存的大肠杆菌AMC 198挑取单菌落，接入5 mL LB液体培养基中，37 ℃ 160 r/min 振荡培养 8 h，得到1.0
×
10
8 cfu/mL浓度的大肠杆菌AMC 198菌悬液；S2、制备1.0%的1,3
‑
甘油二酯乳液1 mL，0.5%的胶原蛋白肽水溶液1 mL；S3、将
‑
80℃冻存的效价为5.0
×
10
8 pfu/mL的T4噬菌体原液置于4℃低温解冻，取T4噬菌体原液100 μL，大肠杆菌AMC 198菌悬液100 μL，接种于5 mL LB 液体培养基，加入1.0%的1,3
‑
甘油二酯乳液200 μL和0.5%的胶原蛋白肽水溶液200 μL，均匀混合，静置15 min，得到大肠杆菌AMC 198、T4噬菌体、甘油二酯和胶原蛋白肽的混合液；S4、将S3得到的大肠杆菌AMC 198、T4噬菌体、1,3
‑
甘油二酯和胶原蛋白肽的混合液置于绝缘塑料圆盘上，搅拌条件下，在0.15 MV/m的复合多重极板高压静电场中培养 8 h，10000 r/min 离心 10 min，取上清液，得T4噬菌体增殖液；S5、将T4噬菌体增殖液用LB液体培养基进行10倍稀释，得到T4噬菌体稀释液，取T4噬菌体稀释液100
ꢀµ
L加入大肠杆菌AMC 198菌悬液200
ꢀµ
L，静置15min，采用双层平板法培养大肠杆菌AMC 198的T4噬菌体，在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形的T4噬菌体噬菌斑；大肠杆菌AMC 198的T4噬菌体效价=T4噬菌体噬菌斑数
×
稀释倍数
×
10（pfu/mL）；S6、将S4获得的T4噬菌体增殖液用LB液体培养基稀释，得到效价分别为1.0
×
10
5 pfu/mL、1.0
×
10<...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙京新，王宝维，黄明，王淑玲，李岩，郭丽萍，张名爱，蓝天婵，黄河，姚现琦，张从祥，赵向进，郑远东，郝小静，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：