【技术实现步骤摘要】
念珠藻高效裂解性噬藻体YongM及其应用
[0001]本专利技术涉及一种蓝藻的噬藻体，尤其是涉及一种念珠藻高效烈性噬藻体YongM及其应用。
技术介绍
[0002]近年来随着我国经济的发展，人类活动的增加，水体富营养化程度和蓝藻水华日益严重，已经跃居于世界前列，水华的防控防控显得十分紧迫，目前控制水华的技术可分为机械清除法、曝气混合法、营养控制法、化学法、水动力学控制法以及生物控制法等几类，其中采用微生物除藻的生物控制法具有广阔的应用前景。
[0003]噬藻体是一类特异性感染原核藻类的病毒群体。噬藻体是生态环境的组成因子，与宿主的生命活动密切相关，噬藻体在水体中能够调节微藻密度和群落结构。研究发现海洋噬藻体对聚球藻的日致死率为5％～14％。噬藻体的入侵还会改变宿主光合作用中心，使得光合作用发生率降低，间接影响水体初级生产力。此外，噬藻体还有助于微生物生态系统的营养循环和调节，因此可用作控制蓝藻的无害环境因子。
技术实现思路
[0004]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种可高效、快速地裂解蓝藻，尤其是裂解念珠藻的噬藻体及其应用。
[0005]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种以念珠藻Nostoc sp.FACHB-596为靶标分离获得的高效裂解性噬藻体，分类命名为Cyanomyoviruse SP.，株名YongM(YongM是甬Yong和肌尾科Myoviridae的缩写)，YongM属于肌尾科Myoviridae。于2020年1月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高效裂解性噬藻体，其特征在于：该噬藻体命名为YongM，于2020年1月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18383。2.根据权利要求1所述的一种高效裂解性噬藻体，该噬藻体具有如下生物学特征：YongM是以念珠藻FACHB-596为靶标分离获得的噬藻体；YongM具有呈二十面体近似球形的头部，直径62nm(
±
5nm)，以及可收缩的尾部，尾部长度为93nm(
±
10nm)。3.根据权利要求1所述的一种高效裂解性噬藻体，该噬藻体具有如下生物学特征：YongM高效裂解念珠藻，在念珠藻藻平板上形成大而透明的噬藻斑，24小时即可使念珠藻藻液黄化、澄清化；YongM的宿主范围具有广谱性，除裂解念珠藻外，还能感染、裂解多种微囊藻、色球藻、颤藻；YongM的DNA聚合酶基因序列不存在于已有数据库中，是一株未被报导的新的噬藻体。4.一种根据权利要求1所述的高效裂解性噬藻体的分离纯化方法，其特征在于具体包括如下步骤：(1)念珠藻Nostoc sp.FACHB-596的培养取5mL念珠藻Nostoc sp.FACHB-596的藻液，以1∶100的体积比稀释至装有500mL BG11液体培养基的锥形瓶中，放置于温度25℃，光照强度为2000lx，光暗周期为12h∶12h的光照培养箱中，10天左右即得到对数期FACHB-596藻液；(2)噬藻体的富集、筛选水样处理：采集云南滇池各处表层水样，并尽快带回实验室处理；水样在4℃条件下12000g离心20分钟去除沉淀，取上清液进行实验；取与样品数对应数量的无菌锥形瓶，每个锥形瓶中加入：80mL经上述处理的水样上清液+20mL的5
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的BG11培养基+20mL对数期FACHB-596藻液。混匀后光照培养箱中培养，每天手动摇藻2-3次，同时用纯水机取的水代替水样上清作为对照；将黄化的培养液经12000g离心10分钟，取上清，依次经0.45μm和0.22μm硝酸纤维素滤膜过滤，取滤液加到10倍体积的对数生长期的FACHB-596藻液中混匀、培养至出现明显黄化现象，即得到初筛感染液；(3)噬藻体的初步纯化制备浓缩藻液：取对数期FACHB-596藻液，10000g离心10分钟，保留相当于原体积的1/20-1/40的上清液悬浮沉淀；在超净台中将融化后的含0.7％琼脂的BG11培养基分装成8mL/管，置于45℃恒温水浴中30min至温度恒定。取步骤(2)获得的初筛含有病毒的感染液用BG11液体培养基做系列梯度稀释成10-1-10-6
，取各稀释度的稀释液按体积比1∶9的比例添加到0.9mL浓缩的FACHB-596藻液中，混匀，置于转速约70rpm摇床中，25℃孵育20-30分钟，使病毒充分吸附到藻细胞；...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦伟南，李登峰，许丽华，林威，童贻刚，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：
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