一种重组I型人源化胶原蛋白C1L6T及其制备方法和用途技术

技术编号:30973048 阅读:2 留言:0更新日期:2021-11-25 20:56
本发明专利技术公开了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L6T及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的重组I型人源化胶原蛋白C1L6T包含以SEQ ID No.3所示的序列;任选地,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T包含以SEQ ID No.2所示的序列;优选地,以SEQ ID No.3所示的序列直接连接于以SEQ ID No.2所示的序列的N端。本发明专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L6T的氨基酸序列部分源自天然I型胶原蛋白氨基酸序列,应用于人体不会产生免疫反应,此外该蛋白在折叠结构正确的同时具有稳定性强、表达量高的优点,且实验证明该蛋白相比I型胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果。黏附效果。黏附效果。

【技术实现步骤摘要】
一种重组I型人源化胶原蛋白C1L6T及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于基因工程
,涉及一种重组I型人源化胶原蛋白C1L6T及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]胶原蛋白(collagen)在人体中占总蛋白的25%~30%,其中含量最多的是I型胶原蛋白,约占85%以上,I型胶原蛋白在骨、皮肤、腱和角膜中含量高,II型存在于软骨、椎间盘和玻璃体中,III型存在于血管、新生皮肤和瘢痕组织中。
[0003]胶原蛋白具有很好的生物相容性、生物降解性以及生物活性,可以广泛应用在医药化工、食品、化妆品等行业中。其在临床上的应用包括:烧伤创伤治疗的胶原膜,美容矫形的胶原医用注射剂,创伤止血的胶原止血海绵等。在化妆品领域,胶原蛋白是皮肤细胞外基质的重要组成成分,具有保湿、补充皮肤胶原、抗衰老等方面的功效。
[0004]目前市售的胶原蛋白产品大多是取自猪、牛、鱼等动物组织,难以避免病毒感染的风险,同时由于无法与人体相容,用于人体容易导致免疫排斥和过敏症状的出现。同时,生产胶原蛋白的传统方法是利用酸、碱、酶解法处理动物来源的组织,提取胶原蛋白衍生物。这些方法提取的胶原蛋白本身已经丧失了原有的生物学活性,无法应用于生物医学领域发挥其真正的功能。因此现在人们把生产胶原蛋白的研究思路转移到了基因工程手段上。
[0005]胶原蛋白的基本结构是原胶原,每个原胶原分子都由三条a肽链组成,每个a肽链都会形成左手螺旋,三条左手螺旋扭在一起形成一个大的右手三股螺旋结构。胶原蛋白有特定Gly

>Xaa

Yaa的重复氨基酸序列组成,其中,Xaa通常是脯氨酸,Yaa通常是羟脯氨酸或者羟赖氨酸。由于胶原蛋白特定的氨基酸组成,通过基因工程方式制备的胶原蛋白,如何提高胶原蛋白稳定性、表达量以及是否能形成正确的折叠结构,是制约其应用的关键方面。因此,胶原蛋白通过基因工程方式制备过程中,需要选择合适的胶原结构域,以及对选择的胶原域的氨基酸序列进行合理的优化能够提高胶原蛋白的制备效率,以及提高制备的胶原蛋白的稳定性及活性。

技术实现思路

[0006]专利技术要解决的问题
[0007]针对上述本领域中利用传统方法提取的胶原蛋白生物活性低、生物利用率低且容易诱发免疫反应等一系列问题,以及利用基因工程方法制备胶原蛋白需要使蛋白稳定并形成正确折叠结构的需求,本专利技术提供了重组I型人源化胶原蛋白C1L6T,同时提供了其制备方法和用途。
[0008]用于解决问题的方案
[0009]第一方面,本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L6T,其中,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T包含以SEQ ID No.3所示的序列。
[0010]进一步地,在上述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T中,任选地,所述重组I型人源化
胶原蛋白C1L6T包含以SEQ ID No.2所示的序列;优选地,以SEQ ID No.3所示的序列直接连接于以SEQ ID No.2所示的序列的N端。
[0011]进一步地,上述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T包含:a)以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列;b)保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果的与SEQ ID No.4的氨基酸序列具有不低于90%的同源性的氨基酸序列;c)保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果的在SEQ ID No.4的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列;或d)保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果的由核苷酸序列编码的氨基酸序列,所述核苷酸序列与编码SEQ ID No.4的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交,所述严格条件是中等严格条件,中

高严格条件,高严格条件或非常高严格条件。
[0012]第二方面,本专利技术提供了编码上述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T的多核苷酸。
[0013]第三方面,本专利技术提供了包含上述第二方面提供的多核苷酸的表达载体。
[0014]第四方面,本专利技术提供了包含上述第三方面提供的表达载体的宿主细胞。
[0015]第五方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T的生产方法,其包括以下步骤:

在培养基中培养上述第四方面提供的宿主细胞并生产蛋白;

收获并纯化所述蛋白,优选用Ni柱和/或离子交换层析纯化所述蛋白;和

任选地对所述蛋白进行酶切,优选用PPase蛋白酶酶切所述蛋白。
[0016]第六方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T在制备产品中的用途,其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0017]第七方面,本专利技术提供了包含上述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T的产品,其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0018]第八方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T在制备具有促进细胞黏附作用的产品中的用途。
[0019]专利技术的效果
[0020]通过上述技术方案的实施,本专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L6T的氨基酸序列部分源自天然I型胶原蛋白氨基酸序列,应用于人体不会产生免疫反应,此外该蛋白在折叠结构正确的同时具有稳定性强、表达量高的优点,且实验证明该蛋白相比I型胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果。
附图说明
[0021]图1为重组表达质粒pET32a

C1L6T的图谱,其中C1L6T对应的氨基酸序列为SEQ ID No.4。
[0022]图2为蛋白C1L6T诱导表达及纯化后的凝胶电泳图,第1泳道为分子量Marker,第2泳道为用Ni柱提纯后的C1L6T蛋白,第3泳道为PPase酶切后的C1L6T蛋白,第4泳道为用Capto Q柱纯化后的C1L6T蛋白。
[0023]图3为商品化的人胶原蛋白和蛋白C1L6T的细胞黏附活性检测结果。
具体实施方式
[0024]以下对本专利技术的实施方式进行说明,但本专利技术不限定于此。除非另有说明,本专利技术中使用的仪器设备、试剂、材料等均可通过常规商业手段获得。
[0025]本说明书中,使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。本说明书中,“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生,并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
[0026]本说明书中,“组织工程产品”是指用于组织工程的产品。组织工程是一门以细胞生物学和材料科学相结合,进行体外或体内构建组织或器官的新兴学科。
[0027]本说明书中,“医疗器械”是指直接或者间接用于人体的仪器、设备、器具、体外诊断试剂及校准物、材料以及其他类似或者相关的物品。
[0028]在本专利技术中,选择I型胶原蛋白序列为筛选优化的序列。所述人胶原I型COL1A1的序列是NCBI参照序列:NP_000079(SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组I型人源化胶原蛋白C1L6T,其中,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T包含以SEQ ID No.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L6T,其特征在于,任选地,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T包含以SEQ ID No.2所示的序列;优选地,以SEQ ID No.3所示的序列直接连接于以SEQ ID No.2所示的序列的N端。3.根据权利要求1或2所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L6T,其特征在于,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L6T包含:a)以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列;b)保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果的与SEQ ID No.4的氨基酸序列具有不低于90%的同源性的氨基酸序列;c)保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果的在SEQ ID No.4的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列;或d)保留SEQ ID No.4的氨基酸序列的细胞黏附效果的由核苷酸序列编码的氨基酸序列,所述核苷酸序列与编码SEQ ID No.4的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交,所述严格条件是...

【专利技术属性】
技术研发人员:杨霞武庚风张永健
申请(专利权)人:山西锦波生物医药股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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