一种重组I型人源化胶原蛋白C1L5T及其制备方法和用途技术

技术编号:30802012 阅读:32 留言:0更新日期:2021-11-16 08:08
本发明专利技术公开了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L5T及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的重组I型人源化胶原蛋白C1L5T包含以SEQ ID No.3所示的序列;所述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列;优选地,以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列的C端直接相连。本发明专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L5T氨基酸序列来自于天然胶原蛋白氨基酸序列,避免了用于人体出现免疫排斥反应的同时也解决了原始基因序列的胶原蛋白无法在体外正确折叠的问题,此外,该重组I型人源化胶原蛋白C1L5T相比I型胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果。有更加良好的细胞黏附效果。有更加良好的细胞黏附效果。

【技术实现步骤摘要】
一种重组I型人源化胶原蛋白C1L5T及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于基因工程
,涉及一种重组I型人源化胶原蛋白C1L5T及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]胶原蛋白(collagen)是生物高分子,动物结缔组织中的主要成分,也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白,占蛋白质总量的25%~30%,某些生物体甚至高达80%以上。胶原蛋白是人体最丰富的蛋白质之一。
[0003]胶原蛋白是结缔组织中极其重要的结构蛋白质,对维护细胞、组织及器官的正常生理功能有着重要作用。胶原蛋白被广泛的应用于医学材料及药物方面、美容化妆品、保健品以及各种实用工业中。然而,使用传统方法制备的动物源胶原有一定的病毒隐患如疯牛病、口蹄疫、猪瘟疫等,特别是应用于人体时易引起异体异种的排异反应,从而限制了胶原蛋白在医药方面的应用。
[0004]胶原蛋白结构相对复杂,在生物体中,胶原蛋白的合成和修饰从原胶原开始,经历了羟基化、糖基化、相互交联等诸多化学变化,受到了多种生物酶的复杂调控。原胶原除了含有胶原链之外,还含有球状的头部和尾部。没有这些头部和尾部,胶原链就不会折叠成为正确的三螺旋,从而缺乏胶原蛋白的生物学活性。因此,按照原始基因序列制备的胶原蛋白不可能在体外自发的组织形成正确的空间结构。这样的困难严重阻碍了人胶原蛋白的研发和生产。
[0005]因此利用相对低廉的成本生产大量的人源胶原蛋白依然是一种需求,使其能够用于可以起到人体胶原蛋白功能和特性的产品的开发。

技术实现思路

[0006]专利技术要解决的问题
[0007]针对上述本领域中异源胶原蛋白存在病毒隐患且容易诱发免疫反应导致其应用受限,而人源胶原蛋白生产具有一定难度的问题,本专利技术提供了重组I型人源化胶原蛋白C1L5T,同时提供了其制备方法和用途。
[0008]用于解决问题的方案
[0009]第一方面,本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L5T,其中,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T包含以SEQ ID No.3所示的序列。
[0010]进一步地,上述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列;优选地,以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列的C端直接相连。
[0011]进一步地,上述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T包含以下序列中的至少一种:以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列;相比以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列具有不低于80%的同源性的氨基酸序列,并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果;以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列,并
且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果;由核苷酸序列编码的氨基酸序列,所述核苷酸序列与编码以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交,并且所述氨基酸序列保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果,所述严格条件是中等至非常高等严格条件。
[0012]第二方面,本专利技术提供了多核苷酸,其编码上述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T。
[0013]第三方面,本专利技术提供了表达载体,其包含上述本专利技术在第二方面提供的多核苷酸。
[0014]第四方面,本专利技术提供了宿主细胞,其包含上述本专利技术在第三方面提供的表达载体。
[0015]第五方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T的生产方法,其包括以下步骤:

在培养基中培养上述本专利技术在第四方面提供的宿主细胞并生产蛋白;

收获并纯化所述蛋白,优选用Ni柱和/或离子交换层析纯化所述蛋白;

任选地对所述蛋白进行酶切,优选用PPase蛋白酶酶切所述蛋白。
[0016]第六方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T在制备具有促进细胞黏附作用的产品中的用途。
[0017]第七方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T在制备产品中的用途,其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0018]第八方面,本专利技术提供了包含上述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T的产品,其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0019]专利技术的效果
[0020]通过上述技术方案的实施,本专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L5T氨基酸序列来自于天然胶原蛋白氨基酸序列,避免了用于人体出现免疫排斥反应的同时也解决了原始基因序列的胶原蛋白无法在体外正确折叠的问题,此外,该重组I型人源化胶原蛋白C1L5T相比I型胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果。
附图说明
[0021]图1为重组表达质粒pET32a

C1L5T的图谱,其中C1L5T对应的氨基酸序列为SEQ ID No.4。
[0022]图2为蛋白C1L5T诱导表达及纯化后的凝胶电泳图,第1泳道为分子量Marker,第2泳道为PPase酶切后的蛋白C1L5T,第3泳道为用Ni柱提纯后的重组I型人源化胶原蛋白C1L5T,第4泳道为用Capto Q柱纯化后的蛋白C1L5T。
[0023]图3为商品化的人胶原蛋白和蛋白C1L5T的细胞黏附活性检测结果。
具体实施方式
[0024]以下对本专利技术的实施方式进行说明,但本专利技术不限定于此。
[0025]本专利技术中,使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。
[0026]在本专利技术中,“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生,并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
[0027]本专利技术中,“医疗器械”是指直接或者间接用于人体的仪器、设备、器具、体外诊断试剂及校准物、材料以及其他类似或者相关的物品。
[0028]本专利技术中,“组织工程产品”是指用于组织工程的产品。组织工程是一门以细胞生物学和材料科学相结合,进行体外或体内构建组织或器官的新兴学科。
[0029]在本专利技术中,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T的氨基酸序列部分源自I型人胶原蛋白,即以SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中粗体下划线部分。所述I型人胶原蛋白序列如下:如下:如下:
[0030]GEPGKQGPSGASGERGPPGPMGPPGLAGPPGESGREGAPGAEGSPGRDGSPGAKGDRGETGPAGPPGAPGAPGAPGPVGPAGKSGDRGETGPAGPAGPVGPVGARGPAGPQGPRGDKGETGEQGDRGIKGHRGFSGLQGPPGPP
GSPGEQGPSGASGPAGPRGPPGSAGAPGKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGPP(SEQ ID No.3)
[003本文档来自技高网
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组I型人源化胶原蛋白C1L5T,其中,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T包含以SEQ ID No.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L5T,其特征在于,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列;优选地,以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列的C端直接相连。3.根据权利要求1或2所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L5T,其特征在于,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L5T包含以下序列中的至少一种:以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列;相比以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列具有不低于80%的同源性的氨基酸序列,并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果;以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列,并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果;由核苷酸序列编码的氨基酸序列,所述核苷酸序列与编码以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交,并且所述氨基酸序列保留以SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员:杨霞武庚风张永健
申请(专利权)人:山西锦波生物医药股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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