含细胞外基质组合物及其制造方法、以及三维组织体及其制造方法技术

本发明专利技术涉及一种含细胞外基质组合物，其包含经片段化的细胞外基质成分和键合或吸附于经片段化的细胞外基质成分的化合物。经片段化的细胞外基质成分的化合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含细胞外基质组合物及其制造方法、以及三维组织体及其制造方法


[0001]本专利技术涉及含细胞外基质组合物及其制造方法、以及三维组织体及其制造方法。

技术介绍

[0002]作为人工地制作模仿生物体组织的结构体的方法，例如已知有下述方法等：一种制造三维组织体的方法(专利文献1)，其通过对培养细胞的表面整体由粘附膜包覆的包覆细胞进行培养来制造三维组织体；一种制造三维组织体的方法(专利文献2)，其包含将由包含胶原的被膜涂敷的细胞三维地配置而形成三维组织体的工序；一种三维组织体的制造方法(专利文献3)，其包含形成在细胞的表面形成有被膜的包覆细胞的工序、及将包覆细胞三维地配置的工序，其中，包覆细胞的形成包含使细胞浸渍于含有被膜成分的液体中的工序、及利用透液性膜将浸渍后的细胞与含有被膜成分的液体分离的工序；一种立体性细胞组织的制造方法(专利文献4)，其包含下述工序：将细胞与阳离子性物质和细胞外基质成分混合而得到混合物，从得到的混合物收集细胞，在基材上形成细胞集合体。
[0003]另外，本专利技术者们还提出了一种制造胶原浓度高的三维组织体的方法(专利文献5)，其通过使细胞与内源性胶原接触，优选进一步与纤维性的外源性胶原接触来制造胶原浓度高的三维组织体。期待上述这样的三维组织体作为实验动物的替代品、移植材料等的用途。
[0004]然而，在生物体内，胶原这样的细胞外基质相互作用而形成组织。另外，启示了为了细胞外基质相互作用，细胞外基质与更低分子的化合物键合和/或吸附，所键合和/或吸附的化合物在细胞外基质的相互作用中发挥重要的作用(例如非专利文献1
‑
3)。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：日本特开2012
‑
115254号公报
[0008]专利文献2：国际公开第2015/072164号
[0009]专利文献3：国际公开第2016/027853号
[0010]专利文献4：国际公开第2017/146124号
[0011]专利文献5：国际公开第2018/143286号
[0012]非专利文献
[0013]非专利文献1：M.C.Erat et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2009,106,4195
[0014]非专利文献2：Y.Tatara et al.,Glycobiology 2015,25,557.
[0015]非专利文献3：M.Shawn et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1998,95,7275.

技术实现思路

[0016]专利技术所要解决的课题
[0017]根据上述三维组织体的制造方法，通过人工的方法虽然能够简便地制作三维组织
体，但要求制作甚至能够更忠实地模仿实际的生物体内的各种化合物的相互作用的三维组织体。
[0018]本专利技术的一个方面的目的在于提供一种能够形成更接近生物体内的状态的三维组织体的含细胞外基质组合物。本专利技术的另一个方面的目的在于提供一种更接近生物体内的状态的三维组织体及其制造方法。
[0019]用于解决课题的手段
[0020]即，本专利技术例如涉及以下的各专利技术。
[0021][1]一种含细胞外基质组合物，其包含经片段化的细胞外基质成分和键合或吸附于经片段化的细胞外基质成分的化合物。
[0022][2]根据[1]所述的含细胞外基质组合物，其中，经片段化的细胞外基质成分包含经片段化的胶原成分。
[0023][3]根据[1]或[2]所述的含细胞外基质组合物，其中，经片段化的细胞外基质成分的平均长度为100nm以上且200μm以下。
[0024][4]根据[1]～[3]中任一项所述的含细胞外基质组合物，其中，所述化合物为选自硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素和纤连蛋白中的至少1种。
[0025][5]一种含细胞外基质组合物的制造方法，其具备使经片段化的细胞外基质成分与可键合或吸附于经片段化的细胞外基质成分的化合物接触的工序。
[0026][6]根据[5]所述的含细胞外基质组合物的制造方法，其中，经片段化的细胞外基质成分是通过将细胞外基质成分在水性介质中进行片段化而得到的。
[0027][7]根据[5]或[6]所述的含细胞外基质组合物的制造方法，其中，经片段化的细胞外基质成分包含经片段化的胶原成分。
[0028][8]一种三维组织体的制造方法，其具备：第一工序，在水性介质中，使[1]～[4]中任一项所述的含细胞外基质组合物与细胞接触；及第二工序，对含细胞外基质组合物所接触的细胞进行培养。
[0029][9]根据[8]所述的三维组织体的制造方法，其中，在第一工序后且第二工序前，具备使水性介质中的经片段化的细胞外基质成分、键合或吸附于经片段化的细胞外基质成分的化合物、和细胞沉降的工序。
[0030][10]根据[8]或[9]所述的三维组织体的制造方法，其中，第一工序在水性介质中形成了细胞的层之后进行。
[0031][11]根据[8]～[10]中任一项所述的三维组织体的制造方法，其中，细胞包含细胞外基质产生细胞。
[0032][12]根据[8]～[11]中任一项所述的三维组织体的制造方法，其中，细胞包含选自血管内皮细胞、癌细胞、心肌细胞、平滑肌细胞和上皮细胞中的一种或多种细胞。
[0033][13]根据[8]～[12]中任一项所述的三维组织体的制造方法，其中，所述经片段化的细胞外基质成分与所述化合物的总含量以经片段化的细胞外基质成分、上述化合物和细胞的总质量为基准，为10质量％以上且90质量％以下。
[0034][14]一种三维组织体，其包含细胞和[1]～[4]中任一项所述的含细胞外基质组合物，其中，所述细胞的至少一部分与所述经片段化的细胞外基质成分接触。
[0035]专利技术效果
[0036]根据本专利技术，能够提供一种能够形成更接近生物体内的状态的三维组织体的含细胞外基质组合物。根据本专利技术，能够提供一种接近生物体内的状态的三维组织体及其制造方法。通过使用本专利技术的含细胞外基质组合物，例如能够得到模仿血管和血管周围的细胞的存在状态的三维组织体。另外，通过使用本专利技术的含细胞外基质组合物，能够得到血管密度比以往粗的三维组织体。
附图说明
[0037]图1是键合或吸附有各种化合物的经解纤的胶原成分的显微镜照片。
[0038]图2是键合或吸附有荧光素标记硫酸软骨素的经解纤的胶原成分的显微镜照片。
[0039]图3是表示利用CD31染色的由三维组织体构成的毛细血管的观察结果的照片。
[0040]图4是表示毛细血管的直径的测定结果的图表。
[0041]图5是表示利用波形蛋白(Vimentin)染色及CD31染色的由三维组织体构成的毛细血管的观察结果的照片。
[0042]图6是表示利用甲苯胺蓝(TB)染色的三维组织体的观察结果的照片。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种含细胞外基质组合物，其包含经片段化的细胞外基质成分和键合或吸附于所述经片段化的细胞外基质成分的化合物。2.根据权利要求1所述的含细胞外基质组合物，其中，所述经片段化的细胞外基质成分包含经片段化的胶原成分。3.根据权利要求1或2所述的含细胞外基质组合物，其中，所述经片段化的细胞外基质成分的平均长度为100nm以上且200μm以下。4.根据权利要求1～3中任一项所述的含细胞外基质组合物，其中，所述化合物为选自硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素和纤连蛋白中的至少1种。5.一种含细胞外基质组合物的制造方法，其具备使经片段化的细胞外基质成分与可键合或吸附于所述经片段化的细胞外基质成分的化合物接触的工序。6.根据权利要求5所述的含细胞外基质组合物的制造方法，其中，所述经片段化的细胞外基质成分是通过将细胞外基质成分在水性介质中进行片段化而得到的。7.根据权利要求5或6所述的含细胞外基质组合物的制造方法，其中，所述经片段化的细胞外基质成分包含经片段化的胶原成分。8.一种三维组织体的制造方法，其具备：第一工序，在水性介质中，使权利要求1～4中任一项所述的含细胞外基质组合物与细胞接触；及第二工序，对所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：北野史朗，入江新司，松崎典弥，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：