本发明专利技术公开了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L2T及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的重组I型人源化胶原蛋白C1L2T包含以SEQ ID No.3所示的序列，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列，优选地，以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列直接相连。本发明专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L2T相比I型人胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果，其氨基酸序列选自天然I型人胶原蛋白氨基酸序列，应用于人体产生免疫反应的可能性较低，且制备方法简单。且制备方法简单。且制备方法简单。
【技术实现步骤摘要】
一种重组I型人源化胶原蛋白C1L2T及其制备方法和用途
[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及一种重组I型人源化胶原蛋白C1L2T及其制备方法和用途。
技术介绍
[0002]胶原蛋白(collagen)是哺乳动物体内含量最多的一类蛋白质，其广泛分布在动物的皮肤、骨骼、肌腱、韧带和血管之中。人体中胶原蛋白含量占总蛋白的25％～30％，是一种重要的结构蛋白，起着保护机体、支撑器官的重要作用。
[0003]目前已发现胶原蛋白有28种类型，不同类型的胶原蛋白具有不同的功能。一般分为两大类：一类是成纤维胶原蛋白；另一类是非成纤维胶原蛋白；成纤维胶原蛋白包括I、II、III、V、VI和XXVI型胶原蛋白，其余属于非纤维胶原蛋白。人体中含量最多的是I型胶原蛋白，约占85％以上，I型胶原蛋白在骨、皮肤、腱和角膜中含量高，II型存在于软骨、椎间盘和玻璃体中，III型存在于血管、新生皮肤和瘢痕组织中。
[0004]目前胶原蛋白主要以动物组织为来源，天然提取的胶原蛋白是多种不同分子量的胶原蛋白组成的混合物，不溶于水，生物相容性较差；此外，由于来源于动物组织，对于动物源疾病或者人传染疾病有交叉感染的风险，同时无法与人体相容，会导致出现免疫排斥和过敏症状。
[0005]生产胶原蛋白的传统方法是利用酸、碱、酶解法处理动物来源的组织，提取胶原蛋白衍生物。这些方法提取的胶原蛋白本身已经丧失了原本的生物学活性，无法应用于生物医学领域发挥真正的功能。所以，目前胶原蛋白只能在化妆品和保健品中使用，根本无法发挥胶原蛋白的原本生物学功能。
技术实现思路
[0006]专利技术要解决的问题
[0007]针对上述本领域中异源胶原蛋白生物活性差、难以发挥原有功能以及容易引起免疫反应的问题，本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L2T，同时提供了其制备方法和用途。
[0008]用于解决问题的方案
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L2T，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T包含以SEQ ID No.3所示的序列。
[0010]进一步地，上述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列；优选地，以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列直接相连。
[0011]进一步地，上述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T包含以下序列中的至少一种：以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；与以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列具有大于等于90％的同一性的氨基酸序列，并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果；以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并
且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果；
[0012]由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果，所述严格条件是中等严格条件，中
‑
高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。
[0013]第二方面，本专利技术提供了多核苷酸，其编码上述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T。
[0014]第三方面，本专利技术提供了表达载体，其包含上述多核苷酸。
[0015]第四方面，本专利技术提供了宿主细胞，其包含上述表达载体。
[0016]第五方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T的生产方法，其包括以下步骤：
①
在培养基中培养上述本专利技术在第四方面提供的宿主细胞并生产蛋白；
②
收获并纯化所述蛋白，优选用Ni柱和/或离子交换层析纯化所述蛋白；
③
任选地对所述蛋白进行酶切，优选用PPase蛋白酶酶切所述蛋白。
[0017]第六方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T在制备产品中的用途，其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0018]第七方面，本专利技术提供了包含上述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T的产品，其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0019]第八方面，本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T在制备具有促进细胞黏附作用的产品中的用途。
[0020]专利技术的效果
[0021]通过上述技术方案的实施，本专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L2T相比I型人胶原蛋白本身具有更加良好的细胞黏附效果，其氨基酸序列选自天然I型人胶原蛋白氨基酸序列，应用于人体产生免疫反应的可能性较低，且制备方法简单。
附图说明
[0022]图1为重组表达质粒pET32a
‑
C1L2T的图谱，其中C1L2T对应的氨基酸序列为SEQ ID No.4。
[0023]图2为蛋白C1L2T诱导表达及纯化后的凝胶电泳图，第1泳道为分子量Marker，第2泳道为用Ni柱提纯后的C1L2T蛋白，第3泳道为PPase酶切后的C1L2T蛋白，第4泳道为用Capto Q柱纯化后的C1L2T蛋白。
[0024]图3为商品化的人胶原蛋白和蛋白C1L2T的细胞黏附活性检测结果。
具体实施方式
[0025]以下对本专利技术的实施方式进行说明，但本专利技术不限定于此。除非另有说明，本专利技术中使用的仪器设备、试剂、材料等均可通过常规商业手段获得。
[0026]本专利技术中，使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。本说明书中，“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
[0027]本专利技术中，“组织工程产品”是指用于组织工程的产品。组织工程是一门以细胞生物学和材料科学相结合，进行体外或体内构建组织或器官的新兴学科。
[0028]本专利技术中，“医疗器械”是指直接或者间接用于人体的仪器、设备、器具、体外诊断试剂及校准物、材料以及其他类似或者相关的物品。
[0029]本专利技术中，“中等严格条件”，“中
‑
高严格条件”，“高严格条件”或“非常高严格条件”描述了核酸杂交和洗涤的条件。进行杂交反应的指导参见Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons，N.Y.(1989)，6.3.1
‑
6.3.6，其通过引用并入本文。在该文献中描述了含水的和非含水的方法，且可以使用任一种。例如，具体的杂交条件如下：(1)低严格性杂交条件在6
×
氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中，在约45℃，然后在至少50℃，在0.2
×
SSC，0.1％SDS中洗涤2次(对于低严格性条件，可以将洗涤温度升高到55℃)；(2)本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种重组I型人源化胶原蛋白C1L2T，其中，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T包含以SEQ ID No.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L2T，其特征在于，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列；优选地，以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列直接相连。3.根据权利要求1或2所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L2T，其特征在于，所述重组I型人源化胶原蛋白C1L2T包含以下序列中的至少一种：以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；与以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列具有大于等于90％的同一性的氨基酸序列，并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果；以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果；由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果，...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨霞，武庚风，张永健，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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