【技术实现步骤摘要】
噬菌斑的培养和观察方法
[0001]本专利技术属于微生物
，涉及一种噬菌斑的培养和观察方法。
技术介绍
[0002]噬菌体(phage)是感染细菌、放线菌及蓝细菌等原核生物的病毒，是遗传学、分子生物学和基因工程的常见实验材料，广泛存在于自然界的各个生境中。根据其侵染宿主后是否裂解宿主，可分为烈性噬菌体和温和噬菌体。烈性噬菌体会侵染宿主在菌苔上形成一个个具有一定形状、大小、边缘和透明度的噬菌斑。因每种噬菌体的噬菌斑有一定的形态，故可用作噬菌体的鉴定指标，也可用于纯种分离和计数。
[0003]噬菌体的分离纯化是普通微生物学实验、病原微生物学实验和环境工程微生物学实验等课程的必做项目之一。噬菌斑的培养和观察，是本实验项目的核心技术。目前，国内外教材多沿用Adams1959年专利技术的双层平板法，其主要步骤为:预先分别配制含2％和0.7％琼脂的底层培养基和上层培养基。先用底层培养基在培养皿上浇一层平板,待凝固。再把预先融化并冷却到45℃的上层培养基混合较浓的敏感宿主和一定体积的噬菌体待检液，混匀后铺平在已凝固的底层平板...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.本发明为一种噬菌斑的培养和观察方法，是一种可应用于高校教学或相关技术人员培训的实验方法。其原理为：噬菌体在自然界分布很广，有其宿主存在的地方都可以发现噬菌体。烈性噬菌体在固体平板上侵染并裂解敏感宿主形成噬菌斑。培养并观察噬菌斑可使学生掌握分离纯化噬菌体的基本原理和方法，了解噬菌体的特性，具体包括以下步骤：步骤1：水样预检，其特征是选择总大肠菌群阳性的环境水样为噬菌体分离培养材料。步骤2：制备菌悬液，其特征是无菌操作从伊红美兰培养基上挑取一个深紫红色、有金属光泽的单菌落，接种5ml牛肉膏蛋白胨液体培养基，37℃，150rpm培养1～3hour。步骤3：水样处理与增殖噬菌体，其特征是取污水2ml，4℃，10000rpm离心1min，收集上清，上清中加0.2ml氯仿涡旋振荡1min，静置，收集上层液体1ml添加于5ml牛肉膏蛋白胨液体培养基中，同时添加0.2ml大肠杆菌的菌悬液，37℃，150rpm过夜培养以增殖噬菌体。步骤4：噬菌体增殖液的稀释，其特征是取2ml噬菌体增殖液4℃，10000rpm离心1min收集上清液，上清加0.2ml氯仿涡旋震荡1min，静置，上层液体为富集的噬菌体样品。用1％的蛋白胨水将富集的噬菌体样品10倍倍比稀释到10
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‑7。步骤5：噬菌体
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宿主混合液的制备，其特征是在制...
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