噬菌体VB_VpP_BT-1011、筛选方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种噬菌体VB_VpP_BT

【技术实现步骤摘要】
噬菌体VB_VpP_BT
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1011、筛选方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，更具体的说是涉及一种噬菌体VB_VpP_BT
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1011及其筛选方法和应用。

技术介绍

[0002]噬菌体是一类感染细菌的病毒，它常分离于污水或海水等自然环境样本中，并且它具有严格的宿主特异性，只侵袭一种或几种细菌，所以噬菌体对人类或动植物没有感染性，也不会污染环境，安全性较高。噬菌体可以分为温和噬菌体与烈性噬菌体两大类，其中烈性噬菌体可以在短时间内造成敏感细菌裂解。在杀菌效果方面，烈性噬菌体能裂解细菌并具有指数增殖特征，能作为一种具有抗菌作用的生物消毒剂。由于噬菌体能够在各种环境中识别和感染宿主细菌细胞，与此同时具有很高的特异性并且只在活菌中增殖。
[0003]副溶血弧菌存在广泛，开放性伤口与该环境中的副溶血弧菌接触可能导致伤口感染和危及生命的败血病，同时该菌也常见于鱼，虾和贝类等海鲜产品中，摄入被副溶血弧菌污染的海鲜食物会导致胃肠道疾病，包括水样腹泻，腹部绞痛，恶心，呕吐，发烧，头痛或血性腹泻等症状；临床现治疗相关疾病的方法是抗生素杀菌。但是，抗生素增加了抗生素耐药性菌株(AMR)和耐药基因的产生和传播，进一步危及公众的健康。所以，筛选出一株可以对抗耐药性的副溶血弧菌的噬菌体是非常必要的。
[0004]因此，如何提供一种噬菌体VB_VpP_BT
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1011，并将其应用于对抗耐药性的副溶血弧菌的噬菌体中是本领域技术人员亟需解决的问题。
专利技术内容
[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种噬菌体VB_VpP_BT
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1011及其在对抗副溶血弧菌中的应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种噬菌体VB_VpP_BT
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1011，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2021年06月08日，保藏编号为CGMCC No.22379，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0008]一种噬菌体VB_VpP_BT
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1011的筛选方法，以副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)BTXS2对其进行筛选；所述副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)BTXS2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2021年06月08日，保藏编号为CGMCC No.22677，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0009]作为本专利技术优选的技术方案，以副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)BTXS2对噬菌体VB_VpP_BT
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1011进行筛选的具体过程包括：
[0010]1)取水样，过滤、离心，截留滤液，得截留物；
[0011]2)以SM buffer洗脱截留物，并将洗脱液涂布至上层为副溶血弧菌BTXS2的3％Nacl LB双层平板上，培养24h；
[0012]3)选取噬菌斑并转移到SM buffer离心管中，离心，0.22μm滤膜过滤，得滤液；
[0013]4)将滤液梯度稀释后与副溶血弧菌BTXS2混合，并倾注到3％Nacl LB双层平板上，培养24h，选取噬菌斑；
[0014]5)重复步骤3)
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4)，至获得单一噬菌斑形态的纯净噬菌体。
[0015]作为本专利技术优选的技术方案，步骤1)中，所述过滤为以0.22μm滤膜过滤；所述离心为利用超滤离心管在4000rpm下离心10min；所述截留为以截留分子量为30KDa的生物膜截留。
[0016]作为本专利技术优选的技术方案，步骤3)中，所述离心为30000rpm下离心30min。
[0017]噬菌体VB_VpP_BT
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1011在对抗副溶血弧菌BTXS2中的应用
[0018]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术的技术效果是：
[0019](1)本专利技术分离得到一株具有广泛致病基因和多种耐药基因的副溶血弧菌BTXS2。
[0020](2)本专利技术中分离得到的副溶血弧菌噬菌体VB_VpP_BT
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1011，能有效抑制副溶血弧菌BTXS2的生长，并将其杀灭。
[0021](3)本专利技术涉及透射电镜(TEM)观察副溶血弧菌噬菌体VB_VpP_BT
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1011前的富集方法；
[0022](4)本专利技术提供了抗生素之外的干预细菌感染的方法，尤其是针对副溶血弧菌的致病性和抗生素耐药性；
[0023](5)本专利技术所提供的烈性副溶血弧菌噬菌体VB_VpP_BT
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1011在治疗副溶血弧菌感染性疾病中具有很多优势，首先其可对耐药菌也具有很好的防治效果；其次，由于噬菌体的杀菌谱较窄，在复杂细菌的环境中，例如动物肠道，发生杀菌作用时，不会对益生菌造成伤害；第三，其效价较高，防治效果好。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0025]图1为副溶血弧菌在弧菌选择培养基、光学显微镜和扫描电镜(SEM)下的形态图；其中，A为菌株BTXS2菌液在弧菌选择培养基上的菌落图；B为菌株BTXS2菌液在显色培养基上光学显微镜下的图；C和D为菌株BTXS2菌液在扫描电镜(SEM)下的形态图；
[0026]图2为该副溶血弧菌的抗生素抗性基因PCR验证研究图；M为marker，A为alas基因；B为carb
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18基因；C为mfd基因；D为mexl基因；
[0027]图3为噬菌斑形态、噬菌体在透射电镜(TEM)下的形态图；A为噬菌斑形态图；B为噬菌体在透射电镜(TEM)下的形态图；
[0028]图4为VB_VpP_BT
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1011噬菌体的一步生长曲线图；
[0029]图5为VB_VpP_BT
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1011噬菌体环境耐受结果图；A为pH值对噬菌体耐受的影响；B为盐度对噬菌体耐受的影响；C为温度对噬菌体耐受的影响；D为噬菌体的衰减曲线；
[0030]图6为VB_VpP_BT
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1011噬菌体对宿主菌的抑菌效果图。
具体实施方式
[0031]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0032]实施例中用到的噬菌体VB_VpP_BT
‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种噬菌体VB_VpP_BT
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1011，其特征在于，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2021年06月08日，保藏编号为CGMCC No.22379，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.一种噬菌体VB_VpP_BT
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1011的筛选方法，其特征在于，以副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)BTXS2对其进行筛选；所述副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)BTXS2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2021年06月08日，保藏编号为CGMCC No.22677，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。3.根据权利要求2所述的一种噬菌体VB_VpP_BT
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1011的筛选方法，其特征在于，以副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)BTXS2对噬菌体VB_VpP_BT
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1011进行筛选的具体过程包括：1)取水样，过滤、离心，截...

【专利技术属性】
技术研发人员：王景峰，邱志刚，杨晓波，谌志强，李辰宇，王尚，薛斌，赵辰，张曦，高超，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所，
类型：发明
国别省市：