一种猪圆环病毒的冻干保护剂及其在保藏中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种猪圆环病毒的冻干保护剂及其在保藏中的应用，属于兽医生物制品领域。上述猪圆环病毒的冻干保护剂，包括如下组分：麦芽糖醇1

【技术实现步骤摘要】
一种猪圆环病毒的冻干保护剂及其在保藏中的应用


[0001]本专利技术属于兽医生物制品领域，具体涉及一种猪圆环病毒的冻干保护剂及其在保藏中的应用。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)是迄今发现的一种最小动物病毒，是一种具有二十面体对称衣壳蛋白、无囊膜单股环状DNA病毒。1996年，加拿大学者从患断奶后仔猪多系统衰竭综合征的猪体内分离到PCV变异株，将其命名为PCV
‑
2；2000年，我国猪场首次发现了PCV
‑
2，该病原与多种疾病密切相关，如：猪皮炎肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征、猪增生性坏死性肺炎以及猪繁殖障碍、A2型先天性震颤等，该病毒是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的重要病原体，一旦发病，会给养猪行业带来巨大的经济损失。
[0003]目前，作为对全球养猪业具有重大威胁的主要疾病之一，防控PCV2的感染成为养猪产业的重中之重，其中疫苗免疫是最有效的防控手段之一，疫苗的质量的优劣成为是否有效防控的关键。另外，好的临床诊断关乎PCV
‑
2的监测与净化。当前，临床上诊断主要是PCV
‑
2夹心ELISA方法等，操作简单、易行，大大降低成本，其中需要用到PCV2作为阳性对照。在PCV
‑
2疫苗和试剂盒的制备中，PCV2病毒的保藏是一个重要环节，显著影响了疫苗的免疫效果和试剂盒检测的准确性、灵敏度。但是，现有技术中，猪圆环病毒在猪圆环病毒仅能2～8℃条件下保存，且保存期短，在高温环境下无法贮存，耐热稳定性差。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中，猪圆环病毒仅能2～8℃条件下保存，且保存期短，在高温环境下无法贮存，耐热稳定性差，本专利技术提供一种猪圆环病毒的冻干保护剂，能够有效提高猪圆环病毒在不同温度下贮存的稳定性。
[0005]本专利技术的另一目的是提供含有所述冻干保护剂在猪圆环病毒保藏中的应用。
[0006]本专利技术的目的采用如下技术方案实现。
[0007]一种猪圆环病毒的冻干保护剂，按质量百分含量包括如下组分：麦芽糖醇1
‑
10％，乳糖醇2
‑
10％，β
‑
葡聚糖0.01
‑
1％，海藻糖0.5
‑
6％，聚乙烯吡咯烷酮K30 1
‑
6％，甘氨酸0.5
‑
4％，脯氨酸1
‑
4％，丝氨酸0.2
‑
2％，余量为溶剂，pH为7.0～7.5。
[0008]在本专利技术中，所述溶剂为水、生理盐水或者缓冲液。
[0009]本专利技术还提供所述冻干保护剂的制备方法，包括如下步骤：
[0010](1)将麦芽糖醇、乳糖醇、β
‑
葡聚糖、海藻糖和聚乙烯吡咯烷酮K30溶于溶剂中，灭菌；
[0011](2)将甘氨酸、脯氨酸和丝氨酸溶于溶剂中，过滤除菌；
[0012](3)将步骤(1)和(2)所得溶液混合，调节pH至7.0～7.5，即得冻干保护剂。
[0013]本专利技术还提供所述冻干保护剂在猪圆环病毒保藏中的应用。
[0014]在所述应用中，是将猪圆环病毒液与所述冻干保护剂按照体积比为1～2：1混合均
匀后冻干。
[0015]在本专利技术中，所述猪圆环病毒液的病毒效价大于等于10
4.0
TCID
50
/mL。
[0016]在本专利技术中，冻干包括如下步骤：在常压下，以0.5～2℃/min的速度降温至
‑
40℃并维持1.5～3h；抽真空至90～110mTorr，升温至
‑
12～
‑
8℃并维持8～10h，之后升温至26～30℃，并在26～30℃维持3h。
[0017]有益效果：与现有技术相比，本专利技术用于猪圆环病毒的冻干保护剂成分简单、配制方便，能够显著提高其在高温环境下的保存期限，在2～8℃下保存21个月，效价损失≤1.0个滴度；在37℃下保存1个月，效价损失≤1.0个滴度；置于45℃保存至25天，效价损失≤1.0个滴度。因此，本专利技术冻干保护剂可以应用于猪圆环病毒的稳定保藏中，从而将稳定保藏后的病毒应用于疫苗和检测试剂盒的制备中，显著降低生产成本和程序。
附图说明
[0018]图1显示了2～8℃时各冻干保护剂对PCV2的保护效果，横坐标为保藏时间，单位是月，纵坐标是病毒含量，单位是TCID
50
/ml。
[0019]图2显示了37℃时冻干保护剂对PCV2的保护效果，横坐标为保藏时间，单位是天，纵坐标是病毒含量，单位是TCID
50
/ml。
[0020]图3显示了显示了45℃时冻干保护剂对PCV2的保护效果，横坐标为保藏时间，单位是天，纵坐标是病毒含量，单位是TCID
50
/ml。
具体实施方式
[0021]以下实施例中的猪圆环2型病毒液是将猪圆环2型病毒采用细胞增殖，反复冻融后所得。
[0022]下面结合附图对本专利技术作更进一步的说明。
[0023]本专利技术中的β
‑
葡聚糖，数均分子量为2.7
×
105，购买自sigma。
[0024]实施例1冻干保护剂1及相应的猪圆环病毒冻干样品
[0025]冻干保护剂1，由以下质量百分含量的组分组成：麦芽糖醇2％，乳糖醇8％，β
‑
葡聚糖0.01％，海藻糖5％，聚乙烯吡咯烷酮K30 2％，甘氨酸1％，脯氨酸1％，丝氨酸0.4％，余量为注射用水。
[0026]冻干保护剂1的制备方法包括如下步骤：
[0027](1)称取麦芽糖醇、乳糖醇、β
‑
葡聚糖、海藻糖和聚乙烯吡咯烷酮K30充分溶解于注射用水中，高压蒸汽灭菌法灭菌15min，灭菌过程中控制温度为115℃，备用；
[0028](2)称取甘氨酸、脯氨酸和丝氨酸充分溶解于注射用水中，用孔径为0.22μm的滤膜过滤除菌后备用；
[0029](3)将步骤(1)和(2)制得的溶液于无菌条件下按照体积比为1:1混合，通过无菌稀盐酸和/或氢氧化钠调节pH至7.0，即得冻干保护剂1。
[0030]将猪圆环2型病毒液(10
6.6
TCID
50
/mL)与冻干保护剂1按照体积比1:1混合均匀后，分装至西林瓶中，2mL/瓶，采用冻干机冻干。冻干步骤如下：在常压下以1℃/min的速度降温至
‑
40℃，在
‑
40℃维持2h；抽真空至100mTorr(毫托)，升温至
‑
10℃，在
‑
10℃维持9h，然后升温至28℃，并在28℃维持3h，即得猪圆环病毒冻干样品1。
[0031]实施例2冻干保护剂2及相应的猪圆环病毒冻干样品
[0032]冻干保护剂2，由以下质量百分含量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒的冻干保护剂，按质量百分含量包括如下组分：麦芽糖醇1
‑
10％，乳糖醇2
‑
10％，β
‑
葡聚糖0.01
‑
1％，海藻糖0.5
‑
6％，聚乙烯吡咯烷酮K30 1
‑
6％，甘氨酸0.5
‑
4％，脯氨酸1
‑
4％，丝氨酸0.2
‑
2％，余量为溶剂，pH为7.0～7.5。2.根据权利要求2所述冻干保护剂，其特征在于所述溶剂为水、生理盐水或者缓冲液。3.权利要求1所述冻干保护剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将麦芽糖醇、乳糖醇、β
‑
葡聚糖、海藻糖和聚乙烯吡咯烷酮K30溶于溶剂中，灭菌；(2)将甘氨酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：左晓昕，吕芳，冯磊，赵艳红，卢宇，邓碧华，王军宁，揭鸿英，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：