食蟹猴血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种食蟹猴血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法，包括下列步骤：采用液相色谱-质谱联用法，对经处理的食蟹猴血浆中的COVID-19潜在治疗药物进行分析检测；其中，所述的COVID-19潜在治疗药物为(S)-2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸-2-乙基丁基酯。本发明专利技术能够快速、简便地测定食蟹猴血浆中的COVID-19潜在治疗药物。19潜在治疗药物。19潜在治疗药物。

【技术实现步骤摘要】
99％，流动相B的体积百分比为1％-10％；从初始状态到1.50
±
0.50min的时间段内，流动相A的体积百分比逐渐降到1％-10％，流动相B的体积百分比逐渐升高到90％-99％，在1.50
±
0.50min到2.50
±
0.50min的时间段内，流动相A的体积百分比维持在1％-10％，流动相B的体积百分比维持在90％-99％；在2.50
±
0.50min到2.51
±
0.50min的时间段内，流动相A的体积百分比逐渐升高到90％-99％，流动相B的体积百分比逐渐降低到1％-10％；在2.51
±
0.50min到3.00
±
0.50min的时间段内，流动相A的体积百分比维持在90％-99％，流动相B的体积百分比维持在1％-10％。(上述流动相A和B的体积百分比以流动相A和B的总体积为基准)
[0011]在一个具体的实例中，所述的梯度洗脱的程序为：初始状态时，流动相A的体积百分比为95％，流动相B的体积百分比为5％；从初始状态到1.50min的时间段内，流动相A的体积百分比逐渐降到5％，流动相B的体积百分比逐渐升高到95％，在1.50min到2.50min的时间段内，流动相A的体积百分比维持在5％，流动相B的体积百分比维持在95％；在2.50min到2.51min的时间段内，流动相A的体积百分比逐渐升高到95％，流动相B的体积百分比逐渐降低到5％；在2.51min到3.00min的时间段内，流动相A的体积百分比维持在95％，流动相B的体积百分比维持在5％。(上述流动相A和B的体积百分比以流动相A和B的总体积为基准)
[0012]本专利技术中，所述食蟹猴血浆是指未经处理的食蟹猴血浆；经过处理的食蟹猴血浆成为经处理的食蟹猴血浆。
[0013]较佳地，所述的蛋白沉淀法中的沉淀剂为乙腈。
[0014]较佳地，所述的食蟹猴血浆是食蟹猴EDTA-K2血浆。
[0015]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法为LC-MS/MS方法。
[0016]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法中的进样量为1～10μL，优选2μL。
[0017]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法中柱温为20℃～30℃，优选25℃。
[0018]较佳地，所述的流动相A和流动相B的总流速为0.5mL/min。
[0019]在一个具体的实例中，流动相A为体积浓度为0.1％的甲酸水溶液。
[0020]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法中，分别对经处理的标准曲线样品、经处理的质控样品和经处理的食蟹猴血浆样品进行检测；其中，所述的所述的经处理的标准曲线样品为经蛋白沉淀法处理的标准曲线样品；所述的经处理的质控样品为经蛋白沉淀法处理的质控样品；所述的标准曲线样品、质控样品和食蟹猴血浆样品中均加入内标工作液。
[0021]本专利技术中，所述标准曲线样品是指未经处理的标准曲线样品；经过处理的标准曲线样品成为经处理的标准曲线样品。所述质控样品是指未经处理的质控样品；经过处理的质控样品成为经处理的质控样品。
[0022]更佳地，所述的蛋白沉淀法中的蛋白沉淀剂为乙腈。
[0023]更佳地，所述的蛋白沉淀法包括将标准曲线样品、质控样品或食蟹猴血浆样品与蛋白沉淀剂混合，离心，取上清液。
[0024]更佳地，所述的标准曲线样品的配制方法，包括下列步骤：
[0025]步骤1：将COVID-19潜在治疗药物标准品与稀释液混合，得到标准品储备液；
[0026]步骤2：将标准品储备液与稀释液混合，得到具有浓度梯度的多个标准品工作液；
[0027]步骤3：将标准品工作液与空白血浆混合，得到标准曲线样品；
[0028]和/或，所述的质控样品的配制方法，包括下列步骤：
[0029]步骤a：将COVID-19潜在治疗药物标准品与稀释液混合，得到质控储备液；
[0030]步骤b：将质控储备液与稀释液混合，得到具有浓度梯度的多个质控工作液；
[0031]步骤c：将质控工作液与空白血浆混合，得到质控样品；
[0032]和/或，所述的内标工作液的配制方法，包括下列步骤：
[0033]步骤I：将甲苯磺丁脲标准品与稀释液混合，得到内标储备液；
[0034]步骤II：将内标储备液与稀释液混合，得到内标工作液。
[0035]更佳地，所述的步骤1、a和I中的稀释液为DMSO，步骤2、b和II中的稀释液为体积浓度为30％～70％的甲醇水溶液。进一步地，所述的步骤2、b和II中的稀释液最佳为体积浓度为50％的甲醇水溶液。
[0036]更佳地，所述标准品工作液的浓度梯度依次为80ng/mL,200ng/mL,1000ng/mL,2000ng/mL,5000ng/mL,10000ng/mL,20000ng/mL,80000ng/mL。
[0037]更佳地，所述质控工作液的浓度梯度依次为240ng/mL,3000ng/mL和60000ng/mL。
[0038]更佳地，所述的内标工作液的浓度为1000ng/mL。
[0039]更佳地，所述的标准曲线样品的浓度为4ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL和4000ng/mL。
[0040]更佳地，所述的质控样品的浓度为12ng/mL、150ng/mL和3000ng/mL。
[0041]本专利技术中，空白血浆是指不含COVID-19潜在治疗药物和内标工作液的血浆。
[0042]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
[0043]本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
[0044]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0045]1、本专利技术开发了COVID-19潜在治疗药物在食蟹猴血浆样品中的检测方法，该方法能够快速、简便地测定食蟹猴血浆中的COVID-19潜在治疗药物的浓度，从而可以用于分析COVID-19潜在治疗药物在食蟹猴体中的药代/毒代动力学。
[0046]2、本专利技术所采取前处理方法为蛋白沉淀法，该方法较常用的萃取的方法流程更为简单、用时短且易操作；本专利技术采用了液相色谱串联质谱法，利用合适的流动相以及梯度洗脱程序，在运行时间的中间部分提高了甲醇的比例，使得峰型良好，使标准曲线线性精准，保证了检测的准确性和可靠性，同时，本专利技术所需的样本进样量小，所需的分析时间较短；因此本专利技术能够保证在较短的分析时间里获得更准确、高精密度、高灵敏度的检测数据，为非临床试验生物样品的分析奠定了夯实的基础。
附图说明
[0047]图1为标准曲线定量下限(4ng/mL)图谱(COVID-19潜在治疗药物保留时间1.86min)；
[0048]图2为标准曲线定量下限图谱(甲苯磺丁脲保留时间1.77min)；
[0049]图3为标准曲线定量上限(4000ng本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种食蟹猴血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法，其特征在于，包括下列步骤：采用液相色谱-质谱联用法，对经处理的食蟹猴血浆中的COVID-19潜在治疗药物进行分析检测；其中，所述的COVID-19潜在治疗药物为(S)-2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸-2-乙基丁基酯；所述的经处理的食蟹猴血浆为经蛋白沉淀法处理的食蟹猴血浆；所述的液相色谱-质谱联用法中采用梯度洗脱，所述的梯度洗脱中流动相A为体积浓度为0.01％～0.5％的甲酸水溶液，流动相B为甲醇。2.如权利要求1所述的食蟹猴血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法，其特征在于，所述的梯度洗脱的程序为：初始状态时，所述流动相A的体积百分比为90％-99％，所述流动相B的体积百分比为1％-10％；从初始状态到1.50
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0.50min的时间段内，所述流动相A的体积百分比逐渐降到1％-10％，所述流动相B的体积百分比逐渐升高到90％-99％，在1.50
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0.50min到2.50
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0.50min的时间段内，所述流动相A的体积百分比维持在1％-10％，所述流动相B的体积百分比维持在90％-99％；在2.50
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0.50min到2.51
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0.50min的时间段内，所述流动相A的体积百分比逐渐升高到90％-99％，所述流动相B的体积百分比逐渐降低到1％-10％；在2.51
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0.50min到3.00
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0.50min的时间段内，所述流动相A的体积百分比维持在90％-99％，所述流动相B的体积百分比维持在1％-10％。3.如权利要求1所述的食蟹猴血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法，其特征在于，所述的梯度洗脱的程序为：初始状态时，所述流动相A的体积百分比为95％，所述流动相B的体积百分比为5％；从初始状态到1.50min的时间段内，所述流动相A的体积百分比逐渐降到5％，所述流动相B的体积百分比逐渐升高到95％，在1.50min到2.50min的时间段内，所述流动相A的体积百分比维持在5％，所述流动相B的体积百分比维持在95％；在2.50min到2.51min的时间段内，所述流动相A的体积百分比逐渐升高到95％，所述流动相B的体积百分比逐渐降低到5％；在2.51min到3.00min的时间段内，所述流动相A的体积百分比维持在95％，所述流动相B的体积百分比维持在5％。4.如权利要求1所述的食蟹猴血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法，其特征在于，所述的蛋白沉淀法中的沉淀剂为乙腈。5.如权利要求1所述的食蟹猴血浆中COVI...

【专利技术属性】
技术研发人员：缪峰，刘洁，季金风，邢溪溪，陶庭磊，周叶兰，耿家豪，季中秋，郭文静，陈淑敏，谢一帆，
申请(专利权)人：海口市制药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：