本发明专利技术公开了一种大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法，其包含以下步骤：采用液相色谱-质谱联用法，对经处理的大鼠血浆进行分析检测，即可；大鼠血浆的稳定剂为敌敌畏；COVID-19潜在治疗药物为(S)-2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸-2-乙基丁基酯。本发明专利技术的检测方法，简单、用时短且易操作；所需的样本进样量小，所需的分析时间较短。所需的分析时间较短。所需的分析时间较短。
【技术实现步骤摘要】
大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法
[0001]本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法。
技术介绍
[0002]2019年末，由2019新型冠状病毒(2019-nCoV)感染导致的新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)疫情暴发。该病毒传播迅速，传染性强，人群普遍易感，疫情很快成为全球关注的焦点，而在全球范围内，尚无批准的针对COVID-19的治疗方法，抗新冠病毒药物的研发迫在眉睫。
[0003]根据已上市药物以及相关的数据库进行了药物筛选，迅速发现了30种可能对COVID-19有治疗作用的药物，其中包括瑞德西韦(remdesivir)、沙奎那韦(Saquinavir)、洛匹那韦(Lopinavir)、卡非佐米(Carfilzomib)、利托那韦以及磷酸氯喹(Chloroquine Phosphate)等药物，此类药物大多可以阻止病毒RNA合成以抑制病毒复制，相关细胞水平的试验表明此类药物可以有效的在细胞水平上抑制COVID-19的感染，但其在人体上的作用还有待临床验证。根据国家食品药品监督管理总局规定，新药在临床验证前需相应的非临床试验数据支持。因此，有关针对COVID-19潜在治疗药物的非临床安全评价工作尤为重要，其在不同动物模型中药物代谢以及毒理的方法准确性是其在进入临床试验中的重要安全保障。
[0004]目前，针对新冠病毒的相关潜在治疗药物主要是小分子药物，而小分子药物(分子量200～700)的代谢常用色谱法进行测定，方法开发过程中主要对所使用的溶剂和试剂、基质以及配制和处理步骤进行筛选，从而形成精确测定的方法。因此，COVID-19潜在治疗药物临床前检测方法的开发至关重要。
技术实现思路
[0005]本专利技术提供一种大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法。本专利技术的方法能够快速、简便地检测大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物。
[0006]本专利技术是通过以下方案来解决技术问题的：
[0007]一种大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法，其包含以下步骤：
[0008]采用液相色谱-质谱联用法，对经处理的大鼠血浆进行分析检测，即可；
[0009]所述大鼠血浆的稳定剂为敌敌畏；
[0010]所述COVID-19潜在治疗药物为(S)-2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸-2-乙基丁基酯。
[0011]本专利技术中，所述大鼠血浆是指仅添加稳定剂的大鼠血浆；经过处理的大鼠血浆成为经处理的大鼠血浆。本专利技术中，所述大鼠血浆一般是指大鼠EDTA-K2血浆。
[0012]本专利技术中，所述大鼠可为SD大鼠。
[0013]本专利技术中，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱的柱温较佳地为20～30℃，例如25℃。
[0014]本专利技术中，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱的进样量可为1～10μL，例如2μL。
[0015]本专利技术中，较佳地，所述经处理的大鼠血浆采用蛋白沉淀法对所述大鼠血浆进行处理。所述蛋白沉淀法采用的蛋白沉淀剂较佳地为甲醇或乙腈。
[0016]其中，所述处理可包括：将所述大鼠血浆、内标物和所述蛋白沉淀剂混合后，取上清液即可。
[0017]所述内标物可为甲苯磺丁脲。
[0018]本专利技术中，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱的设备可为本领域常规。所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱的色谱柱固定相可为十八烷基键合硅胶；例如，Poroshell 120SB-C18。所述色谱柱的规格可为本领域常规，例如2.1
×
50mm，2.7μm。
[0019]本专利技术中，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱采用的流动相可为极性有机溶剂和甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积百分含量为0.01％～0.5％，例如0.1％的甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸体积百分含量的计算方法为甲酸的体积占水的体积的比例。
[0020]其中，所述极性有机溶剂较佳地为甲醇或乙腈。
[0021]其中，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱可采用梯度洗脱，所述梯度洗脱时所述甲酸水溶液与所述极性有机溶剂的体积比可为95：5～5：95。
[0022]其中，所述梯度洗脱中，所述流动相比例随时间的变化范围可如表1所示：
[0023]表1
[0024]时间(min)甲酸水溶液(％)(流动相A)极性有机溶剂(％)(流动相B)0～1.59551.5(不包括1.5)～2.55952.5(不包括2.5)～2.515
→
9595
→
52.5(不包括2.51)～3955
[0025]其中，所述的梯度洗脱程序为：从初始状态到1.5min的时间段内，流动相A的体积百分比为95％，流动相B的体积百分比为5％，在1.5min到2.5min的时间段内，流动相A的体积百分比改变为5％，流动相B的体积百分比改变为95％；在2.5min到2.51min的时间段内，流动相A的体积百分比逐渐升高到95％，流动相B的体积百分比逐渐降低到5％；在2.51min到3.00min的时间段内，流动相A的体积百分比维持在95％，流动相B的体积百分比维持在5％。(上述流动相A和B的体积百分比以流动相A和B的总体积为基准)。
[0026]其中，所述流动相的总流速为0.5mL/min。
[0027]本专利技术中，所述液相色谱-质谱联用法中的质谱设备可为本领域常规，例如型号为AB SCIEX TRIPLE QUAD
TM 4500的质谱仪。
[0028]本专利技术中，较佳地，对所述大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物检测之前，还需分析所述检测方法的专属性，分析所述检测方法的专属性的步骤包括：
[0029]步骤(1)、分别配制一定浓度梯度的所述COVID-19潜在治疗药物的标准品工作液和质控工作液，再配制一定浓度的内标工作液；
[0030]步骤(2)、将所述标准品工作液和所述质控工作液分别与大鼠空白血浆混合，即得标准品样品溶液和质控样品溶液；
[0031]步骤(3)、样品溶液处理步骤：分别将所述标准品样品溶液和所述质控样品溶液，与所述内标工作液混合后，取上清液；
[0032]步骤(4)、将所述上清液进样，进行液相色谱-质谱检测，测得所述COVID-19潜在治疗药物与所述内标工作液中的内标物的峰面积比；
[0033]步骤(5)、根据所述标准品工作液中的COVID-19潜在治疗药物与所述内标工作液中的内标物的峰面积比和相应的所述标准品工作液的浓度，得到回归方程；
[0034]步骤(6)、将步骤(4)中的峰面积比代入步骤(5)中得到的回归方程，计算得回算浓度；当至少67％的质控样品所述回算浓度(本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物的检测方法，其特征在于，其包含以下步骤：采用液相色谱-质谱联用法，对经处理的大鼠血浆进行分析检测，即可；所述大鼠血浆中的稳定剂为敌敌畏；所述COVID-19潜在治疗药物为(S)-2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸-2-乙基丁基酯。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述大鼠为SD大鼠；和/或，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱的柱温为20～30℃，例如25℃；和/或，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱的进样量为1～10μL，例如2μL；和/或，所述经处理的大鼠血浆采用蛋白沉淀法对所述大鼠血浆进行处理。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白沉淀法采用的蛋白沉淀剂为甲醇或乙腈；和/或，所述处理包括：将所述大鼠血浆、内标物和所述蛋白沉淀剂混合后，取上清液即可；较佳地，所述内标物为甲苯磺丁脲。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱的色谱柱固定相为十八烷基键合硅胶；和/或，所述色谱柱的规格为2.1
×
50mm，2.7μm；和/或，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱采用的流动相为极性有机溶剂和甲酸水溶液；所述甲酸水溶液中甲酸的体积百分含量为0.01％～0.5％，例如0.1％的甲酸水溶液；和/或，所述液相色谱-质谱联用法中的质谱设备为型号AB SCIEX TRIPLE QUAD
TM
4500的质谱仪。5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述极性有机溶剂为甲醇或乙腈；和/或，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱采用梯度洗脱，所述梯度洗脱时所述甲酸水溶液与所述极性有机溶剂的体积比为95：5～5：95；和/或，所述流动相的总流速为0.5mL/min。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱中，所述流动相比例随时间的变化范围下表1所示：表1时间(min)甲酸水溶液(％)极性有机溶剂(％)0～1.59551.5(不包括1.5)～2.55952.5(不包括2.5)～2.515
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9595
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52.5(不包括2.51)～3955。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，对所述大鼠血浆中COVID-19潜在治疗药物检测之前，还需分析所述检测方法的专属性，分析所述检测方法的专属性的步骤包括：步骤(1)、分别配制一定浓度梯度的所述COVID-19潜在治...
【专利技术属性】
技术研发人员：季金风，刘洁，邱云良，缪峰，陶庭磊，周叶兰，耿家豪，季中秋，郭文静，陈淑敏，谢一帆，
申请(专利权)人：海口市制药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：
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