COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其包括下列步骤：采用液相色谱-质谱联用法，对经处理的食蟹猴血浆中的COVID-19潜在治疗药物代谢物进行分析检测；其中，所述COVID-19潜在治疗药物代谢物为(2R,3R,4S,5R)-2-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-甲腈；所述的经处理的食蟹猴血浆为经蛋白沉淀法处理的食蟹猴血浆；所述的蛋白沉淀法中的蛋白沉淀剂为甲醇。本发明专利技术能够快速、简便地检测食蟹猴血浆中COVID-19潜在治疗药物代谢物。19潜在治疗药物代谢物。19潜在治疗药物代谢物。

【技术实现步骤摘要】
COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法。

技术介绍

[0002]2019年末，由2019新型冠状病毒(2019-nCoV)感染导致的新型冠状病毒肺炎(Novel coronavirus pneumonia，COVID-19)疫情暴发。该病毒传播迅速，传染性强，人群普遍易感，疫情很快成为全球关注的焦点。然而在全球范围内，尚无批准的针对COVID-19的治疗方法，抗新冠病毒药物的研发迫在眉睫。
[0003]瑞德西韦(remdesivir，RDV，GS5734)是由美国吉利德科学公司研发的一种抗病毒药物，最初设计用于治疗埃博拉病毒引发的出血热等疾病，由于其在体内外表现出了良好的广谱抗病毒作用而受到社会关注。
[0004]研究表明，作为一种核苷类似物，RDV通过宿主活性细胞代谢为具有药理活性的三磷酸代谢物后，竞争性抑制天然核苷三磷酸(NTP)加入病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)，阻止病毒RNA合成以抑制病毒复制。因此，大多COVID-19潜在治疗药物是通过代谢物的作用使其具有药理活性，在研究COVID-19潜在治疗药物的血药浓度变化的同时，对其代谢物的血药浓度检测也尤为重要。
[0005]近年来随着科研工作者对新药安全评价方法的深入研究，色谱法已经广泛应用于大量的小分子药物代谢检测中，方法开发过程中主要对所使用的溶剂和试剂、基质以及配制和处理步骤进行筛选，从而形成精确测定的方法。因此，COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法的开发至关重要。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法。本专利技术的方法能够快速、简便地检测食蟹猴血浆中COVID-19潜在治疗药物代谢物。
[0007]本专利技术提供了一种COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其包括下列步骤：
[0008]采用液相色谱-质谱联用法，对经处理的食蟹猴血浆中的COVID-19潜在治疗药物代谢物进行分析检测；其中，所述COVID-19潜在治疗药物代谢物为(2R,3R,4S,5R)-2-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-甲腈；
[0009]所述的经处理的食蟹猴血浆为经蛋白沉淀法处理的食蟹猴血浆；所述的蛋白沉淀法中的蛋白沉淀剂为甲醇。
[0010]本专利技术中，所述食蟹猴血浆是指未经处理的食蟹猴血浆；经过处理的食蟹猴血浆成为经处理的食蟹猴血浆。
[0011]较佳地，所述的食蟹猴血浆是食蟹猴EDTA-K2血浆。
[0012]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法为LC-MS/MS方法。
[0013]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法中的进样量为1～10μL，优选2μL。
[0014]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法中柱温为20℃～30℃，优选25℃。
[0015]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法中采用梯度洗脱，所述的梯度洗脱中流动相A为体积浓度为0.01％～0.5％的甲酸水溶液，流动相B为甲醇。在一个具体的实例中，流动相A为浓度为体积浓度为0.1％的甲酸水溶液。
[0016]更佳地，所述梯度洗脱时所述流动相A与流动相B的体积比可为95：5～5：95。
[0017]更佳地，所述的梯度洗脱程序为：初始状态时，流动相A的体积百分比为95％，流动相B的体积百分比为5％；从初始状态到1.5min的时间段内，流动相A的体积百分比逐渐降到5％，流动相B的体积百分比逐渐升高到95％，在1.5min到2.5min的时间段内，流动相A的体积百分比维持在5％，流动相B的体积百分比维持在95％；在2.5min到2.51min的时间段内，流动相A的体积百分比逐渐升高到95％，流动相B的体积百分比逐渐降低到5％；在2.51min到3min的时间段内，流动相A的体积百分比维持在95％，流动相B的体积百分比维持在5％。(上述流动相A和B的体积百分比以流动相A和B的总体积为基准)
[0018]更佳地，所述的流动相A和流动相B的总流速为0.5mL/min。
[0019]较佳地，所述的液相色谱-质谱联用法中，分别对经处理的标准曲线样品、经处理的质控样品和经处理的食蟹猴血浆样品进行检测；其中，所述的经处理的标准曲线样品为经蛋白沉淀法处理的标准曲线样品；所述的经处理的质控样品为经蛋白沉淀法处理的质控样品；所述的标准曲线样品、质控样品和食蟹猴血浆样品中均加入内标工作液。
[0020]本专利技术中，所述标准曲线样品是指未经处理的标准曲线样品；经过处理的标准曲线样品成为经处理的标准曲线样品。所述质控样品是指未经处理的质控样品；经过处理的质控样品成为经处理的质控样品。
[0021]更佳地，所述的蛋白沉淀法中的蛋白沉淀剂为甲醇。
[0022]更佳地，所述的蛋白沉淀法包括将标准曲线样品、质控样品或食蟹猴血浆样品与蛋白沉淀剂混合，离心，取上清液。
[0023]更佳地，所述的标准曲线样品的配制方法，包括下列步骤：
[0024]步骤1：将COVID-19潜在治疗药物代谢物标准品与稀释液混合，得到标准品储备液；
[0025]步骤2：将标准品储备液与稀释液混合，得到具有浓度梯度的多个标准品工作液；
[0026]步骤3：将标准品工作液与空白血浆混合，得到标准曲线样品；
[0027]和/或，所述的质控样品的配制方法，包括下列步骤：
[0028]步骤a：将COVID-19潜在治疗药物代谢物标准品与稀释液混合，得到质控储备液；
[0029]步骤b：将质控储备液与稀释液混合，得到具有浓度梯度的多个质控工作液；
[0030]步骤c：将质控工作液与空白血浆混合，得到质控样品；
[0031]和/或，所述的内标工作液的配制方法，包括下列步骤：
[0032]步骤I：将甲苯磺丁脲标准品与稀释液混合，得到内标储备液；
[0033]步骤II：将内标储备液与稀释液混合，得到内标工作液。
[0034]更佳地，所述的步骤1、a和I中的稀释液为DMSO，步骤2、b和II中的稀释液为体积浓度为30％～70％的甲醇水溶液。进一步地，所述的步骤2、b和II中的稀释液最佳为体积浓度为50％的甲醇水溶液。
[0035]更佳地，所述的标准品工作液的浓度梯度依次为2μg/mL、5μg/mL、25μg/mL、50μg/
mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、2000μg/mL。
[0036]更佳地，所述质控工作液的浓度梯度依次为75μg/mL、1500μg/mL、3000μg/mL。
[0037]更佳地，所述的内标工作液的浓度为1000ng/mL。
[0038]更佳地，所述的标准曲线样品的浓度为100ng/mL、250ng/mL、1250ng/mL、2500ng/mL、6250ng/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其特征在于，包括下列步骤：采用液相色谱-质谱联用法，对经处理的食蟹猴血浆中的COVID-19潜在治疗药物代谢物进行分析检测；其中，所述COVID-19潜在治疗药物代谢物为(2R,3R,4S,5R)-2-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-甲腈；所述的经处理的食蟹猴血浆为经蛋白沉淀法处理的食蟹猴血浆；所述的蛋白沉淀法中的蛋白沉淀剂为甲醇。2.如权利要求1所述的COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其特征在于，所述的液相色谱-质谱联用法中的进样量为1～10μL，优选2μL。3.如权利要求1所述的COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其特征在于，所述的液相色谱-质谱联用法中柱温为20℃～30℃，优选25℃。4.如权利要求1所述的COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其特征在于，所述的液相色谱-质谱联用法中采用梯度洗脱，所述的梯度洗脱中流动相A为体积浓度为0.01％～0.5％的甲酸水溶液，流动相B为甲醇；优选地，所述的流动相A为浓度为体积浓度为0.1％的甲酸水溶液。5.如权利要求4所述的COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱时所述流动相A与流动相B的体积比为95：5～5：95。6.如权利要求4所述的COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其特征在于，所述的梯度洗脱程序为：初始状态时，所述流动相A的体积百分比为95％，所述流动相B的体积百分比为5％；从初始状态到1.5min的时间段内，所述流动相A的体积百分比逐渐降到5％，所述流动相B的体积百分比逐渐升高到95％，在1.5min到2.5min的时间段内，所述流动相A的体积百分比维持在5％，所述流动相B的体积百分比维持在95％；在2.5min到2.51min的时间段内，所述流动相A的体积百分比逐渐升高到95％，所述流动相B的体积百分比逐渐降低到5％；在2.51min到3min的时间段内，所述流动相A的体积百分比维持在95％，所述流动相B的体积百分比维持在5％。7.如权利要求4所述的COVID-19潜在治疗药物代谢物的检测方法，其特征在于，所述的流动相A和流动相B的总流速为0.5mL/min。8.如权利要求1所述的COVID-19...

【专利技术属性】
技术研发人员：缪峰，刘洁，季金风，邢溪溪，陶庭磊，周叶兰，耿家豪，季中秋，郭文静，谢一帆，
申请(专利权)人：海口市制药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：