人源抗新型冠状病毒SARS-CoV-2中和性抗体SK1及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程抗体技术领域，具体涉及人源抗新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
人源抗新型冠状病毒SARS
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CoV
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2中和性抗体SK1及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程抗体
，具体涉及人源抗新型冠状病毒SARS
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CoV
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2中和性抗体SK1及其应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID
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19)，简称“新冠肺炎”，是指2019新型冠状病毒感染导致的肺炎。
[0003]利用含有特异性抗体的人源或动物血清免疫球蛋白来预防和治疗传染病的方法由来已久。单克隆抗体的体外抗病毒中和活性和体内保护机体抵抗病毒攻击的活性已获得许多实验证明，如汉坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、狂犬病毒等中和性单克隆抗体可以在体内100％保护动物免受病毒攻击。
[0004]免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)作为抗体成分主要来自捐献者(恢复期病人)的免疫血清，从获得阳性血清到通过安全性检测耗时较长，且需投入大量的人力和财力，这就使其大量制备受到限制，同时由于抗体主要来源于血清，因此容易发生血源性传播疾病的感染。而使用人源基因工程产品替代血制品则可克服这些缺陷。人源基因工程抗体研究的不断深入为该领域生物制品发展带来了新希望和广阔前景。
[0005]90年代初兴起的噬菌体展示技术(Phage Display Techniques)和整个基因工程抗体技术研究领域的发展，极大促进了人源或基因工程抗体的开发研究，并已由基础研究阶段步入实质性应用研究和开发阶段。人源抗病毒基因工程抗体，尤其是人源全抗体的研究成功，给各种病毒性传染病的特异性预防和治疗开辟了新思路，并在抗病毒感染生物医药领域中逐渐开发出一类新的抗病毒药。
[0006]鉴于SARS
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2病毒的传染性和致病性，开发针对SARS
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2刺突蛋白的特异性抗体对于疾病的临床治疗和诊断试剂的研发和应用均具有重要的意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种人源抗新型冠状病毒SARS
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2中和性抗体SK1及其应用。
[0008]本专利技术利用噬菌体展示技术，通过采集多个SARS
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2病人恢复期外周血淋巴细胞，利用基因工程方法构建了人源抗SARS
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2病毒基因工程抗体文库，并筛选获得特异性抗SARS
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2病毒的基因工程抗体Fab片段。该抗体是由存在于抗体轻链和重链可变区中的高变区(CDRs)的特异性序列决定的，并能够在原核细胞中获得有效表达的特异性结合SARS
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2病毒的功能性抗体。该抗体能够特异性识别SARS
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2病毒颗粒抗原，与SARS
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2具有明显的酶联免疫(ELISA)反应和抗SARS
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2病毒感染的中和活性功能。
[0009]具体地，本专利技术提供以下技术方案：
[0010]本专利技术提供人源抗SARS
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2病毒中和性抗体SK1，所述抗体SK1的轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1
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3所示，重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨
基酸序列如SEQ ID No.4
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6所示。
[0011]抗体SK1的轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列和重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列具体如表1所示。
[0012]表1 抗体CDR的氨基酸序列
[0013][0014]抗体SK1特异性的轻链和重链可变区基因来源于对人源抗SARS
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2病毒抗体基因库的特异性富积筛选，该抗体库的建立来源于中国SARS
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2病毒病人外周血淋巴细胞基因。其轻链和重链可变区相应的三个CDR区序列组合及其CDR区之间的框架区序列构成了该抗体可变区序列特征，SK1属于抗体轻链家族VK1。抗体蛋白功能由存在于抗体基因轻链和重链可变区的决定簇互补区CDR1、CDR2和CDR3中特异性序列所决定，6个相应的CDR区氨基酸序列构成了抗体的特异性抗原结合区域，决定了本专利技术抗体的抗原结合特征以及抗SARS
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2病毒功能特征。
[0015]优选地，本专利技术所述的抗体SK1的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示。
[0016]本专利技术还提供编码所述人源抗SARS
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2病毒中和性抗体SK1的核酸。
[0017]考虑到密码子的简并性，例如可在其编码区，在不改变氨基酸序列的条件下，对编码上述Fab片段抗体的基因序列进行改造，获得编码具有相同功能的抗体的基因。本领域技术人员可以根据表达抗体宿主的密码子偏爱性，人工合成改造基因，以提高抗体的表达效率。
[0018]作为本专利技术的一种实施方式，编码抗体SK1的轻链可变区和重链可变区的核酸的核苷酸序列分别如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示。
[0019]本专利技术还提供一种生物材料，其包含编码所述人源抗SARS
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2病毒中和性抗体SK1的核酸。
[0020]优选地，所述生物材料为选自表达盒、载体、宿主细胞或细胞系中的一种。
[0021]其中，所述载体包括但不限于克隆载体、表达载体，可为质粒载体、病毒载体、转座子等载体。
[0022]所述宿主细胞或细胞系可以为来源于微生物或动物的细胞或细胞系。
[0023]本专利技术还提供由所述人源抗SARS
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2病毒中和性抗体SK1经改造得到的单链抗体ScFv、Fab抗体、全抗体免疫球蛋白IgG或标记复合物。
[0024]将本专利技术提供的上述Fab抗体的轻链可变区和重链可变区进行重组，获得分子量更小的单链抗体(ScFv)，该抗体同样能够特异性识别SARS
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2病毒表面抗原，具有细胞内免疫的作用。单链抗体穿透力强，易于进入局部组织发挥作用。
[0025]具体地，可将上述编码Fab抗体的基因、ScFv基因克隆到表达载体中，进而转化宿主，通过诱导表达获得Fab抗体以及单链抗体。
[0026]此外，可将上述Fab抗体的轻链编码基因和重链编码基因克隆到全本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人源抗SARS
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2病毒中和性抗体SK1，其特征在于，所述抗体SK1的轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1
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3所示，重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.4
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6所示。2.根据权利要求1所述的人源抗SARS
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CoV
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2病毒中和性抗体SK1，其特征在于，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示。3.编码权利要求1或2所述的人源抗SARS
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CoV
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2病毒中和性抗体SK1的核酸。4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，编码轻链可变区和重链可变区的核酸的核苷酸序列分别如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示。5.生物材料，其特征在于，其包含权利要求3或4所述的核酸；优选地，所述生物材料为选自表达盒、载体、宿主细胞或细胞系中的一种。6.权利要求1或2所述的人源抗SARS
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2病毒中和性抗体SK1经改造得到的单链抗体ScFv、Fab抗体、全抗体免疫球蛋白IgG或标记复合物。7.权利要求1或...

【专利技术属性】
技术研发人员：金奇，陈哲，
申请(专利权)人：中国医学科学院病原生物学研究所，
类型：发明
国别省市：