人源化新冠病毒中和性抗体nCoV-00D及其应用制造技术

本发明专利技术公开了人源化新冠病毒中和性抗体nCoV

【技术实现步骤摘要】
人源化新冠病毒中和性抗体nCoV
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00D及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及人源化新冠病毒中和抗体nCoV
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00D及其应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒SARS
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CoV
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2是在2019年发现的一种新病毒，可导致人类病毒性肺炎或肺部感染。冠状病毒基因组依次编码棘突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白等结构蛋白。其中刺突蛋白(Spike)是冠状病毒最重要的表面膜蛋白，含有两个亚基S1和S2，其中S1主要包含受体结合区(RBD)，负责识别细胞的受体，是主要的抗原表位，目前世界流行的多种变异毒株的突变位点也集中在RBD区域。新冠病毒刺突蛋白与人血管紧张素转化酶2(ACE2)互作来感染人的呼吸道上皮细胞。
[0003]治疗性的抗体是能够与病毒表面的特定蛋白质结合的人造物质。大多数治疗性抗体是单克隆抗体，这意味着它们是由单个免疫细胞克隆产生的抗体。每一个单克隆抗体只能与一个抗原结合。当这些抗体用于治疗目的时，这两个特性都是非常重要的。治疗性抗体的两大特点是特异性结合和精确给药，使治疗性抗体具有很好的治疗效果。单克隆抗体可以特异性地靶向几乎任何物质；这种能力在检测和靶向药物输送方面非常有用有许多不同类型的治疗性抗体可以以多种不同的方式产生。
[0004]目前尚有待开发能够高亲和力且特异性地结合SARS
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CoV
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2病毒的同时，对突变株也具有有效抑制作用的抗体。/>
技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供人源化新冠病毒中和性抗体nCoV
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00D及其应用。
[0006]为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供人源化新冠病毒中和性抗体nCoV
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00D，其特征在于重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列，如SEQ ID NO: 1
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3所示；轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列，如SEQ ID NO: 4
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6所示。
[0007]抗体nCoV
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00D的轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 7和8所示。
[0008]第二方面，本专利技术提供编码抗体nCoV
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00D的核酸分子。其中，编码轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列分别如SEQ ID NO: 9和10所示。
[0009]第三方面，本专利技术提供含有上述核酸分子的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或转基因细胞系。
[0010]第四方面，本专利技术提供抗体nCoV
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00D经改造得到的单链抗体或全抗。
[0011]第五方面，本专利技术提供用于预防或治疗由新冠病毒感染以及由其感染所致相关疾的药物，其有效成分为抗体nCoV
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00D或抗体nCoV
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00D经改造得到的单链抗体或全抗。
[0012]在本专利技术的一个具体实施方式中，全抗体IgG的轻链和重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 11和12所示，编码轻链和重链的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:13
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14所示。
[0013]第六方面，本专利技术提供一种新冠病毒检测试剂，其包含抗体nCoV
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00D或抗体nCoV
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00D经改造得到的单链抗体或全抗。
[0014]第七方面，本专利技术提供抗体nCoV
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00D或抗体nCoV
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00D经改造得到的单链抗体或全抗的以下任一应用：1) 用于制备预防或治疗由新冠病毒感染以及由其感染所致相关疾病的药物；2)用于制备新冠病毒检测试剂或试剂盒。
[0015]借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点及有益效果：本专利技术利用免疫杂交瘤技术，成功获得一株可以分泌抗体的杂交瘤细胞，通过测序并碱基优化得到一条特异性针对新型冠状病毒表面抗原的人源中和性抗体nCoV
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00D，其在体外具有阻止新型冠状病毒感染敏感细胞的中和功能，对抗原亲和力高，对突变株也有很好的抑制活性。利用上述方法获得的人源中和性抗新型冠状病毒表面抗原基因工程抗体可变区基因以及上述每个抗体基因特征下的全抗体基因，真核细胞系统中表达和生产此抗体或以此为基础的改建后的含有此抗体基因的任何其他基因，获得具有中和新型冠状病毒感染的抗体产物，可制成临床上用于预防和治疗新型冠状病毒肺炎的特异性抗体药物。
[0016]附图说明
[0017]图1为本专利技术较佳实施例中人源中和性抗体nCoV
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00D的纯化免疫印迹图。
[0018]图2为抗体nCoV
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00D针对多种野生型RBD及突变株RBD亲和力测定曲线图。
[0019]图3为抗体nCoV
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00D中和新型冠状病毒(假病毒)分析结果。
[0020]图4为抗体nCoV
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00D与新冠病毒RBD蛋白结合活性流式细胞术检测结果。
[0021]图5为间接免疫荧光检测nCoV
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00D对SARS
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nCoV感染宿主细胞的影响。
[0022]图6为免疫印记技术检测nCoV
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00D对SARS
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nCoV感染宿主细胞的影响。
[0023]图7 为实时定量PCR检测nCoV
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00D对SARS
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nCoV感染宿主细胞的影响。
[0024]具体实施方式
[0025]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如按照制造厂商说明书建议的条件。
[0026]实施例1 人源化新冠病毒中和性抗体nCoV
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00D的制备及功能一、材料1. pcDNA
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3.1载体为本实验室保存。菌株Top 10购自中国天根试剂公司。
[0027]2. 抗原：新型冠状病毒RBD蛋白由本实验室表达3. Expi293F细胞、293T细胞、Huh7细胞均由本实验室保存。
[0028]二、方法与结果1. 针对RBD的单克隆抗体的杂交瘤细胞构建和筛选1.1 RBD动物免疫和免疫情况鉴定用表达纯化好的RBD蛋白免疫8周龄的BALB/c小鼠，共免疫4次。第一次免疫时RBD蛋白与等量弗氏完全佐剂混匀后免疫，第二次是2周后RBD蛋白与等量弗氏不完全佐剂混匀后免疫，第三次免疫是再过2周用RBD蛋白与等量弗氏不完全佐剂混匀后免疫，第4次免疫是
一个月后RBD蛋白与等量弗氏不完全佐剂混匀后免疫。免疫途径均为腹部皮下免疫，免疫剂量为0.5μg/只。融合前3天做加强免疫，用不加佐剂的RBD蛋白腹腔注射，5 mg/只。采集免疫前后的小鼠血清，摸索抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人源化新冠病毒中和性抗体nCoV
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00D，其特征在于，其重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1
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3所示；轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 4
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6所示。2.根据权利要求1所述的中和性抗体，其特征在于，还包括轻链和重链可变区，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 7和8所示。3.编码权利要求1或2所述中和性抗体的核酸分子。4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于，编码轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列分别如SEQ ID NO: 9和10所示。5.含有权...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹鸣婕，
申请(专利权)人：北京鹭飞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：