分子的细胞内靶向制造技术

本发明专利技术涉及包含小分子靶向配体和货物分子的缀合物，其具有式(I)：其中A选自由(II)组成的组：B为

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分子的细胞内靶向


[0001]本专利技术涉及包含小分子配体以及待细胞内递送的货物分子的缀合物。

技术介绍

[0002]生物大分子是核酸、氨基酸的天然存在的杂聚物或合成杂聚物、核酸的合成衍生物或氨基酸的合成衍生物。生物聚合物的实例包括蛋白质、抗体、基因组DNA(gDNA)、信使RNA(mRNA)、小分子干扰RNA(siRNA)、反义寡核苷酸(ASO)、寡脱氧核苷酸(ODN)和锁核酸(LNA)。
[0003]LNA反义寡核苷酸为合成寡核苷酸，由经例如2
′‑
O，4
′‑
C
‑
亚甲基桥修饰的DNA与RNA的混合物组成。LNA可用于调节mRNA剪接，影响外显子跳跃，影响核糖核酸酶H介导的mRNA降解，并且通过互补碱基配对减少mRNA翻译成蛋白质。
[0004]生物大分子作为药物引人关注，因为其具有生物活性或可以用作酶活性的模板或底物，但是由于进入细胞内空间受限，因此这类疗法的开发受到药代动力学不佳的限制。
[0005]已经使用许多方法改善生物大分子作为细胞内疗法的生物活性，诸如病毒、聚合物、脂质、病毒和小分子靶向配体。
[0006]小分子靶向配体因其简便的化学合成和模块化结构而代表了一种特别引人关注的方法。一些已经过探索的靶向配体包括叶酸盐、N
‑
乙酰基半乳糖胺等，它们引起生物大分子
‑
配体复合物与细胞受体结合，在一些情况下触发内化作用。由于小分子配体与受体之间的亲和力低，因此这种方法的实用性可能有限。配体受体亲和力的改善可来自小分子配体的改变或多价配体的工程化改造，以利用活动性效应来改善亲和力。
[0007]因此，需要一种能够将治疗活性分子转运至细胞中的递送系统。

技术实现思路

[0008]在第一方面，本专利技术涉及包含小分子靶向配体和货物分子的缀合物，该缀合物具有式I：
[0009][0010]其中A选自由以下项组成的组：
[0011][0012]B为
‑
C(O)
‑
O
‑
或
‑
C(O)
‑
N
‑
，
[0013]n选自0或1
‑
6，
[0014]r选自0或1
‑
6，
[0015]m选自1
‑
6，并且
[0016]R为货物分子。
[0017]在本专利技术的一个特定实施例中，货物分子选自由肽、多肽、寡核苷酸组成的组。
[0018]在本专利技术的一个特定实施例中，货物分子为抗体或寡核苷酸。
[0019]在本专利技术的一个特定实施例中，货物分子为LNA寡核苷酸。
[0020]在本专利技术的一个特定实施例中，小分子靶向配体在其3
′
末端或5
′
末端，优选地在其5
′
末端连接至寡核苷酸。
[0021]在本专利技术的一个特定实施例中，B为
‑
C(O)
‑
N
‑
。
[0022]在本专利技术的一个特定实施例中，r＝0并且n＝6。
[0023]在本专利技术的一个特定实施例中，m选自1
‑
4。
[0024]在本专利技术的一个特定实施例中，A为
[0025][0026]在本专利技术的一个特定实施例中，A选自由以下项组成的组：
[0027][0028]在本专利技术的一个特定实施例中，A选自由以下项组成的组：
[0029][0030]在本专利技术的一个特定实施例中，A选自由以下项组成的组：
[0031][0032]在本专利技术的一个特定实施例中，A为
[0033][0034]在本专利技术的一个特定实施例中，缀合物具有式II给出的结构：
[0035][0036]在第二方面，本专利技术涉及一种药物组合物，该药物组合物包含本专利技术的缀合物以及药用载体。
[0037]在本专利技术的一个特定实施例中，药物制剂为用于眼部病况的局部用组合物。
[0038]在第三方面，本专利技术涉及一种治疗患有眼部病况的个体的方法，该方法包括向个体的眼睛施用有效量的本专利技术的缀合物或本专利技术的药物组合物。
附图说明
[0039]图1：使用1，2
‑
二硫环戊烷
‑4‑
甲酸的LNA修饰增强了细胞摄取，通过荧光显微镜定量。带有异硫氰酸荧光素(FITC)标记的LNA在未修饰的情况下使用，或与AspA缀合后使用。将细胞用指定的剂量处理，并且按照“细胞摄取方法”进行洗涤。图1A)对图像的荧光进行定量并作图；x轴表示LNA的剂量，以纳摩尔为单位；y轴表示每帧的总细胞荧光除以细胞核数量。将经过AspA修饰的LNA绘制为蓝色的左侧曲线，而未经修饰的LNA则绘制为红色的右侧曲线。经AspA修饰的LNA相对于未修饰LNA的向左偏移表明，AspA靶向增强了这些条件下的细胞摄取和保留。图1B)由该实验得到的代表性图像；经AspA修饰的LNA的剂量为200nM，而未修饰的LNA的剂量为170nM；蓝色代表经DAPI染色的细胞核，绿色代表内化的LNA。
[0040]图2：用AspA修饰靶向LNA的MALAT1增强了由qPCR测得的生物活性。
具体实施方式
[0041]定义
[0042]本文的术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性即可。
[0043]“抗体片段”是指除了完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的一部分且结合完整抗体结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab
′
、Fab
′‑
SH、F(ab
′
)2；双体抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv和scFab)；单结构域抗体(dAb)；以及由抗体片段形
成的多特异性抗体。关于某些抗体片段的综述，请参见Holliger和Hudson，Nature Biotechnology 23：1126
‑
1136(2005)。
[0044]术语“嵌合”抗体是指这样的抗体，在所述抗体中重链和/或轻链的一部分来源于特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分来源于不同的来源或物种。
[0045]抗体的“类别”是指抗体的重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在五大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且它们中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。在某些方面，抗体为IgG1同种型。在某些方面，抗体为IgG1同种型，其包含P329G、L234A和L235A突变以降低Fc区效应子功能。在其他方面，抗体为IgG2同种型。在某些方面，抗体为IgG4同种型，其在铰链区包含S228P突变以改善I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含小分子靶向配体和货物分子的缀合物，其具有式I：其中A选自由以下项组成的组：B为
‑
C(O)
‑
O
‑
或
‑
C(O)
‑
N
‑
，n选自0或1
‑
6，r选自0或1
‑
6，m选自1
‑
6，并且R为货物分子。2.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述货物分子选自由肽、多肽、寡核苷酸组成的组。3.根据权利要求1或2所述的缀合物，其中所述货物分子为抗体或寡核苷酸。4.根据权利要求1
‑
3所述的缀合物，其中所述货物分子为LNA寡核苷酸。5.根据权利要求3或4所述的缀合物，其中所述小分子靶向配体在所述寡核苷酸的3
′
末端或5
′
末端，优选地在5
′
末端连接至所述寡核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿什瓦斯，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：