一种信号肽在重组猪干扰素和胸腺肽融合蛋白表达体系中的应用制造技术

技术编号:30239958 阅读:18 留言:0更新日期:2021-10-09 20:16
本发明专利技术公开了一种信号肽在增强重组猪干扰素和胸腺肽融合蛋白高效表达的应用。所述信号肽选自猫科干扰素ω信号肽,其包含23个氨基酸序列,该信号肽序列用于引导猪干扰素α1和胸腺肽α1的融合蛋白(poIFNα1-Tα1)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中高效表达。与猪干扰素α1(poIFNα1)自身信号肽相比,携带猫科干扰素ω信号肽的重组猪干扰素α1和胸腺肽α1(rpoIFNα1-Tα1)的融合蛋白在CHO细胞中的分泌表达显著提升。显著提升。

【技术实现步骤摘要】
一种信号肽在重组猪干扰素和胸腺肽融合蛋白表达体系中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
,具体涉及一种猫干扰素ω信号肽在重组猪干扰素α1和胸腺肽α1的融合蛋白表达体系中的应用。
[0002]专利技术背景
[0003]猪干扰素(poIFNs)是一类分泌蛋白,在其N端包含大约18~30个氨基酸组成的信号肽,新合成的IFNs在信号肽引导下进入内质网腔,通过信号肽酶的作用切除信号肽,干扰素分泌出胞。利用自身携带的信号肽引导干扰素的分泌表达,其优点是切割位点有把握,可以得到天然的N末端。但在重组融合蛋白的表达体系中,尤其在不同的表达宿主细胞,自身携带的信号肽未必能发挥最佳引导分泌的效果。如在昆虫细胞表达猪干扰素α,用其自身信号肽通常不能有效获得分泌蛋白,但引入昆虫细胞可识别的蜂素信号肽取代猪干扰素α原有信号肽,可以实现猪干扰素α在昆虫细胞中的分泌型表达。本专利技术申请人在研究中发现,利用自身信号肽在哺乳动物细胞中未能获得高效表达和分泌,但通过替换其它哺乳动物来源的干扰素信号肽,如替换猫干扰素ω信号肽可以实现poIFNα1在哺乳动物细胞中的高效表达和分泌,推测与猫干扰素ω所携带的信号肽可能有关,但至今尚无猫干扰素ω信号肽引导猪干扰素在哺乳动物细胞中表达的应用实例。
[0004]胸腺肽α1(Tα1)是由28个氨基酸组成的生物活性多肽,无种属特异性。Tα1 具有免疫调节和抗病毒作用,虽与干扰素有相似的功效,但作用机理完全不同,因此,临床上将Tα1与人干扰素联合应用在已被证实比各自单独使用的疗效更好,表明二者联合具有协同和互补的作用。
[0005]本专利技术将猪干扰素α1自身携带的信号肽替换为猫干扰素ω信号肽,通过长度为10个氨基酸的连接肽将胸腺肽α1置于猪干扰素α1的C端,在CHO细胞中表达为重组猪干扰素α1和胸腺肽α1(rpoIFNα1-Tα1)的融合蛋白,与自身信号肽相比较,猫干扰素ω信号肽引导poIFNα1-Tα1融合蛋白的分泌表达显著提升。

技术实现思路

[0006]本专利技术所解决的技术问题是利用猫科干扰素ω的信号肽取代poIFNα1信号肽,在CHO细胞中实现poIFNα1或poIFNα1-Tα1融合蛋白的高效表达和分泌。
[0007]本专利技术选自猫科干扰素ω各亚型的共享信号肽序列,替换poIFNα1的自身序列,形成如SEQ ID NO 1和2所示的氨基酸序列和SEQ ID NO 2和4所示的核苷酸序列。
[0008]本专利技术还涉及上述信号肽替换的poIFNα1-Tα1融合蛋白在CHO细胞中的高效表达和分泌,包括以下步骤:
[0009](1)将poIFNα1-Tα1融合蛋白基因的信号肽序列替换为猫干扰素-ω信号肽序列,含自身信号肽的poIFNα1作为对照,均经人工合成后重组至表达质粒 BP001。
[0010](2)将各表达质粒线性化并分别电转至CHO细胞,优选CHO DG44细胞,采用无血清培养48h后,加入氨甲喋呤(MTX)至终浓度10nM,随后逐步增加至100nM;
Boost 7a/7b,适量补加1%葡萄糖和1%的L
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Glutamine。于培养第9天终止培养并分别收集各培养细胞上清,用ELISA方法定量上清中的poIFNα1-Tα1融合蛋白,以此确定两种融合蛋白的表达水平。结果显示,SF/poIFNα1-Tα1融合蛋白的表达产量随时间增加而升高,其表达量为 465mg/L,而S/poIFNα1-Tα1融合蛋白的表达产量也随时间增加而提升,其表达量约为184mg/L,但明显低于SF/poIFNα1-Tα1(图2)。
[0025]上述结果表明,猫科干扰素ω与猪干扰素自身信号肽相比,在引导poIFNα1
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Tα1融合蛋白在CHO细胞中的分泌表达量显著提升。因此提示,在实现猪干扰素α1和胸腺肽α1的融合蛋白在哺乳动物细胞表达,尤其在CHO细胞中表达的产业化方面,猫科干扰素ω信号肽更具有优势。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种信号肽在重组猪干扰素和胸腺肽的融合蛋白表达体系中的应用,其特征在于,所述信号肽选自猫干扰素ω信号肽。2.如权利要求1所述的一种信号肽在重组猪干扰素和胸腺肽的融合蛋白表达体系中的应用,其特征在于,所述重组猪干扰素和胸腺肽融合蛋白为重组猪干扰素α1和胸腺肽α1(rpoIFNα1-Tα1)的融合蛋白。3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,rpoIFNα1-Tα1融合蛋白包含如下操作:(a)猪干扰素-α1的信号肽由猫干扰素ω信号肽所替换,其氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员:罗弟祥高小平代燕平
申请(专利权)人:成都彤琦恩生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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