GITR/TGF-β双靶向融合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域。具体而言，本发明专利技术公开了GITR/TGF

【技术实现步骤摘要】
GITR/TGF
‑
β
双靶向融合蛋白及其用途


[0001]本专利技术涉及生物医药领域。具体而言，本专利技术公开了GITR/TGF
‑
β双靶向融合蛋白、包含其的缀合物和药物组合物，以及所述融合蛋白或缀合物在制备药物中的用途。

技术介绍

[0002]免疫疗法治疗选择广泛，包括多种方法。迄今为止，最成功的治疗方案之一是免疫检查点抑制剂(例如抗PD
‑
L1抗体和抗PD
‑
1抗体)治疗，其可在多种晚期肿瘤中表现出高度持久的反应和显著延长的整体生存期。尽管检查点抑制剂在抗癌治疗中取得了进展，但绝大多数患者对检查点抑制剂仍无响应。
[0003]转化生长因子
‑
β(TGF
‑
β)是属于转化因子超家族的多功能细胞因子。TGF
‑
β信号通路由TGF
‑
βⅠ型受体(TGF
‑
βRⅠ)和TGF
‑
βⅡ型受体(TGF
‑
βRⅡ)组成的TGF
‑
β受体复合物介导，调控细胞生长、增殖、分化、凋亡、迁移等重要细胞过程。TGF
‑
β信号通路与肿瘤发生和发展密切相关。在一方面，TGF
‑
β有助于肿瘤细胞上皮
‑
间充质转化(EMT)，促进肿瘤细胞浸润和转移。在另一方面，TGF
‑
β抑制T细胞和B细胞的增殖并抑制B淋巴细胞产生免疫因子，也可以通过抑制抗原提呈细胞(如树突状细胞)的功能减弱T细胞的活性，通过多种机制抑制免疫系统的抗肿瘤反应。此外，TGF
‑
β可以通过刺激血管生成促进肿瘤细胞的生长和转移。
[0004]现有技术中已开发了一些TGF
‑
β抑制剂，例如TGF
‑
βTrap(二聚的TGF
‑
βRⅡ的胞外结构域，参见例如WO2015118175A2和WO2018205985A1)和抗TGF
‑
β单克隆抗体fresolimumab(参见例如US7723486B2)。临床上使用TGF
‑
β抑制剂与抗PD
‑
L1抗体或抗PD
‑
1抗体联合疗法解除免疫系统的抑制，从而增强抗肿瘤治疗效果。例如，WO2018205985A1和WO2015118175A2公开了的抗PD
‑
L1抗体和TGF
‑
βTrap的双功能分子，可以同时阻断TGF
‑
β信号通路并抑制免疫检查点，用于癌症治疗。
[0005]糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(Glucocorticoid
‑
induced tumor necrosis factor receptor，GITR或AITR)是肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)中的一员。GITR在调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)表面高表达，在幼稚T细胞和记忆T细胞表面有较低的表达。当效应T细胞(effector T cells，Teff)被激活后，GITR的表达水平会在短时间内快速升高。GITR信号传导在免疫调节中起重要作用。一方面，Teff表面GITR的激活可以促进Teff细胞的增殖和存活，从而增强免疫功能。在另一方面，Treg表面GITR的激活促使Treg细胞衰竭，从而间接的起到激活Teff功能的作用。

技术实现思路

[0006]在一方面，本专利技术提供一种靶向GITR和TGF
‑
β的双靶向融合蛋白，其从N端至C端包含：
[0007]第一多肽
–
第二多肽
–
第三多肽
ꢀꢀ
式(1)；
[0008]或者
[0009]第三多肽
–
第二多肽
–
第一多肽
ꢀꢀ
式(2)；
[0010]其中
[0011]所述第一多肽包含TGF
‑
βRⅡ的胞外结构域(TGFBR2
‑
ECD)；
[0012]所述第二多肽从N端至C端具有如下结构：
[0013]Lk1–
Dd
–
Lk2，
[0014]其中
[0015]Dd为二聚化结构域；
[0016]Lk1和Lk2各自独立地为接头或不存在；并且
[0017]所述第三多肽从N端至C端具有如下结构：
[0018]Sd1–
Ln1–
Sd2–
Ln2–
Sd3，
[0019]其中
[0020]Sd1、Sd2和Sd3各自独立地为GITRL胞外结构域；
[0021]Ln1和Ln2各自独立地为接头或不存在。
[0022]在一实施方案中，所述TGFBR2
‑
ECD包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
[0023]在一实施方案中，所述GITRL胞外结构域包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一具体实施方案中，所述第三多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
[0024]在一实施方案中，所述二聚化结构域从N端至C端包含免疫球蛋白的CH2和CH3结构域，优选人IgG1的CH2和CH3结构域。
[0025]在一实施方案中，所述第二多肽从N端至C端具有如下结构：
[0026]Lk1–
Dd
–
Lk2；
[0027]其中
[0028]Dd为二聚化结构域，其从N端至C端包含免疫球蛋白的铰链区或其部分、CH2和CH3结构域，优选人IgG1的Fc片段；优选地，所述铰链区或其部分包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，所述CH2和CH3结构域包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列；
[0029]Lk1和Lk2各自独立地为接头。
[0030]在一具体实施方案中，所述融合蛋白包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
[0031]在另一方面，本专利技术提供一种多核苷酸，其编码本专利技术的融合蛋白。本专利技术还提供一种表达载体或宿主细胞，其包含编码本专利技术的融合蛋白的多核苷酸。
[0032]本专利技术还涉及一种缀合物，其包含与至少一种治疗剂缀合的本专利技术的融合蛋白。优选地，所述治疗剂选自可检测标记物、化疗剂、细胞毒素、放射性核素、免疫检查点抑制剂、细胞因子和酶。
[0033]在又一方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含：
[0034](
ⅰ
)本专利技术的融合蛋白，以及
[0035](
ⅱ
)药学上可接受的载剂。
[0036]在另一方面，本专利技术还涉及所述融合蛋白、多核苷酸、缀合物或者药物组合物的用途。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其从N端至C端包含：第一多肽
–
第二多肽
–
第三多肽
ꢀꢀ
式(1)；或者第三多肽
–
第二多肽
–
第一多肽
ꢀꢀ
式(2)；其中所述第一多肽包含TGF
‑
βRⅡ的胞外结构域(TGFBR2
‑
ECD)；所述第二多肽从N端至C端具有如下结构：Lk1–
Dd
–
Lk2，其中Dd为二聚化结构域；Lk1和Lk2各自独立地为接头或不存在；并且所述第三多肽从N端至C端具有如下结构：Sd1–
Ln1–
Sd2–
Ln2–
Sd3，其中Sd1、Sd2和Sd3各自独立地为GITRL胞外结构域；Ln1和Ln2各自独立地为接头或不存在。2.权利要求1的融合蛋白，其中所述TGFBR2
‑
ECD包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的氨基酸序列；优选地，所述TGFBR2
‑
ECD包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。3.权利要求1或2的融合蛋白，其中所述GITRL胞外结构域包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列；优选地，所述GITRL胞外结构域包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。4.权利要求1
‑
3中任一项的融合蛋白，其中所述第三多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。5.权利要求1
‑
4中任一项的融合蛋白，其中所述二聚化结构域从N端至C端包含免疫球蛋白的CH2和CH3结构域，优选人IgG1的CH2和CH3结构域；更优选地，所述CH2和CH3结构域包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列。6.权利要求1
‑
5中任一项的融合蛋白，其中所述第二多肽从N端至C端具有如下结构：Lk1–
Dd
–
Lk2；其中Dd为二聚化结构域，其从N端至C端包含免疫球蛋白的铰链区或其部分、CH2和CH3结构域，优选人IgG1的Fc片段；优选地，所述铰链区或其部分包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，所述CH2和CH3结构域包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列；Lk1和Lk2各自独立地为接头。7.权利要求1
‑
6中任一项的融合蛋白，其中所述TGFBR2
‑
ECD包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的氨基酸序列；所述GITRL胞外结构域包含SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：周雅琼，高章照，吴振华，聂磊，胡锋，齐健，王海彬，
申请(专利权)人：浙江博锐生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：