一种靶向递送IgG类抗体的融合蛋白载体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向递送IgG类抗体的融合蛋白，它包括PDGFRβ特异性亲和体的功能性片段结构域、IgG抗体特异性亲和体的功能性片段结构域和三聚体蛋白结构域。本发明专利技术的融合蛋白具有肿瘤靶向性，且能够与IgG类抗体结构域融合，靶向递送IgG类抗体到肿瘤细胞发挥抗肿瘤作用，在抗肿瘤药物中具有巨大的应用价值。在抗肿瘤药物中具有巨大的应用价值。在抗肿瘤药物中具有巨大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向递送IgG类抗体的融合蛋白载体及其用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种靶向递送IgG类抗体的融合蛋白载体及其用途。

技术介绍

[0002]肿瘤发生发展过程中，通常高表达一些细胞因子或受体促进生长和转移。同时，为了逃避免疫系统的攻击，肿瘤通常也高表达一些免疫抑制分子，如免疫检测点蛋白等。因此，阻断细胞因子对其受体、或免疫检测点蛋白对其配体的结合均可发挥抗肿瘤作用。抗体因具有特异性强，半衰期长，效率高等优点而成为极具潜力的抗肿瘤药物。目前已经获批临床应用的肿瘤治疗性抗体多达数十种。但是，在肿瘤部位高表达的细胞因子及其受体，以及免疫检查点蛋白往往也在正常组织中表达。系统性给与抗体药物，可能阻断非肿瘤部位的相关信号传导而产生副作用。比如，一些免疫检测点蛋白高表达于肿瘤细胞。肿瘤依赖这些免疫检测点蛋白实现免疫逃逸。利用抗体封闭这些免疫检测点蛋白，即可恢复抗肿瘤免疫反应。但是，这些免疫检测点蛋白也广泛表达于正常细胞上，是机体避免自身免疫攻击的重要机制。因此，若免疫检测点蛋白封闭型抗体无肿瘤靶向性，通常只有通过提高剂量来提高抗肿瘤效果。这种情况下，系统给予免疫检测点蛋白封闭型抗体，往往在恢复抗肿瘤免疫反应的同时，也可能过度激活全身免疫反应而造成自身免疫损伤(Allenbach et al.2020；Belkhir et al.2017；Dudzinska et al.2020)。因此，若能将治疗性抗体靶向递送至肿瘤部位，则可以提高抗体作用效率，降低副作用。
[0003]为了将治疗性抗体靶向递送至肿瘤部位，已有研究往往通过化学偶联或基因重组将肿瘤导向性分子与抗体融合(Compte et al.2018；Dheilly et al.2018；Ishihara J 2017)。但是，抗体包含两条轻链和两条重链，分子量大，结构复杂，通过常规化学方法，难以实现定点偶联。若通过基因融合，也有4个融合位点可以选择，需要逐一尝试，筛选出合适的融合位点，难度也很大。
[0004]常见的治疗性抗体主要是IgG类抗体，如果能够研究一种既具有肿瘤靶向性，又能结合IgG类抗体的融合蛋白，作为治疗性IgG类抗体的靶向递送载体，在这些肿瘤靶向性分子的引导下，抗肿瘤治疗性抗体能够快速高效地富集于肿瘤部位，从而发挥更强的抗肿瘤作用，将具有非常好的应用前景。

技术实现思路

[0005]本专利技术设计将一个肿瘤导向性分子与IgG抗体结合结构域融合，形成了一个既具有肿瘤靶向性，又能结合抗体的融合蛋白，作为治疗性抗体的靶向递送载体。
[0006]本专利技术提供了一种融合蛋白，它包括如下部分：
[0007](1)PDGFRβ特异性亲和体的功能性片段结构域或与该功能性片段具有至少95％同源性序列的结构域；
[0008](2)IgG抗体特异性亲和体的功能性片段结构域或与该功能性片段具有至少95％
同源性序列的结构域；
[0009](3)序列如SEQ ID NO.1所示的三聚体蛋白结构域或与该三聚体具有至少95％同源性序列的结构域。
[0010]进一步地，上述部分(1)所述的PDGFRβ特异性亲和体的功能性片段结构域为Z
PDGFRβ
，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0011]进一步地，上述部分(2)所述的IgG特异性亲和体的功能性片段结构域为IgBD，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0012]进一步地，上述部分(1)与部分(3)之间有连接子。
[0013]进一步地，上述部分(2)与部分(3)之间有连接子。
[0014]更进一步地，上述连接子为(G4S)3。
[0015]本专利技术还提供了上述的融合蛋白作为IgG类抗体靶向递送载体的应用。
[0016]进一步地，上述IgG类抗体包括：人源抗PD
‑
1抗体(Nivolumab)、抗PD
‑
L1抗体(Atezolizumab)、抗CTLA4抗体(Ipilimumab)、抗HER2抗体(Trastuzumab)、抗CD20抗体(Rituximab)或抗EGFR抗体(Cetuximab)。
[0017]本专利技术还提供了一种抗肿瘤药物，它含有上述的融合蛋白和IgG类抗体。
[0018]进一步地，上述IgG类抗体包括：人源抗PD
‑
1抗体(Nivolumab)、抗PD
‑
L1抗体(Atezolizumab)、抗CTLA4抗体(Ipilimumab)、抗HER2抗体(Trastuzumab)、抗CD20抗体(Rituximab)或抗EGFR抗体(Cetuximab)。
[0019]实验结果表明，本专利技术的融合蛋白具有肿瘤靶向性，且能够与IgG类抗体结构域融合，靶向递送IgG类抗体到肿瘤细胞发挥抗肿瘤作用，在抗肿瘤药物中具有巨大的应用价值。
[0020]本专利技术所述连接子(G4S)3的序列为GGGGSGGGGSGGGGS。
[0021]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0022]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0023]图1为Z
‑
tri的分子设计(A)、重组表达及纯化(B)。
[0024]图2为Z
‑
IgBD
‑
tri的分子设计(A)及蛋白制备(B)。
[0025]图3为Z
‑
tri对PDGFRβ阳性细胞的结合。
[0026]图4为光学活体成像(A)和组织分布(B)显示Z
‑
tri在瘤内的富集。
[0027]图5为Z
‑
IgBD
‑
tri对PDGFRβ阳性细胞(A)及PD
‑
L1抗体(B)的结合。
[0028]图6为Z
‑
IgBD
‑
tri对人源治疗性IgG类抗体的结合分析结果。
[0029]图7为Z
‑
IgBD的制备及IgG结合能力分析结果。
[0030]图8为Z
‑
IgBD01
‑
tri的制备及其IgG结合能力分析结果。
[0031]图9为Z
‑
IgBD
‑
tri增强PD
‑
L1抗体的抗肿瘤作用。A:肿瘤生长曲线，B:治疗结束瘤体照片。
具体实施方式
[0032]本专利技术所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
[0033]实施例1、肿瘤靶向性分子Z
‑
tri的制备
[0034]使用能特本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，它包括如下部分：(1)PDGFRβ特异性亲和体的功能性片段结构域或与该功能性片段具有至少95％同源性序列的结构域；(2)IgG抗体特异性亲和体的功能性片段结构域或与该功能性片段具有至少95％同源性序列的结构域；(3)序列如SEQ ID NO.1所示的三聚体蛋白结构域或与该三聚体具有至少95％同源性序列的结构域。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，部分(1)所述的PDGFRβ特异性亲和体的功能性片段结构域为Z
PDGFRβ
，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，部分(2)所述的IgG特异性亲和体的功能性片段结构域为IgBD，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。4.如权利要求1～3任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述部分(1)与部分(3)之间有连接子。5.如权利要求1～3任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述部分(2)与部分(3)之间有连接子。6.如权利要求4或5所述的融合蛋白，其特征在于，所述连接...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢晓风，杨浩，陶泽，程惊秋，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：