一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗，在我国自主研发的天花疫苗株痘苗病毒天坛株的基础上，通过转染带有新冠刺突蛋白S编码基因及TK区同源臂的重组质粒，经过重组及筛选过程，获得在TK区导入新冠S蛋白编码序列的重组病毒TK

【技术实现步骤摘要】
一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗


[0001]本专利技术涉及疫苗制备领域，尤其涉及一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗。

技术介绍

[0002]痘病毒(Poxvirus)是一类较大的DNA病毒，基因组约200
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300kbp，主要包括痘苗病毒(Vaccinia virus)、天花病毒(Variola virus)、牛痘病毒(Cowpox virus)和猴痘病毒(Monkey poxvirus)等。痘苗病毒具有宿主范围广，对外源基因的容量大(<25kbp)及在细胞质复制等特点，目前以载体的形式用于多种疫苗的构建及溶瘤病毒的构建中，如人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)疫苗、埃博拉病毒(Ebola virus) 疫苗等。而痘苗病毒天坛株(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)是中国自主研发并成功用于预防天花的疫苗毒株，在消灭天花的过程中发挥了重要的作用，已作为中国防止天花再次出现的应急储备疫苗株。
[0003]新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)为有包膜的单股正链RNA病毒，与早期流行爆发威胁公共健康的SARS、MERS同属于冠状病毒科β属。2019 年底至今，SARS
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CoV
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2感染导致的肺炎(COVID19)疫情已为世界公共卫生健康造成极大威胁，对全世界社会经济的发展也带来前所未有的冲击。
[0004]SARS
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CoV
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2利用病毒表面的刺突(spike，S)蛋白与靶细胞表面的受体血管紧张素转化酶2(angiotensin
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converting enzyme
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2，ACE
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2)结合，通过构象变化和蛋白酶切暴露其融合肽，介导病毒囊膜和靶细胞膜融合，并释放病毒基因组。由于冠状病毒S蛋白暴露于病毒表面并介导病毒与受体的结合，使其成为中和抗体的主要靶点。
[0005]以SARS
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CoV
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2的S蛋白为靶标设计的疫苗和中和抗体也是目前防治冠状病毒感染的主要手段和研发热点。虽然有少数抗病毒药物对新型冠状病毒的感染有一定疗效，但并不能消除新型冠状病毒给人类造成的威胁，因此疫苗接种仍然是新型冠状病毒的得力措施。
[0006]本申请建立了一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗，在我国自主研发的天花疫苗株痘苗病毒天坛株的基础上，在TK区导入新冠的S 蛋白编码序列，构建能够表达新冠S蛋白的重组病毒TK
‑
S。将此重组病毒免疫小鼠，在小鼠血清中检测到较高的S特异性抗体滴度及中和抗体滴度。据此，本申请建立了一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗，在痘苗病毒天坛株基因组的胸苷激酶区插入了编码SARS
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CoV
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2刺突蛋白S的核苷酸序列，所述编码SARS
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CoV
‑
2刺突蛋白S的
核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0010]上述的基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗中，利用表达 SARS
‑
CoV
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2刺突蛋白S的重组质粒pTK
‑
S构建重组病毒，重组质粒pTK
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S 的序列如SEQ ID NO：2所示。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0012]本专利技术提供的一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗，在我国自主研发的天花疫苗株痘苗病毒天坛株的基础上，通过转染带有新冠刺突蛋白S编码基因及TK区同源臂的重组质粒，经过重组及筛选过程，获得在TK区导入新冠S蛋白编码序列的重组病毒TK
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S，重组病毒感染细胞后能检测到新冠S蛋白的表达。随后，将此重组病毒免疫小鼠，在小鼠血清中检测到较高的S特异性抗体滴度及中和抗体滴度。本专利技术建立了一种基于痘苗病毒天坛株的表达S蛋白的新型冠状病毒疫苗，可以解决目前新冠对全球公共卫生健康造成的威胁，是治疗和预防新型冠状病毒感染的得力措施。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0014]图1本专利技术实施例1提供的重组质粒pTK
‑
S及同源重组示意图。
[0015]图2本专利技术实施例1提供的重组病毒鉴定所需PCR引物示意图。
[0016]图3本专利技术实施例1提供的对重组病毒TK
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S的PCR鉴定。WT为野生型病毒，A、B为重组病毒。
[0017]图4本专利技术实施例1提供的重组病毒TK
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S感染细胞后S蛋白的表达。其中，MOCK为阴性对照。
[0018]图5本专利技术实施例2提供的小鼠免疫后血清中S抗体的检测结果。其中，Neg为阴性对照血清，dTK
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1st为病毒载体dTK初次免疫组小鼠血清， dTK
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2nd为病毒载体dTK二次免疫组小鼠血清，TK
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S
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1st为重组痘苗病毒 TK
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S初次免疫组小鼠血清，TK
‑
S
‑
2nd为重组痘苗病毒TK
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S二次免疫组小鼠血清。
[0019]图6本专利技术实施例2提供的小鼠免疫后血清中中和抗体的检测结果。其中，Neg为阴性对照血清，dTK
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1st为病毒载体dTK初次免疫组小鼠血清，dTK
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2nd为病毒载体dTK二次免疫组小鼠血清，TK
‑
S
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1st为重组痘苗病毒TK
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S初次免疫组小鼠血清，TK
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S
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2nd为重组痘苗病毒TK
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S二次免疫组小鼠血清。
具体实施方式
[0020]为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面将结合实施例对本专利技术作进一步的详细介绍。
[0021]本专利技术使用的HEK293T、Vero、HeLa细胞用含10％胎牛血清、100U /mL青霉素、100μg/mL链霉素的DMEM培养液，在37℃，5％CO2培养箱中培养，每2
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3天传代一次。
[0022]实施例1构建能够表达新冠S蛋白的重组痘苗病毒TK
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗，其特征在于，在痘苗病毒天坛株基因组的胸苷激酶区插入了编码SARS
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CoV
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2刺突蛋白S的核苷酸序列，所述编码SARS
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CoV
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2刺突蛋白S的核苷酸序列如SEQ ID NO：1...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭斐，许丰雯，梅珊，范张玲，
申请(专利权)人：中国医学科学院病原生物学研究所，
类型：发明
国别省市：