分散液液微萃取-高效液相色谱-串联质谱同时测定烟叶中多种黄曲霉毒素的方法技术

本发明专利技术公开一种分散液液微萃取‑高效液相色谱‑串联质谱同时测定烟叶中多种黄曲霉毒素的方法，包括以下步骤：S1、称取待测烟末，加入甲醇水溶液超声提取；S2、取上清液加C18吸附剂涡旋，离心取上层清液，加入萃取剂混合均匀，迅速注入水中超声振荡得到乳浊液；S3、将乳浊液离心分层，取下层有机溶液氮气吹干；S4、将固形物用甲醇‑水溶液复溶制成待测液；S5、配制黄曲霉毒素的基质配标系列标准工作溶液，采用HPLC‑MS/MS同时检测黄曲霉毒素，建立标准曲线；S6、将待测液置于色谱瓶内，采用HPLC‑MS/MS进行定量分析。本方法的样品前处理简单，结果准确，灵敏度高，适合于烟叶中多种黄曲霉毒素同时检测。

【技术实现步骤摘要】
分散液液微萃取-高效液相色谱-串联质谱同时测定烟叶中多种黄曲霉毒素的方法
本专利技术属于真菌毒素检测
，特别是分散液液微萃取-高效液相色谱-串联质谱同时测定烟叶中多种黄曲霉毒素的方法。
技术介绍
黄曲霉毒素是由黄曲霉菌基于自身生理机制在适宜环境下产生的有毒次级代谢物，其作用是帮助真菌自我防御或有效寄生。人若摄入被黄曲霉毒素污染的食品，则可能造成食物中毒或诱发各种急、慢性疾病等。目前已知的黄曲霉毒素有十多种，其中以B1、B2、G1和G2最为常见，其中以黄曲霉毒素B1(简称AFB1，其余类推)的毒性最强。在世界范围内，黄曲菌毒素对农作物、食品存在着广泛的污染，其来源可能为作物生长过程中真菌感染形成的毒素残留或食品霉变过程中产生的毒素。烟叶的生产和贮藏过程中，也面临着被毒素污染的威胁。目前，黄曲霉毒素的富集和纯化多采用免疫吸附柱和多功能净化柱(如MycoSep萃取柱)等。这类固相萃取柱子选择性强、效率高，但是价格昂贵。分散液液微萃取(Dispersiveliquid-liquidmicroextraction，DLLME)技术是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分散液液微萃取-高效液相色谱-串联质谱同时测定烟叶中多种黄曲霉毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、称取待测烟末样品置于离心管中，加入甲醇-水溶液，待测烟末样品用量为0.1g/ml，超声提取20min；/nS2、取上清液5ml，加入50mgC18吸附剂，涡旋震荡1min，离心取上层清液1.5ml，加入不少于300μl萃取剂，混合均匀，迅速注入5ml水中，超声振荡3-6min得到乳浊液；/n所述萃取剂为二氯乙烷和/或氯仿；/nS3、将步骤S2的乳浊液离心分层，取下层有机溶液，用氮气吹干得到固形物；/nS4、将步骤S2的固形物用100μl的50％甲醇-水溶液复溶制成待测液；/nS5、...

【技术特征摘要】
1.分散液液微萃取-高效液相色谱-串联质谱同时测定烟叶中多种黄曲霉毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、称取待测烟末样品置于离心管中，加入甲醇-水溶液，待测烟末样品用量为0.1g/ml，超声提取20min；
S2、取上清液5ml，加入50mgC18吸附剂，涡旋震荡1min，离心取上层清液1.5ml，加入不少于300μl萃取剂，混合均匀，迅速注入5ml水中，超声振荡3-6min得到乳浊液；
所述萃取剂为二氯乙烷和/或氯仿；
S3、将步骤S2的乳浊液离心分层，取下层有机溶液，用氮气吹干得到固形物；
S4、将步骤S2的固形物用100μl的50％甲醇-水溶液复溶制成待测液；
S5、配置四种黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的基质配标系列标准工作溶液，采用高效液相色谱-串联质谱同时检测混合标准工作液中黄曲霉毒素，建立相应的标准曲线；
S6、将步骤S4的待测液置于色谱瓶内，采用高效液相色谱-串联质谱同时检测待测液中黄曲霉毒素的含量，根据步骤S5的标准曲线进行定量分析。


2.根据权利要求1所述的分散液液微萃取-高效液相色谱-串联质谱同时测定烟叶中多种黄曲霉毒素的方法，其特征在于，步骤S1中，甲醇-水溶液中甲醇和水的体积比为7-8:3-2。


3.根据权利要求1所述的分散液液微萃取-高效液相色谱-串联质谱同时测定烟叶中多种黄曲霉毒素的方法，其特征在于，液相色谱条件为：色谱柱为ZorbaxSB-C18(2.1×50mm，1.8μm)，进样量10μL，柱温25℃，流速0.5ml/min；流动相A为10mmol/L乙酸铵-水溶液，流动相B为乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：王康，陈慧，肖少红，
申请(专利权)人：中国烟草总公司湖北省公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42