一种检测AMB-FUBINACA体内生物标记物及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种检测AMB‑FUBINACA体内生物标记物及其应用。检测AMB‑FUBINACA体内生物标记物为C

【技术实现步骤摘要】
一种检测AMB-FUBINACA体内生物标记物及其应用
本专利技术属于毒品检测
，涉及一种检测合成大麻素AMB-FUBINACA体内生物标记物及其应用，特别应用高效液相串联静电轨道离子阱高分辨质谱检测结合肝微粒体体外孵育实验，通过筛查AMB-FUBINACA体外代谢产物，分析AMB-FUBINACA的生物标记物，并通过大鼠体内实验验证。
技术介绍
合成大麻素是一类对人体作用机理与天然大麻素四氢大麻酚(Tetrahydrocannabinol,THC)相似的新精神活性物质，主要通过结合人体内的中枢型受体CB1和末梢型受体CB2发挥作用，相比于天然大麻素，合成大麻素在人体内发挥的药效更强，危害更大。在过去十年中，世界上非法药物市场上出现新化合物的数量大幅度增加，这些新化合物大多用于娱乐目的。为了规避政府的法规，非法药物制造商采取科学文献中所报告的一种已知的精神活性化合物，并稍微修改其化学结构，生产出一种新的精神活性化合物，模拟原物质的药理活性的类似物。在各种化学类别中，合成大麻素一直处于最前沿。与合成大麻素严峻形势相对的是目前对于合成大麻素药理学和毒理学研究报告较少，同时检测方法滞后。合成大麻素是一类亲脂性较强的化合物，在体内代谢速度较快，生物检材中的母体药物含量一般较低，因此确定合成大麻素的生物标记物尤为重要。AMB-FUBINACA全称3-甲基-2-[1-(4-氟苄基)吲唑-3-甲酰氨基]丁酸甲酯，2015年，在被没收的毒品中首次被发现，成为近几年来最受欢迎的合成大麻素之一。2016年，首次报道了与AMB-FUBINACA相关的中毒案例；在2018年6月，AMB-FUBINACA被列入中国法律监督名单。因此本专利技术拟开发一种简单易操作的体外肝微粒体孵育实验结合大鼠动物实验，用于合成大麻素AMB-FUBINACA代谢物的研究及生物标记物的确证。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种检测合成大麻素AMB-FUBINACA的体内生物标记物。确定AMB-FUBINACA的生物标记物，通过高效液相串联静电轨道离子阱高分辨质谱检测结合肝微粒体体外孵育实验的方法，得到AMB-FUBINACA体外代谢产物，通过筛查代谢产物，对AMB-FUBINACA的生物标记物进行分析，并采用大鼠体内实验验证。表1：检测合成大麻素AMB-FUBINACA的体内生物标记物本专利技术的第二个目的是提供上述利用上述体内生物标记物在非诊断目的的检测合成大麻素AMB-FUBINACA上的应用。本专利技术的第三个目的是提供上述利用上述体内生物标记物的非诊断目的的合成大麻素AMB-FUBINACA检测方法，具体是：(1)取一定体积的尿液加入9倍体积的0.1％甲酸水溶液，涡旋，时间不少于30s，大于12000rpm的转速离心一定时间，取上清液；(2)将上述滤液进行高效液相串联静电轨道离子阱高分辨质谱检测到表1的生物标记物则认为服用合成大麻素AMB-FUBINACA。所述液相色谱条件：色谱柱：WatersUPLCHSST3；柱温：30℃；流动相：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为0.1％甲酸乙腈；流动相洗脱梯度：0-1min为95％流动相A+5％流动相B、1-8.5min为95％流动相A+5％流动相B逐步替换到100％流动相B，8.5-11min为90％流动相A+10％流动相B，11-11.1min为100％流动相B逐步替换到95％流动相A+5％流动相B，11.1-13min为95％流动相A+5％流动相B，流速为0.3mL/min；质谱条件：采用电喷雾电离源(ESI)，正离子采集模式；离子源参数：碰撞气为氮气，喷射电压3800V，雾化温度320℃，雾化气压力35arb，辅助气压力15arb，传输毛细管温度300℃；采用FullMS-ddMS2扫描模式采集数据；全扫描数据采集参数：分辨率140000，自动增益控制(AGC)3e6，最大注射时间(MaximumIT)50ms，扫描范围160to600m/z；二级质谱数据采集参数：分辨率35000，目标物AGC1e5，最大IT50ms，Isolationwindows4.0m/z，碰撞能量为10、25、35eV。本专利技术的第四个目的是提供一种试剂盒，包括上述标记物的标准品和/或检测标记物的检测试剂。本专利技术具有如下优点：1)本专利技术克服合成大麻素AMB-FUBINACA在体内代谢速度快，在生物检材中的母体药物含量一般较低，提供一种利用体内代谢标记物进行检测，精确度高，灵敏度高，结果准确可靠。2)本专利技术所需的检测样本生物量较少，仅为100μl。附图说明图1是AMB-FUBINACA的色谱图，其中(a)标准溶液，(b)孵育60min的样品，(c)空白溶液；图2是AMB-FUBINACA的二级质谱图；图3是肝微粒体体外代谢产物色谱图；图4是肝微粒体体外代谢产物二级质谱图及推导碎裂模式；其中(a)M1-A，(b)M2-A，(c)M3-A，(d)M3-B，(e)M3-C，(f)M3-D，(g)M4-A，(h)M4-B，(i)M5-A，(j)M5-B，(k)M6-A；图5是肝微粒体体外代谢途径示意图；图6是大鼠体内代谢产物二级质谱图及推导碎裂模式；其中(a)M1-A，(b)M2-A，(c)M3-A，(d)M4-A，(e)M5-A，(f)M6-A，(g)M7-A，(h)M7-B，(i)M8-A，(j)M9-A；图7是大鼠空白对照组色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例和附图对本专利技术做进一步的分析。实施例1：高效液相串联静电轨道离子阱高分辨质谱检测结合肝微粒体体外孵育实验的方法，得到AMB-FUBINACA体外代谢产物：(1)取RLM(鼠肝微粒体)先-20℃解冻10min，再4℃解冻待用；(2)精确称取1mg的AMB-FUBINACA，以DMSO为溶剂，配置1mg/ml的AMB-FUBINACA标准品溶液；取20.4724mgNADP+(氧化型辅酶Ⅱ钠盐)于1ml的PBS中，得到0.026mmol/mlNADP+储备液；取20.0706mgG-6-P(6-磷酸葡萄糖二钠)1ml的PBS中，得到0.066mmol/mlG-6-P储备液；将1000U的G-6-PDH(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)溶于10ml的PBS，得到100U/mlG-6-PDH储备液；称取0.02852g的MgCl2溶于30ml的PBS中，得到10mM的MgCl2储备液；(3)体外孵育3.1取一个2ml的离心管，加入10μlNADP+储备液、10μlG-6-P储备液、8μlG-6-PDH储备液、66μlMgCl2储备液混合均匀，37℃水浴5min，得到NADPH再生系统；3.2另取一个2ml的离心管中加入96μl的PBS缓冲盐溶液、1μl的(1mg/ml)AMB-FUBINACA标准品溶液、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体内生物标记物在检测合成大麻素AMB-FUBINACA上的应用，其特征在于该体内生物标记物是：/n

【技术特征摘要】
1.一种体内生物标记物在检测合成大麻素AMB-FUBINACA上的应用，其特征在于该体内生物标记物是：





2.利用如权利要求1所述的体内生物标记物的合成大麻素AMB-FUBINACA检测方法，其特征在于该方法是：
(1)取一定体积的尿液样本加入甲酸水溶液，涡旋一定时间，离心取上清液；
(2)将上述滤液进行高效液相串联静电轨道离子阱高分辨质谱检测，若检测到如权利要求1所述的体内生物标记物，则认为该尿液样本中含有合成大麻素AMB-FUBINACA。


3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于所述液相色谱条件如下：
色谱柱：WatersUPLCHSST3；
柱温：30℃；
流动相：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为0.1％甲酸乙腈；
流动相洗脱梯度：0-1min为95％流动相A+5％流动相B、1-8.5min为95％流动相A+5％流动相B逐步替换到100％流动相B，8.5-11min为90％流动相A+...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕云平，柯星，范一雷，何丹丹，周善慧，
申请(专利权)人：浙江警察学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33