一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法技术

本发明专利技术提供了一种柱后衍生‑液相色谱检测尿素的方法，属于检测技术领域。该方法包括以下步骤：(1)取待测水样，注入液相色谱柱进行分离；(2)液相色谱分离后的流动相进入衍生池，与衍生化试剂进行反应；(3)经过衍生化的流动相流入荧光检测器进行荧光检测，得到待测水样中尿素含量。该方法采用柱后衍生液相色谱检测方式，将尿素在色谱柱中实现分离后，在衍生池内与衍生化试剂反应，具有灵敏度高、检出限低、抗干扰能力强的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法
本专利技术属于化学分析领域，具体涉及一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法。
技术介绍
人体代谢分解蛋白质过程中产生的尿素，会随着尿液、汗液排出体外，而人在游泳时这些排出体外的尿素，会对水体造成污染，尿素浓度超标时甚至会引发多种疾病，更有可能对皮肤黏膜造成损伤。游泳池水中尿素含量作为公共卫生监测的一项重要指标，它反映了游泳池水受污染的情况，根据国家市场监督管理总局制定的GB37488-2019公共场所卫生指标及限值要求，游泳池水中尿素质量浓度必须小于3.5mg/L。因此，检测水中尿素是十分必要的。目前，水中尿素含量的检测方法有分光光度比色法、流动注射分光光度法、脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联速率测定法、柱前衍生-液相色谱荧光检测法，然而这些方法各自存在前处理时间长，水浴加热显色稳定性较差，线性不好，线性范围较窄、柱前衍生副产物分离困难、柱前衍生化过程易引入杂质等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足之处，提供一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法。本专利技术的柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，采用柱后衍生，具有灵敏度高、检出限低、抗干扰能力强的优点。为了达到上述目的，采用了一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，包括以下步骤：(1)取待测水样，注入液相色谱柱进行分离；(2)液相色谱分离后的流动相进入衍生池，与衍生化试剂进行反应；(3)经过衍生化的流动相流入荧光检测器进行荧光检测，得到待测水样中尿素含量。>上述柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，将尿素在色谱柱中实现分离后，在衍生池内与衍生化试剂反应，检测的是衍生产物。由于其重现性好，影响因素少，引入物质比较少，从而具有灵敏度高、检出限低、抗干扰能力强的优点。在其中一个实施例中，所述色谱柱采用HSST3色谱柱。尿素作为强极性化合物，常规的通用型反相C18柱只适合分析非极性或中性化合物，对强极性化合物不保留，与水相兼容性不好，本专利技术人经反复筛选比较后选择HSST3色谱柱对尿素进行分离，HSST3色谱柱对极性分子的反相保留能力较强，对尿素在柱上的保留具有较好效果。在其中一个实施例中，所述色谱柱规格为150mm×4.6mm，填料粒径为5μm。在其中一个实施例中，所述衍生化试剂为0.5±0.2g/L的呫吨氢醇甲醇水溶液，其中含有体积百分浓度为0.5±0.2％的盐酸。可以理解的，上述体积百分浓度为以浓盐酸(12mol/L)为浓度100％计，即体积百分浓度为0.5％的盐酸表示100mL溶液中有0.5mL浓盐酸。常规技术中，尿素柱后衍生化试剂常选用尿酶和碘，通过多步反应来测定，但操作繁琐，采用呫吨氢醇作为衍生化试剂能简化测定步骤。在其中一个实施例中，所述衍生化试剂中甲醇和水的体积比为3±0.5:1。呫吨氢醇难溶于水，易溶于醇，容易引起系统压力超压，极大的限制了其在柱后衍生中的应用。本专利技术通过采用甲醇和水的混合溶剂配制呫吨氢醇衍生化试剂，并反复尝试调整有机相和水相比例，成功解决难溶于水带来的系统压力超压问题，使得呫吨氢醇可用于柱后衍生检测中。在其中一个实施例中，所述衍生化试剂通过以下方法配制：称取0.50±0.2g呫吨氢醇溶于750mL甲醇中，再加入250mL去离子水，加入5±2mL浓盐酸，再用甲醇定容至1000mL，真空抽滤，即得。现有技术均是在柱前衍生中采用呫吨氢醇检测尿素，上述衍生化试剂使呫吨氢醇顺利应用于柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法中，无需借助酶或碘的多步柱后衍生反应生成荧光物质来测定。在其中一个实施例中，所述液相色谱分离采用等度洗脱方式，洗脱条件包括：柱温：40±5℃；流动相：去离子水；流速：0.75±0.1mL/min。上述等度洗脱方式，避免使用复杂的流动相体系。在其中一个实施例中所述衍生池的温度为35-50℃，衍生化试剂进入衍生池的流速为0.25±0.05mL/min。采用上述条件，可实现在线衍生化，使尿素衍生产生峰面积最大。在其中一个实施例中，荧光检测器的激发波长为213±2nm，发射波长为308±2nm。现有技术中呫吨氢醇与尿素柱前衍生产物荧光检测波长有两种，一种激发波长233nm，发射波长600nm；另一种激发波长213nm，发射波长308nm，通过对比两种波长3D扫描尿素标准溶液衍生后流动相，发现采用激发波长213nm，发射波长308nm时，基线平稳，噪音小。所述方法中，以参考品溶液的标准衍生物保留时间定性，外标法定量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术的一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，采用柱后衍生液相色谱检测方式，将尿素在色谱柱中实现分离后，在衍生池内与衍生化试剂反应，具有灵敏度高、检出限低、抗干扰能力强的优点。并且，本专利技术的方法避免使用复杂的流动相体系，无需借助酶或碘的多步柱后衍生反应生成荧光物质来测定，解决了国标分光光度法前处理时间长、水浴加热显色稳定性较差、线性不好、线性范围较窄等问题。实验结果表明，采用本专利技术的方法测定水中尿素，尿素质量浓度在1.0mg/L～100.0mg/L范围内呈良好线性，相关系数为0.9999，方法检出限为0.18mg/L，定量限为0.54mg/L，加标回收率在91.7％～103.4％之间，RSD在1.2％～4.7％之间，具有较好的检出性能。附图说明图1是本专利技术实施例2中不同衍生池温度对尿素衍生产物峰面积的影响；图2是本专利技术实施例4中尿素标准衍生产物的色谱图；图3是本专利技术实施例4中250mg/L氨和100mg/L尿素标准溶液的色谱图；图4是本专利技术实施例3中电喷雾正离子模式下100mg/L尿素衍生物总离子色谱图；图5是本专利技术实施例3中尿素标准品衍生产物N,N-二脲基呫吨的结构图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将结合附图和实施例对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在限制本专利技术。定义：本专利技术所述的HSST3色谱柱，是指与100％水性流动相兼容，采用高强度硅胶(TSS)为基质的C18色谱柱。以下实施例所涉及的材料、试剂、仪器、统计学分析软件来源：材料：待测水样来源于广州市黄埔区辖区内自来水、游泳池水和河涌水。试剂：尿素纯度标准物质GBW09201来源于中国计量科学研究院，纯度>99.8％；呫吨氢醇购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，纯度为98％；甲醇购于上海安谱实验科技股份有限公司，UV-HPLC级；盐酸购于广州化学试剂厂，优级纯；三氯甲烷购于广州化学试剂厂，分析纯；实验本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)取待测水样，注入液相色谱柱进行分离；/n(2)液相色谱分离后的流动相进入衍生池，与衍生化试剂进行反应；/n(3)经过衍生化的流动相流入荧光检测器进行荧光检测，得到待测水样中尿素含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取待测水样，注入液相色谱柱进行分离；
(2)液相色谱分离后的流动相进入衍生池，与衍生化试剂进行反应；
(3)经过衍生化的流动相流入荧光检测器进行荧光检测，得到待测水样中尿素含量。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱采用HSST3色谱柱。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述色谱柱规格为150mm×4.6mm，填料粒径为5μm。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生化试剂为0.5±0.2g/L的呫吨氢醇甲醇水溶液，其中含有体积百分浓度为0.5±0.2％的盐酸。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述衍生化试剂中甲醇和水的体积比为3±0.5:1。


6.根据权利要求5所...

【专利技术属性】
技术研发人员：周金森，吴秋婷，林宗伟，刘赐敏，陈泳，罗晓燕，
申请(专利权)人：广州市黄埔区疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：广东;44