依达拉奉氯化钠注射液中杂质苯肼的分离检测方法技术

本发明专利技术公开了一种依达拉奉氯化钠注射液中杂质苯肼的分离检测方法，采用HPLC法，以0.05mol/L磷酸二氢铵溶液(pH3.5)和甲醇为流动相，进行梯度洗脱，实现苯肼与其他杂质的有效分离，检测速度快、成本低、操作简单且具有良好的灵敏度、专属性、重复性和准确度，是依达拉奉氯化钠注射液质量控制的行之有效的检测方法。法。

Separation and determination of phenylhydrazine in edaravone sodium chloride injection

【技术实现步骤摘要】
依达拉奉氯化钠注射液中杂质苯肼的分离检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种依达拉奉氯化钠注射液中杂质苯肼的分离 检测方法。

技术介绍

[0002]缺血性脑卒中(Ischemic cerebral stroke)即脑梗死，占全部卒中的70％～80％，是指各种原 因所致脑部血液供应障碍，导致脑组织缺血、缺氧性坏死，出现相应的神经功能缺损症状。 在我国，脑卒中已经成为全国城乡居民首要死亡原因，也是全球第二大死亡原因。脑率中具 有高发病率、高病残率、高病死率和高并发症发生率等特点，严重危害人类健康。存活的患 者中，仅有10％左右能完全恢复正常功能，绝大多数患者均留有偏瘫、失语等后遗症，给社 会和家庭造成严重的负担。
[0003]依达拉奉是一种脑保护剂(自由基清除剂)，化学命名为3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮； 分子式为：C
10
H
10
N
20
，化学结构式如下：
[0004][0005]临床研究提示N-乙酰门冬氨酸(NAA)是特异性的存活神经细胞的标志，脑梗塞发病初 期含量急剧减少。脑梗塞急性期患者给予依达拉奉，可抑制梗塞周围局部脑血流量的减少， 使发病后第28天脑中NAA含量较甘油对照组明显升高。临床前研究提示，大鼠在缺血再灌 注后静脉给予依达拉奉，可阻止脑水肿和脑梗塞的进展，并缓解所伴随的神经症状，抑制迟 发性神经元死亡。机理研究提示，依达控奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细 胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。从而具有较好的治疗脑卒中的疗效，并且，依达 拉奉氯化钠注射液还可用于肌萎缩侧索硬化症(ALS)的治疗。
[0006]依达拉奉氯化钠注射液是一种理想的脑保护药物制剂，最早在2010年由日本由田边三菱 制药公司研发上市，商品名为RADICUT，处方如下表所示：
[0007][0008][0009]苯肼为依达拉奉合成过程中的中间体，根据日本IF文件，苯肼在依达拉奉氯化钠
注射液 储存过程中也会降解产生，而根据文献显示，苯肼的临床主要毒性反应为急性血管内出血， 内脏器官损害包括肝、肾、心、骨髓和中枢神经系统等的多发性损害，高浓度还可引起肺组 织损害；雄性羁鹑静注苯肼0.6、6、60mg/kg，给药后24h和72h均产生明显的溶血反应，并 伴有淋巴细胞增多、单核细胞减少和嗜酸性细胞减少。
[0010]现有报道中，中国药典2015版依达拉奉原料质量标准中收载了采用反向高效液相色谱法 测定杂质苯肼的方法，而依达拉奉氯化钠注射液采用该方法检测时，注射液中未知杂质对苯 肼峰测定的干扰很大，专属性无法满足要求。为了准确、快速的检测依达拉奉氯化钠注射液 中的杂质苯肼，本专利技术提供了一种新的检测方法。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的在于提供一种用反相高效液相色谱法分离检测依达拉奉氯化钠注射液中杂 质苯肼的方法，实现对达拉奉注射液中杂质苯肼的快速、准确检测。
[0012]本专利技术杂质苯肼的检测方法采用液相色谱检测，检测条件如下：采用反相高效液相色谱 柱，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动性B为甲醇或乙腈，等度洗脱或梯度洗脱，检测波长为 220～300nm，柱温为：25～40℃，优选30℃～40℃；流速为0.6～1.2ml/min，优选0.8～1.2ml/min。
[0013]上述检测方法，优选的，所述反相高效液相色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 本专利技术一个具体的技术方案采用InertSustain C18，4.6mm
×
150mm，5μm。
[0014]优选的，所述流动相A为0.05mol/L磷酸二氢铵溶液(优选pH值3.3～3.5，具体的实施例为 用20％磷酸调节pH值至3.5)，所述流动相B为甲醇。
[0015]优选的，所述高效液相色谱法采用梯度洗脱，优选初始洗脱使用的流动相为比例为 4％～6％流动相B+94％～96％流动相A。优选的梯度洗脱程序如下：
[0016][0017]优选的，本法所用检测器为紫外检测器，检测波长为245nm。
[0018]优选的，所述反相高效液相色谱法色谱柱的柱温为35℃。
[0019]优选的，所述反相高效液相色谱法流动相的流速为1.0ml/min。
[0020]优选的，所述配制对照品溶液的溶剂为流动相A。
[0021]对照品溶液的制备：精密称取苯肼对照品适量，加0.05mol/L磷酸二氢铵溶液(用20％ 磷酸调节pH值至3.5)溶解并稀释制成每1ml中含0.15μg的溶液，作为对照品溶液 (0.15μg/ml)。
[0022]供试品溶液的制备：取依达拉奉氯化钠注射液原液直接进样，临用前取样(0.3mg/ml)。
[0023]本专利技术的有益效果：
[0024]本专利技术所述的检测方法，苯肼峰与相邻峰之间的分离度不低于1.5，其他杂质峰不
干扰苯 肼峰峰检测。采用依达拉奉氯化钠注射液原液直接进样，省去了样品前处理的步骤，配制方 法十分简便，且具有良好的灵敏度、专属性、重复性和准确度，是依达拉奉氯化钠注射液中 杂质苯肼检测的行之有效的方法，从而进一步保证依达拉奉氯化钠注射液的质量，保证患者 用药安全。
附图说明
[0025]图1为实施例1中供试品加标溶液溶液HPLC图。
[0026]图2为实施例2中苯肼紫外紫外吸收光谱图。
[0027]图3为实施例3洗脱方式-1条件下HPLC对比图。
[0028]图4为实施例3洗脱方式-2条件下HPLC对比图。
[0029]图5为实施例3洗脱方式-3条件下HPLC对比图。
[0030]图6为实施例5中苯肼对照品溶液HPLC图。
[0031]图7为实施例5中依达拉奉氯化钠注射液供试品溶液HPLC图。
[0032]图8为实施例5中依达拉奉氯化钠注射液供试品加标溶液HPLC图。
具体实施方式
[0033]下面将结合具体实施例及参照附图对本专利技术进一步说明，本专利技术的方式包括但不仅限于 以下实施例。
[0034]本专利技术涉及的依达拉奉氯化钠注射液可以商业购买，或者配制与市售制剂处方一致的依 达拉奉氯化钠注射液。
[0035]实施例1中国药典2015版中依达拉奉原料药杂质苯肼的检测方法；
[0036]液相色谱条件：
[0037]仪器：液相色谱仪-紫外检测器；
[0038]色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
[0039]流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢铵溶液(用20％磷酸调节pH值至3.5)(25:75)；
[0040]检测波长：226nm。
[0041]实验步骤：
[0042]对照品溶液：取苯肼适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml约含0.15μg 的溶液，作为对照品溶液；
[0043]供试品溶液：取依达拉奉氯化钠注射液原液直接进样；
[0044]供试本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.依达拉奉氯化钠注射液中杂质苯肼的检测方法，其特征在于采用反相高效液相色谱柱，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动性B为甲醇或乙腈，等度洗脱或梯度洗脱，检测波长为220～300nm，柱温为：20～45℃；流速为0.6～1.2ml/min。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述反相高效液相色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂.。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述流动相A为0.05mol/L磷酸二氢铵溶液，所述流动相B为甲醇。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于所述流动相A pH值3.3～3.5。5.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈卫阳，吴娟娟，朱雄，
申请(专利权)人：江苏晶立信医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：