一种模拟尿液基质、稳定剂及在尿液中儿茶酚胺检测方面的应用制造技术

本发明专利技术具体涉及一种模拟尿液基质、稳定剂及在尿液中儿茶酚胺检测方面的应用。本发明专利技术提供了一种模拟尿液基质及适用于尿液中儿茶酚胺及其代谢物检测的稳定剂。所述模拟尿液基质与正常人尿液空白基质的检测效果接近，相比正常人尿液具有更好的稳定性。所述稳定剂能够降低多种儿茶酚胺类物质的降解程度及玻璃基制品吸附效果。另外，上述模拟尿液基质配合稳定剂可用于儿茶酚胺及其代谢物检测的校准品、质控品制备，制备成为冻干制品后各物质偏差在10％以内，能够稳定保存一年以上。

【技术实现步骤摘要】
一种模拟尿液基质、稳定剂及在尿液中儿茶酚胺检测方面的应用
本专利技术属于儿茶酚胺及其代谢物检测
，具体涉及一种模拟尿液基质及在尿液样品检测中的应用、一种适用于儿茶酚胺的稳定剂及尿液中儿茶酚胺检测的校准品和/或质控品制剂以及一种尿液中儿茶酚胺的检测方法。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。儿茶酚胺(Catecholamines,CATs)是一类含有二羟基苯基的胺类化合物，是由肾上腺髓质和一些交感神经元嗜铬细胞分泌的一类非常重要的神经递质，也是重要的激素物质。其主要包括肾上腺素(Epinephrine,E)、去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、多巴胺(Dopamine,DA)。这3种儿茶酚胺经儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)催化分别生成变肾上腺素(Metanephrine,MN)、去甲变肾上腺素(Normetanephrine，NMN)及3-甲氧酪胺(3-Methoxytyramine,3-MT)而失去活性；进一步，肾上腺素、去甲肾上腺素的主要终末代谢产物为香草扁桃酸(Vanillymandelicacid,VMA)，多巴胺的终末代谢产物为高香草酸(Homovanillicacid,HVA)。儿茶酚胺类物质作为神经递质和激素物质，具有较强的生理学活性，在大脑和神经信号传导中起着重要的作用。血浆和尿液中CAs及其代谢物水平与人体多种生理、病理现象有密切关系，不仅对人体的心血管系统、神经系统、内分泌系统、肾脏、平滑肌组织等的生理活动起着广泛的调节作用，还同时影响人体的代谢。儿茶酚胺类物质，作为维持人体正常运转的重要神经递质，与神经内分泌疾病有重要的相关性。目前，临床上关于儿茶酚胺类及其代谢物质在人体内含量的检测，主要是用于嗜铬细胞瘤或副神经节瘤的诊断筛查；神经母细胞瘤及相关肿瘤诊断及复查；评价自主神经功能障碍、自主神经功能衰竭、自主神经功能病变。临床研究发现检测生物样本中的CAs水平不仅对于嗜铬细胞瘤、副神经节瘤、神经母细胞瘤、高血压、心肌梗塞、肾上腺髓质增生等疾病的诊断和治疗具有重要的临床意义，并且有助于甲状腺功能异常、充血性心力衰竭、糖尿病、肾脏功能不全等疾病的诊断。同时，对于神经电生理等基础医学研究也具有重要的意义。嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PHEOs)或交感神经节(副神经节瘤，paraganglioma,PGLS)的患者血浆或尿液儿茶酚胺水平可能持续或间歇性升高。这会导致间歇性或持续性高血压，以及间歇性的心悸、心律失常、头痛、出汗、苍白、焦虑、震颤和恶心。神经母细胞瘤和相关肿瘤(神经节神经母细胞瘤和神经节神经瘤)患者血浆或尿液中1种或若干儿茶酚胺水平的间歇性或连续升高，偶尔也可出现在其他神经外胚层肿瘤中。遗传或获得性自主功能障碍或自主功能缺失以及自主神经病变的症状特点是在适当的生理刺激下(例如，改变姿势从仰卧到站立，寒冷刺激，运动，压力刺激)1种或几种儿茶酚胺释放量不足。近年来，国内外检测儿茶酚胺类物质的方法有荧光法、放射免疫法、生物法及高效液相色谱法等。其中荧光法的检测限较高，使得测定时的灵敏度达不到要求；放射免疫法的操作步骤繁琐，价格也比较昂贵，难以在临床上推广普及；生物法的稳定性较差，对样品保存和预处理要求较高而不易实现对临床血药浓度的实时监测。相比于上述几种检测方法，高效液相色谱-串联质谱法因其具有高效、高通量、高灵敏度、高特异性等优点，成为儿茶酚胺及其代谢产物研究的首选方法。LC-MS/MS分析技术针对离子对进行检测，特异性高，能够避免交叉反应的干扰，检测结果更加准确可靠，对开发适用于临床测定儿茶酚胺及其代谢产物的检测具有重要意义。目前所报道的LC-MS/MS用于检测儿茶酚胺类或其代谢物所用样本类型一般为尿液或者血浆，用于定量检测人体体液中儿茶酚胺及其代谢产物时，一般都会用到校准品及质控品，校准品用于标准曲线的获得从而准确定量，而质控品用于检验标准曲线的可靠性，从而提高了儿茶酚胺代谢物检测的可靠性。由于儿茶酚胺及其代谢产物属于人体内源性物质，因此在制备用于定量检测人体尿液中儿茶酚胺及其代谢产物的校准品和质控品的过程中，需要制备空白基质。邹继华等2020年公开的专利“血浆型冻干粉儿茶酚胺类物质及代谢物的质量控制物质制备和应用”中，提供了空白血浆基质的制备方法及质量控制物质的制备和应用，但是没有关于空白尿液基质的制备方法；成晓亮等2020年已公开的专利“超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中8种儿茶酚胺及其代谢物的试剂盒”中，仅提到空白尿液基质，但是并没有提供空白尿液基质的获得方法；程雅婷等2019年公开的专利“一种空白尿液基质及其用途”中，提供了一种空白尿液基质的获得方法，但是该方法需要收集人尿液，而且空白尿液基质的制备过程复杂，生产成本高，且批次间的质量不可控，容易造成不同批次生产的校准品及质控品的定量差异，从而造成定量不准确，而且液体状态的校准品和质控品存在保存条件苛刻，稳定保存的时间较短，运输不方便等问题。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的缺陷，本专利技术目的在于提高尿液中儿茶酚胺类物质检测的稳定性，为了实现该技术目的，本专利技术提供了一种模拟尿液基质及适用于尿液中儿茶酚胺的稳定剂。基于该模拟尿液基质及稳定剂，本专利技术还提供了尿液中儿茶酚胺物质检测的校准品及质控品，上述校准品及质控品优选为冻干产品，应用方便并且可以稳定保存一年以上。基于上述技术效果，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术第一方面，提供一种模拟尿液基质，所述模拟尿液基质由以下比例的成分构成：1～3％氯化钠，1～3％葡萄糖，0.5～1.5％磷酸氢二钠，0.5～1.5％羟脯氨酸，0.05～0.15％磷酸氢二钾，0.005～0.015％硫酸锌，0.005～0.015％草酸钙，0.005～0.015％草酸镁，余量为水。本专利技术第二方面，提供第一方面所述模拟尿液基质在尿液中样品检测领域的应用。尿液检测是临床常用的检测手段，对于临床诊断、判断疗效和预后有着十分重要的价值。在尿液中样品的检测领域，在检测内源性物质时，检测人员需要实现采集空白尿液基质配制相应的校准品，而空白尿液的获取较为繁琐，并且难以长期保存。本专利技术提供的模拟尿液基质首先能够很好模拟待测样品在尿液中的游离状况，其次，该模拟尿液基质具有良好的稳定性，方便配置，应用于校准品、质控品等的配制十分方便，能够有效检测工作的繁琐程度。本专利技术第三方面，提供一种儿茶酚胺稳定剂，所述稳定剂至少包括丁基羟基茴香醚、柠檬酸钠及甲酸。为了进一步降低儿茶酚胺在尿液基质中的降解程度，本专利技术还针对儿茶酚胺的稳定剂进行了开发，上述丁基羟基茴香醚、柠檬酸钠及甲酸的组合能够满足至少包括多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、3-甲氧酪胺、高香草酸或香草扁桃酸在内的检测稳定剂，特别的，甲酸还能够有效的降低玻璃基制品对儿茶酚胺的吸附性，减少检测过程中仪器带来的误差。本专利技术第四方面，提供一种尿液中儿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种模拟尿液基质，其特征在于，所述模拟尿液基质由以下比例的成分构成：1～3％氯化钠，1～3％葡萄糖，0.5～1.5％磷酸氢二钠，0.5～1.5％羟脯氨酸，0.05～0.15％磷酸氢二钾，0.005～0.015％硫酸锌，0.005～0.015％草酸钙，0.005～0.015％草酸镁，余量为水。/n

【技术特征摘要】
1.一种模拟尿液基质，其特征在于，所述模拟尿液基质由以下比例的成分构成：1～3％氯化钠，1～3％葡萄糖，0.5～1.5％磷酸氢二钠，0.5～1.5％羟脯氨酸，0.05～0.15％磷酸氢二钾，0.005～0.015％硫酸锌，0.005～0.015％草酸钙，0.005～0.015％草酸镁，余量为水。


2.如权利要求1所述模拟尿液基质，其特征在于，所述模拟尿液基质中各成分及比例如下：1.5～2.5％氯化钠，1.5～2.5％葡萄糖，0.8～1.2％磷酸氢二钠，0.8～1.2％羟脯氨酸，0.08～0.12％磷酸氢二钾，0.008～0.012％硫酸锌，0.008～0.012％草酸钙，0.008～0.012％草酸镁，余量为水；
优选的，所述模拟尿液基质的配方及配制方式如下：在超纯水中加入2％氯化钠，2％葡萄糖，1％磷酸氢二钠，1％羟脯氨酸，0.1％磷酸氢二钾，0.01％硫酸锌，0.01％草酸钙，0.01％草酸镁，充分搅拌混匀后，得到所述模拟尿液基质；
优选的，所述模拟尿液基质的中各成分的比例如下：1.5％氯化钠，2.2％葡萄糖，0.8％磷酸氢二钠，1.2％羟脯氨酸，0.08％磷酸氢二钾，0.012％硫酸锌，0.012％草酸钙，0.012％草酸镁，余量为水；将上述成分充分搅拌混匀后，得到所述模拟尿液基质。
优选的，所述模拟尿液基质的中各成分的比例如下：2.5％氯化钠，1.5％葡萄糖，1.2％磷酸氢二钠，0.8％羟脯氨酸，0.12％磷酸氢二钾，0.08％硫酸锌，0.08％草酸钙，0.08％草酸镁，余量为水；将上述成分充分搅拌混匀后，得到所述模拟尿液基质。


3.权利要求1或2所述模拟尿液基质在尿液中样品检测领域的应用。


4.如权利要求3所述模拟尿液基质在尿液中样品检测领域的应用，其特征在于，所述模拟尿液基质的应用方式包括，用于代替空白尿液基质，优选的，用于配制待测样品的校准品或质控品。


5.一种儿茶酚胺稳定剂，其特征在于，所述稳定剂至少包括丁基羟基茴香醚、柠檬酸钠及甲酸。


6.如权利要求5所述儿茶酚胺稳定剂，其特征在于，所述稳定剂中，还包括维生素C；
或，所述丁基羟基茴香醚、柠檬酸钠及甲酸的加入比例为1.5～2.5：0.8～1.2：1.5～2.5；
或，所述儿茶酚胺稳定剂应用于液体样品中儿茶酚胺及其代谢物的检测，所述儿茶酚胺及其代谢物包括多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、3-甲氧酪胺、高香草酸或香草扁桃酸；所述液体样品包括有机试剂样本、血液样品、组织液样品或尿液样本。


7.如权利要求5所述儿茶酚胺稳定剂，其特征在于，所述儿茶酚胺稳定剂的使用方法如下：将上述稳定剂加入空白尿液基质中后再加入儿茶酚胺校准品或质控品；
或，在获取待测尿液样本后将所述稳定剂加入待测尿液样本中再进行儿茶酚胺及其代谢物的检测。


8.一种尿液中儿茶酚胺检测的校准品和/或质控品制剂，其特征在于，所述儿茶酚胺包括其代谢物，具体为多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、3-甲氧酪胺、高香草酸或香草扁桃酸；所述校准品和/或质控品制剂采用权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯振，景叶松，弭兆元，
申请(专利权)人：山东英盛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37