【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医疗和生物检测，尤其涉及一种用于癫痫用药指导的检测组合物、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、本部分的陈述仅仅是提供了与本专利技术相关的
技术介绍
信息，不必然构成在先技术。
2、癫痫是最常见的慢性神经系统疾病之一，癫痫是由多种原因导致的中枢神经系统功能短暂性失调的临床综合征，是脑细胞群异常的超同步化放电引起的突发性、暂时性、发作性脑功能紊乱的慢性神经系统疾病。癫痫患者需要长期甚至终生服用抗癫痫药物进行治疗。在服用抗癫痫药物的患者中，仍有部分患者存在诊断不明确或治疗不规范的现象；患者过于担心抗癫痫药物的副作用，服药依从性差，随意停药、减量或换药。部分非专科医生对癫痫的诊断、分类不准确，治疗不规范，选药不恰当，盲目地使用多药治疗。针对同一疾病、同一人群常采用相同的药物和剂量，由于药物反应的个体化差异，部分患者用药后可能疗效不佳，甚至发生严重的不良反应。导致药物反应个体化差异的原因有年龄、体重、性别、饮食、遵守医嘱的程度、同时患有其他疾病、同时服用其他药物、种族、遗传因素等,研究显示遗传因素在癫痫药物治疗中发挥了主要作用，可能是癫痫疗效和不良反应的预测因素。
3、目前癫痫用药基因检测技术中，部分采用以pcr为基础的检测手段，如rt pcr、arms pcr、一代测序等，这种检测方式一次仅能检测少量的基因的少量位点，对临床用药难以提供有针对性的实验依据；还有部分高通量基因检测的技术，如二代测序等，这种检测方式的成本高、周期长，且对实验操作及数据分析的要求较高，只能作为实验手段使用，在实际临床操作时难以普及
技术实现思路
1、为克服上述现有技术的不足，本专利技术的目的之一是提供一种癫痫用药指导的引物组；本专利技术的目的之二是提供一种用于癫痫用药指导的试剂盒；本专利技术的第三个目的在于提供上述引物组或试剂盒在癫痫治疗用药指导中的应用；本专利技术的第四个目的在于，提供一种检测抗癫痫药物代谢及耐药相关snp位点基因型的方法。
2、为实现上述目的，本专利技术的一个或多个实施例提供了如下技术方案：
3、本专利技术的第一方面，提供一种检测癫痫snp的引物组，所述snp包括：rs1045642、rs3789243、rs2032582、rs1800497、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1051740、rs2234922、rs1061235、rs2517754、rs10484555、rs144012689、rs3909184、rs2844682、rs2074491、rs4711240、rs1265110、rs9263726、rs1801280、rs1799930、rs113994095、rs113994097、rs3812718、rs2304016、rs4240803、rs2011425、rs1042597、rs28365062和rs7668258；
4、所述引物组包括扩增引物，所述扩增引物序列如seq id no.1-62所示。
5、本专利技术的具体实施方式中，所述引物组还包括31条单碱基延伸引物；
6、所述单碱基延伸引物序列如seq id no.63-94所示。
7、本专利技术的具体实施方式中，所述31条单碱基延伸引物的摩尔浓度为:0.3-2.9μm。
8、本专利技术的具体实施方式中，所述扩增引物与单碱基延伸引物的添加量如下：
9、
10、
11、本专利技术的第二方面，提供一种用于癫痫用药指导检测的组合物，所述组合物包括第一方面所述的引物组。
12、本专利技术的第三方面，提供一种用于癫痫用药指导检测的产品，所述组合物包括第一方面所述的引物组。
13、本专利技术的第四方面，一种用于癫痫用药指导检测的试剂盒，所述组合物包括第一方面所述的引物组。
14、本专利技术的具体实施方式中，所述试剂盒还包括用于maldi-tof ms核酸质谱检测的常规试剂组分。
15、本专利技术的第五方面，提供第一方面所述的引物组在制备癫痫用药指导检测产品中的应用。
16、本专利技术的第六方面，提供一种检测待测样本中检测抗癫痫药物代谢及耐药相关snp位点基因型的方法，包括如下步骤：
17、1)、用第一方面所述扩增引物对待测样本进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；
18、2)、将所述pcr扩增产物进行碱性磷酸酶消化，得到消化产物；
19、3)、将所述消化产物使用上述引物中的单单碱基延伸引物进行单碱基延伸反应，得到单碱基延伸反应产物；
20、4)、将所述单碱基延伸反应产物经过纯化后，点样上机进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测，得到待测样本中癫痫药物代谢及耐药相关snp位点基因型；
21、优选的，所述pcr扩增的模板为待测样本的基因组dna；
22、所述pcr扩增的程序为：95℃15min；95℃15s、59℃30s、72℃30s，35个循环；60℃10min；
23、所述单碱基延伸反应的程序为：95℃30s，95℃5s、(52℃5s、80℃5s,5个循环)，进行40个循环，再72℃3min。
24、以上一个或多个技术方案存在以下有益效果：
25、上述技术方案高效一次性完成与癫痫用药抵抗相关的多个snp位点检测，从而完成他癫痫精准用药基因检测，从而有效降低实验成本和临床检测成本；本专利技术根据每个snp位点设计的pcr引物及延伸引物，具有较高的特异性。对于指导癫痫的临床精准用药具有非常高的应用价值，从而指导医生根据患者的遗传学状况给与癫痫个体化用药，使患者在获得最大药物疗效的同时，减少药物不良反应，从而大大推进个体化用药进程。
26、本专利技术可以在一个反应体系中同时检测多个突变位点，提高检测准确性、提高通量、降低检测成本、提高检测效率，从而能够便于临床普及使用。
27、本专利技术使用的是maldi-tof ms技术克服了pcr技术多重扩增能力不足的问题，解决了药物基因组检测中多个变异位点同时检测的需求；其不依赖于荧光探针和荧光类试剂的检测流程，质谱技术的高准确性和高灵敏度保证了检测的高准确度和重复性；同时其检测成本相比二代测序技术具备更高的性价比。
28、综上，上述技术方案操作简单，具有质谱的精准性，检测结果稳定，提高检测阳性率，因此具有良好的实际应用之价值。
29、本专利技术附加方面的优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种检测癫痫SNP的引物组，其特征在于，所述SNP包括：rs1045642、rs3789243、rs2032582、rs1800497、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1051740、rs2234922、rs1061235、rs2517754、rs10484555、rs144012689、rs3909184、rs2844682、rs2074491、rs4711240、rs1265110、rs9263726、rs1801280、rs1799930、rs113994095、rs113994097、rs3812718、rs2304016、rs4240803、rs2011425、rs1042597、rs28365062和rs7668258；
2.如权利要求1所述的检测癫痫SNP的引物组，其特征在于，所述引物组还包括31条单碱基延伸引物；所述单碱基延伸引物序列如SEQ ID NO.63-94所示。
3.如权利要求2所述的检测癫痫SNP的引物组，其特征在于，所述31条单碱基延伸引物的摩尔浓度为：0.3-2.9μM
4.如权利要求3所述的检测癫痫SNP的引物组，其特征在于，所述扩增引物与单碱基延伸引物的添加量如下：
5.一种用于癫痫用药指导检测的组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1-4任一项所述的引物组。
6.一种用于癫痫用药指导检测的产品，其特征在于，所述组合物包括权利要求1-4任一项所述的引物组。
7.一种用于癫痫用药指导检测的试剂盒，其特征在于，所述组合物包括权利要求1-4任一项所述的引物组。
8.如权利要求7所述用于癫痫用药指导检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于MALDI-TOF MS核酸质谱检测的常规试剂组分。
9.权利要求1-4任一项所述的引物组在制备癫痫用药指导检测产品中的应用。
10.一种检测待测样本中检测抗癫痫药物代谢及耐药相关SNP位点基因型的方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种检测癫痫snp的引物组，其特征在于，所述snp包括：rs1045642、rs3789243、rs2032582、rs1800497、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1051740、rs2234922、rs1061235、rs2517754、rs10484555、rs144012689、rs3909184、rs2844682、rs2074491、rs4711240、rs1265110、rs9263726、rs1801280、rs1799930、rs113994095、rs113994097、rs3812718、rs2304016、rs4240803、rs2011425、rs1042597、rs28365062和rs7668258；
2.如权利要求1所述的检测癫痫snp的引物组，其特征在于，所述引物组还包括31条单碱基延伸引物；所述单碱基延伸引物序列如seq id no.63-94所示。
3.如权利要求2所...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯振，刘利勤，郭启雷，
申请(专利权)人：山东英盛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。