基于质谱分析的小分子代谢物提取方法技术

本发明专利技术属于分析检测领域，提供了一种基于质谱分析的小分子代谢物提取方法，包括：取10

【技术实现步骤摘要】
基于质谱分析的小分子代谢物提取方法


[0001]本专利技术属于分析检测领域，特别涉及基于质谱分析的小分子代谢物提取方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]代谢组学在生物学各个方面的重要性日益增加，需要开发和采用综合的实验方法。代谢组学主要检测平台有气质联用技术(GC
‑
MS)、液质联用技术(LC
‑
MS)和核磁共振(NMR)。目前GC
‑
MS、LC
‑
MS因能分析范围很广的代谢组分，色谱分析作为代谢组学重要的工具。然而这两种技术中引用的样本都需要提取方法进行分析。
[0004]代谢组学分析要求提取方法应满足理想的标准，如提取最多数量的代谢物、非选择性的不排除具有特定物理化学性质的分子、非破坏性的通过化学或物理手段修饰代谢物等。因此探究一种通用且高效的前处理方法尤为重要。
[0005]小分子代谢物的提取要求尽可能多的提取生物样本中小分子代谢物，同时不改变其物理化学性质。目前已知的代谢物提取方法主要通过有机溶剂进行提取，例如，冷甲醇、热乙醇、高氯酸或碱、热甲醇以及乙腈等。
[0006]但上述方法存在以下问题：
[0007]1)生物样本用量大，为提高方法灵敏度，往往采用大样本量，而生物样本尤其是血清、血浆等较难获得，微量(10
‑
50ul)样本检测往往更具有优势；
[0008]2)提取时间长、操作复杂；
[0009]3)细菌类样本前处理过程不得当会堵塞色谱柱或者液相管路等，使得仪器寿命缩短、影响检测色谱峰响应及峰形。

技术实现思路

[0010]为了解决上述问题，本专利技术提供一种基于质谱分析的小分子代谢物提取方法。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0012]本专利技术的第一个方面，提供了一种基于质谱分析的小分子代谢物提取方法，包括：
[0013]取10
‑
50uLμL样本加入浓度为30％
‑
80％甲醇水溶液，涡旋混匀，在20～25Hz下超声4～6min进行破碎，得到提取液；
[0014]将所述提取液进行离心，取上清液，真空浓缩，收集粉末，加入甲醇水溶液复溶，得到复溶液；
[0015]将复溶液转移至0.22um尼龙膜离心管内，离心后转移至上样管中，即得。
[0016]本专利技术的第二个方面，提供了上述的方法制备的可用于质谱分析的小分子代谢物样品。
[0017]本专利技术的第三个方面，提供了上述的样品在小分子代谢物质谱分析中的应用。
[0018]本专利技术的有益效果
[0019]1)微量样本检测：保证提取效率的同时缩小样本量，对于难获得样本、大队列样本采集、临床上采样困难的患者、同一个样本同时进行多项研究等情况，可以保证微量样本提取效率，完成小分子代谢组学的研究；
[0020]2)本专利技术采用超声破碎提取工艺，通过一步法同步完成细胞被摸破碎和代谢组化合物提取，简化了前处理过程，节省了劳力与时间成本；
[0021]3)液质联用分析技术，色谱柱是很昂贵的耗材也是分析中最重要的核心技术，同时液质联用仪价格昂贵、维护成本高，合适的前处理方法可最大化延长耗材和仪器寿命。本专利技术基于前期实验基础，将特殊类型样本如细菌，采取过膜手段保证仪器系统的稳定性和维护成本。
附图说明
[0022]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示例性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0023]图1为琥珀酸和苹果酸TIC图，其中，(1)琥珀酸TIC图，(前处理过程未过膜柱效下降)，(2)苹果酸TIC图(前处理过程未过膜柱效下降)；
[0024]图2为琥珀酸和苹果酸TIC图，其中，(1)琥珀酸TIC图，(前处理过程过膜处理柱效正常)，(2)苹果酸TIC图(前处理过程过膜处理柱效正常)；
[0025]图3为实施例1检测物质TIC图。
具体实施方式
[0026]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本专利技术使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0027]如
技术介绍
所述，针对现有提取方法生物样本用量大的问题，本专利技术提供了一种基于质谱分析的小分子代谢物提取方法，包括：
[0028]取10
‑
50uLμL样本加入浓度为30％
‑
80％甲醇水溶液，涡旋混匀，在20～25Hz下超声4～6min进行破碎，得到提取液；
[0029]将所述提取液进行离心，取上清液，真空浓缩，收集粉末，加入甲醇水溶液复溶，得到复溶液；
[0030]将复溶液转移至0.22um尼龙膜离心管内，离心后转移至上样管中，即得。
[0031]本专利技术的方法只需要50ul样本量即可提取小分子代谢物，因采用成本低、效率较高的蛋白沉淀法进行代谢物提取，会将样本稀释5
‑
10倍不等，通过真空浓缩仪器对提取液进行低温、真空浓缩，保证提取效率。
[0032]除此之外，针对现有方法提取时间长的问题，本专利技术采用超声破碎提取工艺，通过一步法同步完成细胞被摸破碎和代谢组化合物提取，简化了前处理过程，节省了劳力与时间成本。
[0033]经本专利技术大量多次试验结果显示，特殊细菌样本如细菌，前处理过程不得当会堵塞色谱柱或者液相管路等，使得仪器寿命缩短。本专利技术基于实验积累，在进样前将提取液通
过0.22um尼龙膜过滤，使用离心管式滤膜，离心同时过膜，节省时间，从而达到对液质系统及色谱柱的保护，延长色谱柱和仪器寿命。
[0034]在一些实施例中，所述样本为血清、血浆、组织、细胞、细菌沉淀中的一种。
[0035]在一些实施例中，样本与甲醇水溶液的体积比为0.2～1:6。
[0036]在一些实施例中，所述浓度为30％
‑
80％甲醇水溶液在
‑
18～
‑
20℃下预冷。
[0037]在一些实施例中，提取液进行离心的条件为4～5℃，12000～13000rpm条件下离心18～20min。
[0038]在一些实施例中，向浓缩后的粉末加入50～60μL的10～20％甲醇水溶液复溶。
[0039]在一些实施例中，所述真空浓缩的工艺条件是
‑
20℃(
‑
20～4℃)，1400rpm(1400
‑
2000)，1000mbar，30
‑
60min。
[0040]在一些实施例中，将复溶液转移至0.22um尼龙膜离心管内，4～5℃，12000～13000rpm条件下离心8～10mi本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于质谱分析的小分子代谢物提取方法，其特征在于，包括：取10
‑
50uLμL样本加入浓度为30％
‑
80％甲醇水溶液，涡旋混匀，在20～25Hz下超声4～6min进行破碎，得到提取液；将所述提取液进行离心，取上清液，真空浓缩，收集粉末，加入甲醇水溶液复溶，得到复溶液；将复溶液转移至0.22um尼龙膜离心管内，离心后转移至上样管中，即得。2.如权利要求1所述的基于质谱分析的小分子代谢物提取方法，其特征在于，所述样本为血清、血浆、组织、细胞、细菌沉淀中的一种。3.如权利要求1所述的基于质谱分析的小分子代谢物提取方法，其特征在于，样本与甲醇水溶液的体积比为0.2～1:6。4.如权利要求1所述的基于质谱分析的小分子代谢物提取方法，其特征在于，所述浓度为45％～50％甲醇水溶液在
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18～
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20℃下预冷。5.如权利要求1所述的基于质谱分析的小分子代谢物提取方法，其特征在于，提取液进行离心的条件为4～5℃，12...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯振，景叶松，弭兆元，
申请(专利权)人：山东英盛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：