一种提高腺相关病毒感染细胞感染效率的方法技术

本申请涉及一种提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率的方法，其包括以下步骤：使待感染的所述细胞与DNA复制抑制剂接触，其中所述DNA复制抑制剂包括细胞周期非特异性药物和/或CDK抑制剂。本申请所述的方法可以显著提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率。

【技术实现步骤摘要】
一种提高腺相关病毒感染细胞感染效率的方法
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种提高腺相关病毒感染细胞感染效率的方法。
技术介绍
目前，腺相关病毒AAV已经被广泛应用于基因治疗领域，可以有效感染多种器官组织。但是AAV感染细胞系的能力很弱，尤其是针对AAV3、AAV4、AAV8和AAV9等AAV血清型，这些AAV需要辅助感染腺病毒才能实现有效感染，极大地制约了AAV的应用。因此，目前亟需提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率。
技术实现思路
本申请提供了一种可以显著提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率的方法，其包括使待感染的细胞与DNA复制抑制剂(例如细胞周期非特异性药物，和/或CDK抑制剂)接触。本申请所述的方法具有下述技术效果中的一种或多种：1)能够显著提高腺相关病毒AAV感染细胞后细胞的感染阳性率；2)能够显著提高(包含目的基因的)腺相关病毒AAV感染细胞后细胞中目的基因的mRNA表达水平；3)能够显著提高(包含目的基因的)腺相关病毒AAV感染细胞后细胞中目的基因的蛋白质表达水平。本申请还发现，不同的细胞种类、不同的DNA复制抑制剂等多种因素与所述感染效率密切相关。本申请提供了一种包含DNA复制抑制剂和细胞培养基的药物产品。所述药物产品有助于提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率。一方面，本申请提供了一种提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率的方法，其包括以下步骤：使待感染的所述细胞与DNA复制抑制剂接触。在某些实施方式中，所述接触包括体外接触。在某些实施方式中，所述接触的时间为约0.5-约4小时。在某些实施方式中，所述接触的温度为约30℃-约40℃。在某些实施方式中，待感染的所述细胞与DNA复制抑制剂在细胞培养基中接触。在某些实施方式中，所述细胞培养基包括DMEM培养基、HAM’SF12K培养基和/或FBS培养基。在某些实施方式中，所述细胞包括：HEK293细胞、293T细胞和/或CHO-K1细胞。在某些实施方式中，所述细胞选自下组：HEK293细胞、293T细胞和CHO-K1细胞。在某些实施方式中，所述细胞的MOI值至少为102。在某些实施方式中，所述AAV的血清型包括：AAV8、AAV2、AAV5和/或AAV9。在某些实施方式中，所述AAV的血清型选自下组：AAV8、AAV2、AAV5和AAV9。在某些实施方式中，所述方法包括以下步骤：所述接触后，利用所述AAV感染所述细胞。在某些实施方式中，所述感染效率的提高包括，和不与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞的感染效率相比，与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞的感染效率显著提高。在某些实施方式中，所述感染效率的提高包括，和不与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞经所述感染后表达目的基因所编码的mRNA的表达水平相比，与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞经所述感染后表达目的基因所编码的mRNA的表达水平提高至少5倍。在某些实施方式中，所述感染效率的提高包括，和不与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞经所述感染后表达目的基因所编码的蛋白质的表达水平相比，与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞经所述感染后表达目的基因所编码的蛋白质的表达水平显著提高。在某些实施方式中，所述DNA复制抑制剂包括细胞周期非特异性药物。在某些实施方式中，所述DNA复制抑制剂包括丝裂霉素C。在某些实施方式中，所述丝裂霉素C的浓度为约5μg/mL-约200μg/mL。在某些实施方式中，所述丝裂霉素C的浓度为约10μg/mL-约100μg/mL。在某些实施方式中，所述DNA复制抑制剂包括CDK抑制剂。在某些实施方式中，所述CDK抑制剂包括Flavopiridol或其衍生物，和/或，Roscovitine或其衍生物。在某些实施方式中，所述的CDK抑制剂的浓度为约5μM-约200μM。在某些实施方式中，所述的CDK抑制剂的浓度为约10μM-约100μM。在某些实施方式中，所述方法包括以下步骤：使待感染的所述细胞与所述丝裂霉素C接触，其中所述细胞包括：HEK293细胞、293T细胞和/或CHO-K1细胞。在某些实施方式中，所述方法包括以下步骤：使待感染的所述细胞与所述Flavopiridol或其衍生物接触，其中所述细胞包括HEK293细胞。在某些实施方式中，所述方法包括以下步骤：使待感染的所述细胞与所述CDK抑制剂Roscovitine或其衍生物接触，其中所述细胞包括CHO-K1细胞。另一方面，本申请提供了本申请所述的DNA复制抑制剂在提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率中的用途。另一方面，本申请提供了一种药物产品，其包括DNA复制抑制剂和细胞培养基，其中所述DNA复制抑制剂。在某些实施方式中，所述药物产品为药物组合物。在某些实施方式中，所述细胞培养基包括DMEM培养基、HAM’SF12K培养基和/或FBS培养基。在某些实施方式中，所述DNA复制抑制剂包括丝裂霉素C。在某些实施方式中，所述丝裂霉素C的浓度为约5μg/mL-约200μg/mL。在某些实施方式中，所述DNA复制抑制剂包括Flavopiridol或其衍生物，或，Roscovitine或其衍生物。在某些实施方式中，所述Flavopiridol或其衍生物的浓度为约5μM-约200μM。在某些实施方式中，所述Roscovitine或其衍生物的浓度为约5μM-约200μM。在某些实施方式中，所述DNA复制抑制剂和所述细胞培养基位于不同的容器中。在某些实施方式中，所述药物产品包括可表达目的基因的腺相关病毒AAV。在某些实施方式中，所述AAV的血清型包括：AAV8、AAV2、AAV5和/或AAV9。本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及专利技术的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。附图说明本申请所涉及的专利技术的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及专利技术的特点和优势。对附图简要说明书如下：图1显示的是不同血清型AAV-GFP感染HEK293的细胞表达GFP所产生的荧光。图2显示的是不同血清型AAV-GFP感染HEK293的细胞表达GFP所产生的平均荧光强度。图3显示的是不同血清型AAV-GFP感染的CHO-K1细胞表达GFP所产生的荧光。图4显示的是不同血清型AAV-GFP感染的CHO-K1细胞表达GFP所产生的平均荧光强度。图5显示的是过低感染复数(MOI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率的方法，其包括以下步骤：使待感染的所述细胞与DNA复制抑制剂接触。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率的方法，其包括以下步骤：使待感染的所述细胞与DNA复制抑制剂接触。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞选自下组：HEK293细胞、293T细胞和CHO-K1细胞。


3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述AAV的血清型包括：AAV8、AAV2、AAV5和/或AAV9。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其包括以下步骤：所述接触后，利用所述AAV感染所述细胞。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述感染效率的提高包括，和不与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞的感染效率相比，与所述DNA复制抑制剂接触的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈邵宏，郝丹丹，史天永，和赛超，牛琳琳，
申请(专利权)人：北京中因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11