工程化调节性T细胞制造技术

本发明专利技术提供一种用于诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性或过敏性疾病、促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊乱的慢性炎症的包含嵌合抗原受体(CAR)的工程化调节性T细胞(Treg)，其中，所述CAR包含胞内域，所述胞内域包含STAT缔合基序和JAK1结合基序和/或JAK2结合基序。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化调节性T细胞
本专利技术涉及工程化调节性T细胞以及这种细胞的治疗用途。特别地，本专利技术涉及对具有有限的IL-2可用性的微环境不太敏感的工程化调节性T细胞。
技术介绍
调节性T细胞(Treg)是具有抑制功能的免疫细胞，其控制细胞病变免疫反应并且对维持免疫耐受至关重要。Treg的抑制特性可以用于治疗，例如以改善和/或预防炎症性疾病、自身免疫性疾病和移植中的免疫介导的器官损伤。Treg免疫疗法通常涉及Treg的分离、培养和扩增，然后输入患者体内。作为该过程的一部分，Treg可以与细胞因子、药物、其他细胞或抗原孵育，以提高Treg的生存能力和功能和/或赋予Treg针对特定抗原的增强的反应性。这些相同的目的可以通过基因工程Treg以靶向预定的抗原来实现，例如通过嵌合抗原受体(CAR)来实现。生长因子白细胞介素-2(IL-2)对Treg的体内平衡(产生、增殖、存活)以及它们的抑制功能和表型稳定性至关重要。活化的常规T细胞(Tcon)是体内IL-2的主要来源。相比之下，Treg不能产生IL-2，并且依赖旁分泌获得微环境中存在的Tcon所产生的IL-2。IL-2的可用性对体外扩增并转移到患者体内的Treg的治疗效果具有重要影响。这是由于以下原因造成：1)体外扩增方案通常需要高浓度的IL-2，这使得Treg高度依赖于这种细胞因子；2)由于免疫抑制药物的施用，患者体内的IL-2浓度通常会降低；以及3)在发炎的组织微环境中，获得IL-2通常是有限的。肝移植构成了一个特别具有挑战性的适应症，因为已知发炎的肝脏中的IL-2的水平会降低，而钙调神经磷酸酶抑制剂的常规使用会进一步加剧这种情况，因为钙调神经磷酸酶抑制剂会显著降低Tcon产生IL-2的能力。低剂量外源性IL-2的施用恢复由钙调神经磷酸酶抑制剂诱导的Treg功能障碍，并且促进Treg在肝脏中的积累。然而，低剂量Treg的治疗用途的一个问题是存在同时活化Tcon的风险，这可能会增强组织损伤。WO2017/218850描述了组成型表达STAT5的工程Treg，以便提供有效的IL-2信号。然而，使用这种方法可以预测几个挑战。组成型STAT5表达提供了下述风险，即，工程化Treg可能发挥非特异性的强大免疫抑制作用，并且由于工程化Treg的高增殖率，工程化Treg可能使内源性Treg库过度生长并降低其TCR库，这可能导致自身免疫。最后，考虑到已知STAT5的突变会促进T细胞幼淋巴细胞白血病，并且STAT5在许多癌症中是组成型活化的，这些工程化Treg可能会带来转化的风险。因此，仍然需要用于生产对具有有限的IL-2可用性的微环境不太敏感的工程化Treg的方法，以及提高工程化Treg在已施用免疫抑制药物的受试者体内增殖和存活的有效性的方法。
技术实现思路
本专利技术人已经开发了一种工程化调节性T细胞(Treg)，其能够在Treg与预定抗原结合后提供有效的IL-2信号。因此，本专利技术的工程化Treg解决了与过继转移Treg的高IL-2依赖性相关的问题，而不需要施用外源性IL-2而是通过以抗原特异性方式提供有效的IL-2信号。因此，第一方面，本专利技术提供一种用于诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性或过敏性疾病、促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊乱的慢性炎症的包含嵌合抗原受体(CAR)的工程化Treg，其中，所述CAR包含胞内域，所述胞内域包含STAT5缔合基序和JAK1结合基序和/或JAK2结合基序。另一方面，本专利技术提供一种用于诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防GvHD、自身免疫性或过敏性疾病、促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊乱的慢性炎症的药物组合物，所述药物组合物包含根据本专利技术的第一方面的工程化Treg。本专利技术还涉及一种诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防GvHD、自身免疫性或过敏性疾病、促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊乱的慢性炎症的方法，所述方法包括向受试者施用根据本专利技术的工程化Treg或药物组合物的步骤。本专利技术还提供根据本专利技术的工程化Treg在制备用于诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防细胞和/或体液移植排斥、治疗和/或预防GvHD、自身免疫性或过敏性疾病、或者促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊乱的慢性炎症的药物中的用途。合适地，所述受试者可以是移植受体，并且本专利技术涉及诱导对移植物(例如移植的器官)的耐受性。特别地，所述受试者可以是经受免疫抑制疗法的移植受体。另一方面，本专利技术提供一种包含胞内域的CAR，所述胞内域包含STAT5缔合基序和JAK1结合基序和/或JAK2结合基序，但不包含STAT3缔合基序。合适地，CAR胞内域不包含氨基酸序列YXXQ(SEQIDNO:52)。合适地，所述CAR胞内域的IL2Rβ部分不包含氨基酸序列YXXQ(SEQIDNO:52)。另一方面，本专利技术提供一种包含胞内域的CAR，所述胞内域包含STAT5缔合基序、JAK1结合基序和/或JAK2结合基序以及JAK3结合基序。本专利技术进一步提供编码本专利技术的CAR的多核苷酸和编码本专利技术的CAR的载体。另一方面，本专利技术提供一种包含本专利技术的CAR的工程化Foxp3+Treg，并且所述包含本专利技术的CAR的工程化Foxp3+Treg用于治疗。因此，本专利技术提供包含CAR的工程化Treg，该CAR仅在CAR与其同源抗原结合后才向Treg提供STAT5介导的促生存信号。特别地，在抗原识别后，本专利技术的CAR聚集，并且信号通过CAR的胞内信号传导域(胞内域)传递至工程化Treg。由于本专利技术的CAR包含胞内域，所述胞内域包含STAT5缔合基序和JAK1结合基序和/或JAK2结合基序，所以本专利技术的CAR的聚集导致STAT5和JAK1和/或JAK2的募集和活化；从而提供以抗原特异性方式增强工程化Treg的功能和存活的信号，而不依赖于微环境中IL-2的可用性。与受试者的普通T细胞群相比，本专利技术的工程化Treg在抗原识别后为工程化CAR-Treg提供存活优势方面可能特别有效。特别地，在例如其中免疫抑制药物的使用降低了IL-2的可用性的移植的情况下，本专利技术的CAR-Treg的STAT5信号传导在不利的微环境中对本专利技术的细胞提供了额外的存活和功能作用。附图说明图1-示出了本专利技术的CAR构建体的图图2-抗HLA.A2IL2RCAR构建体的示例性设计包括IL2R胞内域的不同组合的示例性抗HLA.A2CAR构建体的示意图。(A)dCAR构建体：HLA.A2scFv抗原识别域、CD28铰链域、CD28TM以及eGFP。(B)CD28z构建体：HLA.A2scFv抗原识别域、CD28铰链域、CD28TM、CD28信号传导域、CD3z信号传导域以及eGFP。(C)IL2R构建体1：HLA.A2scFv抗原识别域、CD28铰链域、CD28TM、CD28信号传导域、截短型IL2RB胞内域、CD3z信号传导域以及eGFP。(D)IL2R构建体1：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性或过敏性疾病、促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊乱的慢性炎症的包含嵌合抗原受体(CAR)的工程化调节性T细胞(Treg)，其中，所述CAR包含胞内域，所述胞内域包含STAT5缔合基序和JAK1结合基序和/或JAK2结合基序。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180831 GB 1814203.41.一种用于诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性或过敏性疾病、促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊乱的慢性炎症的包含嵌合抗原受体(CAR)的工程化调节性T细胞(Treg)，其中，所述CAR包含胞内域，所述胞内域包含STAT5缔合基序和JAK1结合基序和/或JAK2结合基序。


2.根据权利要求1所述用途的工程化Treg，其中所述Treg是Foxp3+Treg。


3.根据权利要求1或权利要求2所述用途的工程化Treg，其中所述CAR胞内域不包含STAT3缔合基序。


4.根据权利要求1或权利要求2所述用途的工程化Treg，其中所述CAR胞内域不包含氨基酸序列YXXQ(SEQIDNO:52)。


5.根据任一前述权利要求所述用途的工程化Treg，其中所述CAR胞内域包含两个或更多个STAT5缔合基序。


6.根据任一前述权利要求所述用途的工程化Treg，其中所述一个或多个STAT5缔合基序来自白细胞介素受体(IL)受体胞内域。


7.据权利要求1至6中任一项所述用途的工程化Treg，其中所述一个或多个STAT5缔合基序来自IL2Rβ、IL7Rα、IL-3Rβ(CSF2RB)、IL-9R、IL-17Rβ、促红细胞生成素受体、促血小板生成素受体、生长激素受体和催乳激素受体。


8.根据任一前述权利要求所述用途的工程化Treg，其中所述STAT5缔合基序包含氨基酸基序YXXF/L(SEQIDNO:8)，其中，X为任意氨基酸。


9.根据任一前述权利要求所述用途的工程化Treg，其中所述STAT5缔合基序包含氨基酸基序YCTF(SEQIDNO:9)、氨基酸基序YFFF(SEQIDNO:10)、氨基酸基序YLSL(SEQIDNO:11)和/或氨基酸基序YLSLQ(SEQIDNO:12)中的一种或多种。


10.根据权利要求9所述用途的工程化Treg，其中所述STAT5缔合基序包含氨基酸基序YLSLQ(SEQIDNO:12)。


11.根据权利要求10所述用途的工程化Treg，其中所述胞内域包含第一STAT5缔合基序和第二STAT5缔合基序，所述第一STAT5缔合基序包含氨基酸基序YLSLQ(SEQIDNO:12)，所述第二STAT5缔合基序包含氨基酸基序YCTF(SEQIDNO:9)或氨基酸基序YFFF(SEQIDNO:10)。


12.根据权利要求11所述用途的工程化Treg，其中所述胞内域包含以下STAT5缔合基序：YLSLQ(SEQIDNO:12)、YCTF(SEQIDNO:9)以及YFFF(SEQIDNO:10)。


13.根据任一前述权利要求所述用途的工程化Treg，其中所述JAK结合基序是JAK-1结合基序。


14.根据权利要求13所述用途的工程化Treg，其中所述JAK-1结合基序来自白细胞介素受体(IL)受体胞内域。


15.根据任一前述权利要求所述用途的工程化Treg，其中所述JAK-1结合基序包含SEQIDNO:13至SEQIDNO:19中的任一个所示的氨基酸基序，或者与SEQIDNO:13至SEQIDNO:19具有至少80％同一性的变体。


16.根据权利要求15所述用途的工程化Treg，其中所述JAK1结合基序是SEQIDNO:13所示的氨基酸基序，或者是与SEQIDNO:13具有至少80％同一性的变体。


17.根据任一前述权利要求所述用途的工程化Treg，其中所述CAR胞内域包含SEQIDNO:1所示的IL2Rβ胞内域，或者与SEQIDNO:1具有至少80％序列同一性的变体。


18.根据权利要求1至17中任一项所述用途的工程化Treg，其中所述CAR胞内域包含SEQIDNO:23或24任一所示的截短型IL2Rβ胞内域，或者与SEQIDNO:23或24具有至少80％序列同一性的变体。


19.根据任一前述权利要求所述用途的工程化Treg，其中所述CAR胞内域还包含JAK3结合基序。


20.根据权利要求19所述用途的工程化Treg，其中所述JAK3结合基序包含SEQIDNO:25或26，或者与SEQIDNO:25或26具有至少80％序列同一性的变体。


21.根据权利要求19或20所述用途的工程化Treg，其中所述CAR胞内域包含SEQIDNO:45或53，或者与SEQIDNO:45或53具有至少80％序列同一性的变体。


22.一种用于诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性或过敏性疾病、促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊乱的慢性炎症的药物组合物，其包含权利要求1至21任一项中所定义的工程化Treg。


23.一种诱导对移植物的耐受性、治疗和/或预防移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性或过敏性疾病、促进组织修复和/或组织再生或者改善继发于代谢紊...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·马丁内斯洛德拉，A·桑切斯富尤，G·隆巴尔迪，
申请(专利权)人：伦敦国王学院，
类型：发明
国别省市：英国;GB