可滤过的含倍癌霉素抗体-药物缀合物组合物及相关方法技术

在包含水和乙腈的溶剂体系并且具有30％至60％乙腈的组合物中，基于倍癌霉素的抗体‑药物缀合物可以容易地与非缀合的倍癌霉素接头‑药物分离。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可滤过的含倍癌霉素抗体-药物缀合物组合物及相关方法
本专利技术涉及包含含倍癌霉素(duocarmycin)抗体-药物缀合物(antibody-drugconjugate，ADC)和任选的非缀合形式的倍癌霉素接头-药物的组合物。特别地，所述组合物允许容易地滤出ADC并与非缀合形式的倍癌霉素接头-药物(如果存在的话)分离。本专利技术还涉及用于组合物制备和用于批准含倍癌霉素ADC批次的方法。
技术介绍
单克隆抗体(monoclonalantibody，mAb)是制药行业最重要的试剂之一。mAb也已与多种细胞毒性药物缀合以形成抗体-药物缀合物或“ADC”。通常来说，接头将细胞毒性药物连接至mAb。因此，ADC包含单克隆抗体、接头和细胞毒性药物。可以使用表面暴露的赖氨酸(P.M.LoRussoetal.，ClinicalCancerResearch，2011，17(20)，6437-6447)或通过链间二硫键的还原产生的游离半胱氨酸(J.Katzetal.，ClinicalCancerResearch，2011，17(20)，6428-6436；P.DSenteretal.，NatureBiotechnology2012，30(7)，631-637)的侧链使接头-药物与抗体缀合。或者，缀合可以是通过突变mAb的合适位置处的工程化半胱氨酸残基的侧链进行的位点特异性缀合(C.R.BehrensandB.Liu，MAbs，2014，6(1)，46-53)。倍癌霉素已经用作ADC中的细胞毒性药物(WO2008/083312、WO2010/062171、WO2011/133039、WO2015/177360)。倍癌霉素，首次分离自链霉菌属(Streptomyces)物种的培养液，是抗肿瘤抗生素家族的成员，该家族包括倍癌霉素A、倍癌霉素SA和CC-1065。倍癌霉素与DNA的小沟结合并且随后引起DNA的不可逆烷基化。这破坏了核酸结构，最终导致肿瘤细胞死亡。近年来，含倍癌霉素ADC如曲妥珠单抗多卡马嗪(trastuzumabduocarmazine)(SYD985，曲妥珠单抗vc-seco-DUBA)已进入临床前和临床开发(M.M.C.vanderLeeetal.，MolecularCancerTherapeutics，2015，14(3)，692-703；J.Blacketal.，MolecularCancerTherapeutics，2016，15(8)，1900-1909；ClinicalTrials.govNCT02277717)。基于其潜在的抗肿瘤活性，预期将研究更多的含倍癌霉素ADC。在用于生产ADC的工业方法中，在接头-药物与mAb缀合之后，进行多种纯化步骤。进行质量控制程序以确保这些生物治疗分子的批次间可重复性。由于其毒性，ADC组合物中必须严格控制的杂质之一是游离接头-药物、即非缀合形式的接头-药物的含量。为了确定游离接头-药物的含量，通常实践是首先相对于游离接头-药物降低ADC的浓度，然后测量游离接头-药物的量。否则，ADC的高浓度使得很难确定接头-药物的非常低的含量。实际上，ADC的量可能为约10mg/ml，而游离接头-药物的量通常小于10μg/ml，并且通常小得多，例如为0.2μg/ml或0.1μg/ml。在常规色谱分析技术中，极大过量的ADC通常掩盖了游离接头-药物的非常小的含量(如果有的话)；例如，非常低的浓度导致游离接头-药物被其他组分所掩盖和/或另外低于检出限(limitofdetection)。因此，常规上，可以通过将ADC与含水样品的其余部分分离然后分析样品的其余部分中(游离)接头-药物的存在来确定游离接头-药物的含量。例如，使用截留分子量为约30kDa的过滤器的离心过滤对含水样品进行直接过滤通常可以获得包含游离接头-药物的滤液，而ADC则保留在过滤器上(参见WO2015/095953，第194页，组织蛋白酶B接头裂解试验)。或者，已经通过用冷甲醇处理样品并对其进行离心以使得ADC沉淀而非缀合形式的接头-药物保留在上清液中来使游离接头-药物与ADC分离(参见，L.Chenetal.，MAbs，2016，8(7)，1210-1223)。然而，我们发现，倍癌霉素接头-药物存在异常困难。如本领域中所公开的典型过滤程序或直接沉淀无法将游离倍癌霉素接头-药物与含倍癌霉素ADC充分分离。例如，在过滤过程中，游离倍癌霉素接头-药物倾向于不通过过滤器进入滤液，而是与含倍癌霉素ADC一起保留在过滤器上。这导致在滤液中捕获的游离接头-药物的量不充分，并且使得游离接头-药物含量的测定不准确。因此，需要用于使游离倍癌霉素接头-药物与含倍癌霉素ADC分离的方法。类似地，需要用于在含有含倍癌霉素ADC和倍癌霉素接头-药物(如果存在的话)的样品中对倍癌霉素接头-药物进行检测和定量的方法。
技术实现思路
本专利技术部分地基于以下发现：乙腈可有助于通过过滤使非缀合形式的倍癌霉素接头-药物与含倍癌霉素ADC分离。因此，本专利技术的第一方面涉及组合物，其包含：(a)包含水和乙腈的溶剂体系；(b)酸；(c)式(I)的抗体-药物缀合物：Ab-(L-D)m(I)，其中Ab是抗体或其抗原结合片段，L-D是倍癌霉素接头-药物，并且m表示平均DAR，其为1至12；以及任选地，(d)非缀合形式的倍癌霉素接头-药物；其中所述组合物包含30％至60％(v/v)的所述乙腈，优选35％至55％的所述乙腈。本专利技术的另一方面涉及一种方法，其包括将(i)式(I)的抗体-药物缀合物的水溶液或冻干产品与(ii)包含水、乙腈和酸的稀释介质合并以形成组合物：Ab-(L-D)m(I)，其中Ab是抗体或其抗原结合片段，L-D是倍癌霉素接头-药物，并且m表示平均DAR，其为1至12，所述水溶液或冻干产品任选地还包含非缀合形式的倍癌霉素接头-药物，其中所述组合物包含30％至60％(v/v)、优选35％至55％的所述乙腈。本专利技术的另一方面涉及放行(releasing)/批准(approving)抗体-药物缀合物批次的方法，其包括：1)从抗体-药物缀合物批次获得样品，其中所述批次包含与倍癌霉素接头-药物缀合的抗体和任选的非缀合形式的倍癌霉素接头-药物；2)将所述样品与包含水、乙腈和酸的稀释介质合并以形成可滤过的组合物，所述可滤过的组合物包含30％至60％(v/v)、优选35％至55％的所述乙腈；3)过滤所述可滤过的组合物以获得基本上不含所述抗体-药物缀合物的滤液；4)分析所述滤液并确定所述滤液包含的所述非缀合形式的倍癌霉素接头-药物是否低于预定水平；以及5)如果所述非缀合形式的倍癌霉素接头-药物低于所述预定水平，则放行/批准所述抗体-药物缀合物批次。附图说明图1示出根据实施例1的非缀合的倍癌霉素接头-药物vc-seco-DUBA的色谱图。图2示出来自实施例2的色谱图，其中分析了来自曲妥珠单抗多卡马嗪批次的样品，并且发现其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.组合物，其包含：(a)包含水和乙腈的溶剂体系；(b)酸；(c)式(I)的抗体-药物缀合物：/nAb-(L-D)

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181109 EP 18205459.31.组合物，其包含：(a)包含水和乙腈的溶剂体系；(b)酸；(c)式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)m(I)，
其中Ab是抗体或其抗原结合片段，L-D是倍癌霉素接头-药物，并且m表示平均DAR，其为1至12；以及任选地，(d)非缀合形式的倍癌霉素接头-药物；
其中所述组合物包含30％至60％(v/v)、优选35％至55％的所述乙腈。


2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含所述非缀合形式的倍癌霉素接头-药物。


3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述抗体-药物缀合物以0.1至100mg/ml、优选0.5至50mg/ml、更优选1.0至10mg/ml的浓度包含。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述酸以0.01％至5％(v/v)、优选0.05％至2％、更优选0.05％至1.5％、最优选0.1％至1％的浓度包含。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述酸选自三氟乙酸、甲酸和盐酸。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述非缀合的倍癌霉素接头-药物如式(IV)所示：



其中n为0至3；R5选自：



y为1至16；并且
R6选自：





7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述非缀合的倍癌霉素接头-药物如下式所示：





8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述Ab是IgG抗体或其抗原结合片段。


9.包括以下的方法：将(i)式(I)的抗体-药物缀合物的水溶液或冻干产品与(ii)包含水、乙腈和酸的稀释介质合并以形成组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：卡罗吕斯·约翰内斯·埃德加·万登赫夫，
申请(专利权)人：拜奥迪斯私人有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL