人源化抗SIRPα抗体制造技术

本发明专利技术涉及适用于抗癌治疗的针对SIRPα的人源化抗体。本发明专利技术还涉及人源化抗SIRPα抗体在治疗人实体瘤和恶性血液病中的用途，所述人源化抗SIRPα抗体任选地与另外的抗癌治疗剂组合。剂组合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人源化抗SIRP
α
抗体


[0001]本专利技术涉及针对SIRPα的人源化抗体以及这些抗体(任选地与抗癌治疗剂组合)在治疗癌症中的用途。

技术介绍

[0002]自20世纪90年代末以来，识别肿瘤细胞上的抗原的治疗性抗体已可用于治疗癌症。这些治疗性抗体可通过不同的途径对恶性细胞发挥作用。通过抗体与其恶性细胞上的靶标结合所触发的信号传导途径导致细胞增殖的抑制或凋亡。治疗性抗体的Fc区可触发补体依赖性细胞毒性(complement dependent cytotoxicity，CDC)、抗体依赖性细胞毒性(antibody
‑
dependent cellular cytotoxicity，ADCC)和/或抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody
‑
dependent cellular phagocytosis，ADCP)。另一种可能的机制可以是抗体依赖性诱导T细胞(CD8
+
和/或CD4
+
)抗肿瘤应答(抗体依赖性抗原呈递(antibody
‑
dependent antigen presentation，ADAP)；DiLillo and Ravetch Cell 2015，161(5)，1035
‑
1045；Bournazos and Ravetch Immunity 2017，47(2)，224
‑
233)。这通过在抗原呈递细胞(例如如树突细胞)上表达的Fc受体来发生。然而，治疗性抗体作为单一治疗通常不够有效。改善治疗性抗体效力的一种选择是通过改善ADCC和/或ADCP。这已例如通过改善Fc区对Fcγ受体的亲和力，例如通过氨基酸替换(Richards et al.Mol.Cancer Ther.2008，7(8)，2517
‑
2527)或通过影响Fc区的糖基化(Hayes et al.J.Inflamm.Res.2016，9，209
‑
219)来完成。
[0003]改善治疗性抗体的ADCC和/或ADCP的另一种方式是通过将治疗性抗体与针对信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα，SIRPα)的拮抗性抗体或抗CD47抗体组合(WO2009/131453)。当CD47(已发现其在至少数种人肿瘤类型中和/或上被上调)与在单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和中性粒细胞上表达的抑制性免疫受体SIRPα结合时，SIRPα传递防止通过免疫效应细胞的吞噬作用或其他Fc受体依赖性细胞破坏机制破坏癌细胞的抑制信号。一种机制(假设抗CD47或抗SIRPα抗体通过该机制发挥作用)是通过阻断通过CD47
‑
SIRPα轴产生的抑制性信号传导，导致ADCC和/或ADCP和/或ADAP提高(Tjeng et al.Proc Natl Acad Sci USA 2013，110(27)，11103
‑
11108；Liu et al.Nature Med.2015，21(10)，1209
‑
1215)。
[0004]大多数与CD47
‑
SIRPα相互作用相关的临床研究都已集中在抗CD47抗体作为单一治疗和作为与治疗性抗体组合的治疗二者上(Weiskopf.Eur.J.Cancer 2017，76，100
‑
109；Advani et al.N.Engl.J.Med.2018，379(18)，1711
‑
1721)。尽管事实上CD47在大多数正常组织中的细胞表面上广泛表达，但关于抗CD47抗体作为抗癌治疗剂的研究正在增多。
[0005]尚未对使用抗SIRPα抗体的抗癌单一治疗或组合治疗进行临床研究。关于抗SIRPα抗体的大部分工作是关于CD47
‑
SIRPα相互作用的机制研究，并且已使用鼠抗SIRPα抗体进行；例如报道了鼠12C4和1.23A提高经曲妥珠单抗调理的SKBR3细胞的中性粒细胞介导的ADCC(Zhao et al.PNAS 2011，108(45)，18342
‑
18347)。WO2015/138600公开了鼠抗人SIRPα抗体KWAR23及其嵌合Fab片段，报道了其在体外提高西妥昔单抗介导的吞噬作用。WO2018/
026600中公开了具有包含N297A突变的人IgG1Fc部分的人源化KWAR23。WO2013/056352公开了IgG429AM4
‑
5和其他IgG4人抗SIRPα抗体。以8mg/kg每周给药3次持续4周的IgG429AM4
‑
5降低了注射到NOD scidγ(NSG)小鼠右股骨中的原代人急性髓性白血病(acute myeloid leukaemia，AML)细胞的白血病移植。WO2017/178653公开了与SIRPα1和SIRPα
BIT
结合但不与SIRPγ结合的嵌合抗SIRPα抗体HEFLB。然而，虽然抗体在人源化之后保留与SIRPα
BIT
的结合，但其不再与SIRPα1结合。例如，由于51.3％的白种人具有至少1个SIRPα1等位基因，因此他们的免疫细胞(当杂合时至少部分地)对仅结合SIRPα
BIT
的抗体无反应(Treffers et al.Eur J Immunol.2018，48(2)，344
‑
354)。WO2018/057669公开了针对人SIRPα1和/或SIRPα
BIT
的结构域1的人源化鸡抗SIRPα抗体。WO2018/107058公开了小鼠抗SIRPα抗体3F9和9C2不与SIRPβ
1v1
结合，并且他们得出结论，因此这些抗体是SIRPα特异性的，平衡结合常数分别为1.0x10
‑8和8.0x10
‑8M。WO2018/190719公开了也与人SIRPγ结合但不与人SIRPβ1结合的人源化抗SIRPα抗体。
[0006]人SIRPα在其NH2端配体结合结构域中是高度多态性的(Takenaka et al.Nature Immun.2007，8(12)，1313
‑
1323)：SIRPα
BIT
(v1)和SIRPα1(v2)是两种最常见且最不同(13个残基不同)的多态物并且其对CD47的亲和力非常类似(Hatherley et al.J.Biol.Chem.2014，289(14)，10024
‑
10028；Treffers et al.Eur J Immunol.2018，48(2)，344
‑
354)。其他具有生化特征的人SIRP家族成员是不结合CD47并具有至少两种多态性变体(SIRPβ
1v1
和SIRPβ
1v2
)的SIRPβ1以及在T细胞和活化的NK细胞上表达并以与SIRPα相比低约本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.人源化抗SIRPα抗体或其抗原结合片段，包含重链互补决定区(HCDR)和轻链互补决定区(LCDR)HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：a.HCDR1，其包含SEQ ID NO：36；b.HCDR2，其包含SEQ ID NO：44；c.HCDR3，其包含SEQ ID NO：45；d.LCDR1，其包含SEQ ID NO：39；e.LCDR2，其包含SEQ ID NO：40；和f.LCDR3，其包含SEQ ID NO：41。2.根据权利要求1的人源化抗SIRPα抗体或其抗原结合片段，其中所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段具有来自以下的一种或更多种特性：a.如在25℃下使用如SEQ ID NO：51所示的人SIRPα1胞外结构域通过表面等离子体共振所分析的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段以至少10
‑
10
M，优选至少10
‑
11
M的结合亲和力结合人SIRPα1；b.如在25℃下使用如SEQ ID NO：52所示的人SIRPα
BIT
胞外结构域通过表面等离子体共振所分析的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段以至少10
‑
10
M，优选至少10
‑
11
M的结合亲和力结合人SIRPα
BIT
；c.如在25℃下使用如SEQ ID NO：56所示的食蟹猴SIRPα胞外结构域通过表面等离子体共振所分析的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段以至少10
‑8M，优选至少10
‑9M的结合亲和力结合食蟹猴SIRPα；d.如使用流式细胞术，优选使用荧光激活细胞分选染色通过T细胞结合所测量的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段不结合人SIRPγ；e.如在25℃下使用如SEQ ID NO：55所示的人SIRPγ胞外结构域通过表面等离子体共振所分析的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段不结合人SIRPγ；以及f.如通过IL
‑
2酶联免疫吸附点(ELISpot)和/或T细胞增殖测定所确定的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段不是免疫原性的。3.根据权利要求1或权利要求2的人源化抗SIRPα抗体或其抗原结合片段，其中：a.如在25℃下使用如SEQ ID NO：51所示的人SIRPα1胞外结构域通过表面等离子体共振所分析的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段以至少10
‑
10
M，优选至少10
‑
11
M的结合亲和力结合人SIRPα1；b.如在25℃下使用如SEQ ID NO：52所示的人SIRPα
BIT
胞外结构域通过表面等离子体共振所分析的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段以至少10
‑
10
M，优选至少10
‑
11
M的结合亲和力结合人SIRPα
BIT
；c.如通过表面等离子体共振通过从捕获的CD47中的解离所分析的，阻断CD47与SIRPα1和SIRPα
BIT
结合；以及d.如通过T细胞流式细胞术染色，优选荧光激活细胞分选染色所测量的，所述抗SIRPα抗体或其抗原结合片段不结合人SIRPγ。4.根据前述权利要求中任一项的人源化抗SIRPα抗体或其抗原结合片段，其中：a.所述抗体的重链可变结构域包含4个重链框架区HFR1至HFR4，和3个互补决定区
HCDR1至HCDR3，其以HFR1
‑
HCDR1
‑
HFR2
‑
HCDR2
‑
HFR3
‑
HCDR3
‑
HFR4的顺序有效地连接，其中每个所述重链框架区与SEQ ID NO：8的框架氨基酸序列具有至少90％的氨基酸同一性，或者其中HFR1至HFR4与SEQ ID NO：8的不同之处在于一个或更多个如表8至11中所限定的氨基酸替换；并且b.所述抗体的轻链可变结构域...

【专利技术属性】
技术研发人员：海斯贝特斯，
申请(专利权)人：拜奥迪斯私人有限公司，
类型：发明
国别省市：