【技术实现步骤摘要】
体内细胞增殖标记与示踪系统及其应用
[0001]本发现涉及细胞增殖标记与示踪系统及其应用。
技术介绍
[0002]体内细胞的增殖是一个动态、不稳定的过程,同一类型的细胞在相同时间内的增殖是不同的,捕捉体内细胞增殖的状态对于了解生物生理和病理过程都至关重要,因此捕捉体内细胞的增殖一直是生物学领域内的研究的热点。传统的捕捉细胞增殖的方法主要包括增殖分子标志物染色和DNA类似物以及同位素的掺入。但是三者都存在弊端,首先利用增殖分子标志物染色只能捕捉到短时间内的细胞增殖;其次利用DNA类似物掺入也只能研究一定时间段内的细胞增殖,因为DNA类似物的长期掺入极有可能影响细胞正常的增殖;而利用同位素掺入方法虽然降低了对细胞正常增殖的影响,但是引入了检测困难这一问题。
[0003]目前领域内已经有利用遗传谱系示踪技术进行体内增殖细胞示踪的研究。例如,研究者利用Ki67细胞增殖标记物作为启动子启动可诱导的同源重组酶来同源重组对应的报告基因并标记细胞,即Ki67-CreER工具小鼠与相对应的持续开放的报告基因杂交获得的小鼠。当细胞表达Ki67发生增殖时,Ki67启动子的活跃启动了后续CreER的表达,同时在他莫昔芬(他莫昔芬)诱导下Cre入核将相应的报告基因的LoxP位点发生同源重组将该细胞标记上报告基因对应的荧光。尽管该技术在追踪体内增殖细胞方面有一定的作用,但是存在着明显的缺陷,因为利用Ki67-CreER进行增殖细胞体内示踪的系统依赖于同时存在的两个条件,一是Ki67的活跃启动CreER的表达,另一个就是体内同时存在让Cr ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种核酸分子,选自(1)包含5
’
同源臂和3
’
同源臂以及位于5
’
同源臂和3
’
同源臂之间的第一重组酶的编码序列、雌激素受体ER编码序列以及第二重组酶的识别位点的核酸分子,所述5
’
同源臂和3
’
同源臂能将二者之间的序列重组到基因组中,使得二者之间的序列与基因组中的细胞增殖因子基因共表达,和(2)(1)所述核酸分子的互补序列。2.如权利要求1所述的核酸分子,其特征在于,所述核酸分子的多核苷酸序列从5
’
端到3
’
端依次是5
’
同源臂、第一重组酶的编码序列、第二重组酶的识别位点、雌激素受体ER编码序列、第二重组酶的识别位点和3
’
同源臂,所述5
’
同源臂和3
’
同源臂能将二者之间的序列重组到所述细胞增殖因子基因的5
’
或3
’
端,优选地,所述核酸分子具有选自以下的一个或多个特征:所述细胞增殖因子是Ki67或PCNA,所述5
’
同源臂的核酸序列如SEQ ID NO:1第1-3000位核苷酸所示,所述3
’
同源臂的核酸序列如SEQ ID NO:1第5128-8127位核苷酸所示,所述第一重组酶和第二重组酶分别是Cre和Dre或Dre和Cre,其中,Cre的识别位点是LoxP,Dre的识别位点是rox,Dre的氨基酸序列如SEQ ID NO:2的第1-356位氨基酸所示,Cre的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示,LoxP的核酸序列如SEQ ID NO:4所示,rox的核酸序列如SEQ ID NO:5所示,雌激素受体ER的氨基酸序列如SEQ ID NO:2的第357-666位氨基酸所示。3.一种核酸构建物,含有权利要求1或2所述的核酸分子。4.一种重组酶系统,其特征在于,所述系统包含(1)权利要求1或2所述的核酸分子,和(2)任选的,编码第二重组酶和雌激素受体ER的融合蛋白的核酸分子,(3)任选的,包含以下结构的核酸分子:从5
’
端到3
’
端分别是第一重组酶的识别位点、终止序列、第一重组酶的识别位点和标记物编码序列,或所述系统包含(1)权利要求3所述的核酸构建物,和(2)任选的第二核酸构建物,具有编码第二重组酶和雌激素受体ER的融合蛋白的多核苷酸序列,(3)任选的第三核酸构建物,具有包含以下结构的多核苷酸序列:从5
’
端到3
’
端分别是第一重组酶的识别位点、终止序列、第一重组酶的识别位点和标记物编码序列。5.一种宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞包含选自以下的一种或多种:(1)权利要求1或2所述的核酸分子;(2)权利要求3所述的核酸构建物;(3)权利要求4所述的系统。6.一种构建转基因动物的方法,包括:将F0代第一动物与F0代第二动物或F0代第三动物交配,在子代动物中发生同源重组从
而获得包含第一和第二多核苷酸序列的转基因动物或包含第一和第三多核苷酸序列的转基因动物,或将所述三种F0代动物中...
【专利技术属性】
技术研发人员:周斌,刘秀秀,何灵娟,蒲文娟,
申请(专利权)人:中国科学院分子细胞科学卓越创新中心,
类型:发明
国别省市:
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