心肌细胞特异性过表达Snhg5载体及以其构建转基因动物的方法技术

本发明专利技术构建了一个在心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体α

【技术实现步骤摘要】
心肌细胞特异性过表达Snhg5载体及以其构建转基因动物的方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种心肌细胞特异性过表达Snhg5载体及以其构建转基因小鼠的方法。

技术介绍

[0002]目前，心血管疾病致死率在世界范围内排名第一，而心脏疾病的发生呈逐年升高且呈现年轻化趋势，造成了巨大的健康威胁与经济负担。心力衰竭是导致大多数心脏疾病患者死亡的主要原因(1)。心力衰竭的发生和发展是多种因素参与的复杂变化过程，其中，心脏重构是引起心衰的一个重要原因。心脏重构是指在遗传、环境等众多刺激下，心脏出现的一种适应性反应，主要表现为心脏质量增加、心室壁增厚、心肌细胞体积增大、胚胎期基因表达升高及细胞外基质增多等特征(2)。心脏重构是多种心血管疾病，如高血压、心肌缺血、心律失常等的共同病理过程，随着心脏重构的进展，心力衰歇和心源性猝死发生率显著提升。因此阐明心脏重塑发生发展的机制对防治心力衰竭具有重要意义，寻找调节心脏重塑发生的新型调控分子对于未来寻找防治心衰的新靶点奠定理论基础，对发展心脏疾病个性化治疗策略具有重要和积极地意义。
[0003]转基因技术(transgenic technology)是将外源DNA导入动物受精卵或胚胎干细胞内，以随机插入或同源重组的方式整合到受体染色体中，并随细胞的分裂而遗传给后代的技术(1)。利用转基因技术已为生命科学和医学科学研究提供了一系列理想的疾病模型。建立心脏特异性转基因疾病动物模型对研究心脏疾病发生机制非常必要，目前在心血管疾病研究领域也得到了非常广泛的应用。<br/>[0004]LncRNA(Long non
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coding RNA)是一类本身不编码蛋白、转录本长度超过200nt的长链非编码RNA分子，根据它们在基因组上相对于蛋白编码基因的位置，将其分为正义、反义、双向、内含子间和基因间5种类型(2)。近年来的研究表明，LncRNA在表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等层面上调控基因的表达，参与多种组织器官稳态维持过程(3,4)。随着对LncRNA在心脏中功能研究的深入，心脏组织特异性LncRNA转基因动物也逐渐进入了人们的视线。
[0005]2018年，有研究者建立了心脏特异性LncRNA CARL转基因小鼠，发现该小鼠心肌细胞分裂和增殖减少，在损伤情况下心脏再生能力降低(5)。2019年，另一研究小组建立了心肌细胞特异性过表达HOTAIR转基因小鼠，该小鼠表现出抵抗链脲佐菌素诱导产生的心脏功能受损，氧化应激增加、炎症及心肌细胞死亡(6)。
[0006]我们在前期研究中发现LncRNA Snhg5在主动脉结扎手术(TAC)引起的病理性心肌肥厚和心衰小鼠模型中表达水平明显升高，同时，在收集的人类心衰标本中进行检测也发现人Snhg5表达水平亦升高，提示其在心脏疾病发生过程中可能发挥了重要的作用，但关于其在心脏中的具体功能尚未见报导。
[0007]参考文献
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‑
4958.

技术实现思路

[0014]本专利技术所要解决的技术问题是如何为心脏疾病治疗和药物筛选提供理想的动物模型。
[0015]为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种表达盒，该表达盒的启动子为心肌细胞特异性启动子，靶基因为Snhg5基因，所述Snhg5基因的转录由心肌细胞特异性启动子驱动，所述表达盒能转录序列2所示的LncRNA；
[0016]所述心肌细胞特异性启动子可为核苷酸序列如序列表序列1第1位
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第5480位所示的核酸分子；
[0017]所述Snhg5基因为核苷酸序列是序列表序列1第5525位
‑
第6536位所示的核酸分子。
[0018]上述表达盒中，所述Snhg5基因可为单拷贝或多拷贝。
[0019]上述表达盒还含有报道基因，所述报道基因为人生长激素基因polyA，所述人生长激素基因polyA具体为核苷酸序列是序列表序列1第6586位
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第8742位所示的核酸分子。
[0020]上述表达盒中，心肌细胞特异性启动子、Snhg5基因、人生长激素基因polyA基因三个元件依次顺序排列。
[0021]上述表达盒中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。
[0022]所述的表达盒是指能够在宿主细胞中表达长链非编码RNA(LncRNA)Snhg5的DNA分子。
[0023]具体的，所述表达盒的序列如序列表中序列1的第1位
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第8742位本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达盒，其特征在于：该表达盒的启动子为心肌细胞特异性启动子，靶基因为Snhg5基因，所述Snhg5基因的转录由心肌细胞特异性启动子驱动，所述表达盒能转录序列2所示的LncRNA；所述心肌细胞特异性启动子为核苷酸序列如序列表序列1第1位
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第5480位所示的核酸分子；所述Snhg5基因为核苷酸序列是序列表序列1第5525位
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第6536位所示的核酸分子。2.根据权利要求1所述的表达盒，其特征在于：所述Snhg5基因为单拷贝或多拷贝。3.根据权利要求1或2所述的表达盒，其特征在于：所述表达盒还含有报道基因，所述报道基因为人生长激素基因polyA，所述人生长激素基因polyA具体为核苷酸序列是序列表序列1第6586位
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第8742位所示的核酸分子。4.根据权利要求1
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3任一所述的表达盒，其特征在于：所述表达盒中，心肌细胞特异性启动子、Snhg5基因、人生长激素基因polyA基因三个元件依次顺序排列。5.根据权利要求4所述的表达盒，其特征在于：所述表达盒的序列如序列表中序列1的第1位
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第8853位所示。6.权利要求1
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5任一所述表达盒的相关生物材料，所述相关生物材料为如下C1
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C5中的任一种：C1、含有权利要求1
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5任一所述表达盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：王剑，李振华，杨晓，刘澜涛，侯宁，徐京平，王添乐，孔静祎，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：