一种罗非鱼鳞促骨形成肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种罗非鱼鳞促骨形成肽及其应用。所述罗非鱼鳞促骨形成肽的氨基酸序列：APDPFRMY。本发明专利技术提供的罗非鱼鳞促骨形成肽具有较好的促进成骨细胞增殖活性，可促进成骨细胞ALP表达，有利于成骨细胞的分化和矿化，且安全无毒。

【技术实现步骤摘要】
一种罗非鱼鳞促骨形成肽及其应用
本专利技术属于生物材料
，具体涉及一种罗非鱼鳞促骨形成肽及其应用。
技术介绍
世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)将骨质疏松症定义为一种以机体骨质含量和骨质质量下降、骨组织纤维结构发生破坏、骨脆性增加且容易发生机体骨折为主要特征的全身性骨代谢性疾病。目前，全球骨质疏松患者人数已超2亿。我国是世界上骨质疏松人口数量最多的国家，预测到本世纪中叶，我国老龄人口将会超过4亿，骨量减少、骨质疏松患者将高达2亿。骨质疏松症已成为继糖尿病、心血管病之后的的第三大中老年慢性疾病。随着我国进入老龄化社会，人群骨质疏松症发病率也呈逐年增加的态势，骨质疏松症患者骨质发生疏松后导致的机体骨折严重增加了患者的病残率和病死率，己成为严重的社会公众健康问题。现阶段，临床上治疗骨质疏松症仍以化学药物为主，如双磷酸盐、雌激素、降钙素、氟化物、锶制剂药物。然而这些药物的临床治疗效果并不佳，长期的服用会带来副作用，如雌激素长期使用会增加女性罹患乳腺癌和子宫癌的风险性。经研究发现，一些天然活性肽起到可以预防和治疗骨质疏松的效果。成骨细胞是骨形成细胞，对骨的生长，维持骨量平衡以及骨代谢和损伤后修复，都起着至关重要的作用。它负责着骨基质的合成、分泌以及矿化。故对于取代传统治疗骨质疏松的方法，寻找可以促进成骨细胞增殖的天然活性肽对预防治疗骨质疏松症尤为重要。表皮生长因子受体(EGFR)是最重要的受体酪氨酸激酶之一，是一种53-AA多肽。表皮生长因子(EGF)通过与EGFR的胞外区结合，诱导受体二聚化，激活ERK通路，刺激成骨细胞增殖分化。一些下游信号通路被EGFR酪氨酸激酶触发，包括MAPK，它在增殖、分化和凋亡等复杂细胞反应中发挥关键作用。因此，EGFR的活化对体外基质再生具有重要的影响。对可以诱导EGFR激活的生物活性肽被认为是可以促骨形成的指标。专利CN108586604A就公开了可诱导EGFR激活的促成骨生物活性肽。我国是全球最大罗非鱼养殖加工国，2016年养殖产量达158万吨，约占同年全球总产量的13％，此中大部分罗非鱼被用于鱼片加工。据统计，罗非鱼加工过程中产生的副产物可占所用鱼体总质量的54％，然而我国目前对加工副产物合理利用率较低，不但造成了生物资源浪费，也为环境增加负担。因此，开发利用罗非鱼副产物具有丰富的原料基础和广阔的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有关于罗非鱼骨单体肽的生物利用度的研究缺乏的缺陷或不足，提供一种罗非鱼鳞促骨形成肽。本专利技术提供的罗非鱼鳞促骨形成肽具有较好的促进成骨细胞增殖活性，可促进成骨细胞ALP表达，有利于成骨细胞的分化和矿化，且安全无毒。本专利技术的另一目的在于提供上述罗非鱼鳞促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的药物中的应用。本专利技术的另一目的在于提供上述罗非鱼鳞促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能食品或保健品中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种罗非鱼鳞促骨形成肽，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的氨基酸序列：APDPFRMY(Ala-Pro-Asp-Pro-Phe-Arg-Met-Tyr)。本专利技术提供的罗非鱼鳞促骨形成肽具有较好的促进成骨细胞增殖活性，可促进成骨细胞ALP表达，有利于成骨细胞的分化，且安全无毒。优选地，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的分子量为995.4534Da。优选地，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的质荷比为498.7344。优选地，所述罗非鱼鳞促骨形成肽与EGFR的氢键作用包括ARG285、GLN8、HIS409、LYS322、SER324或THR378中的一种或几种。优选地，所述罗非鱼鳞促骨形成肽与EGFR的疏水相互作用包括ALA286、ASN86、ASP323、ASP344、GLN408、GLY317、GLY343、GLY39、GLY9、HIS346、ILE316、ILE318、LEU325、LEU38、LYS407、MET87、SER11、SER342或THR406中的一种或几种。罗非鱼鳞促骨形成肽可通过如下过程制备得到：S1、将罗非鱼鳞用蒸馏水重复洗三次，把杂质去除；S2、碱洗脱脂：将罗非鱼鳞放入0.1mol/LNaOH溶液(w/v1:10)搅拌24h，清洗至中性；S3、脱钙处理：将罗非鱼鳞放入10％EDTA-2Na(pH7.2，w/v1:10)中，并置于4℃冷库中，期间进行搅拌处理5天，随后将鱼鳞清洗至中性后待用；S4、酸处理：将脱钙后的罗非鱼鳞用质量分数4％的盐酸处理时间18h后水洗至中性，即得到罗非鱼鳞胶原蛋白；将水洗至中性的罗非鱼鳞胶原蛋白中水分滴干，随后置于55℃烘箱中烘干，取出置于密封袋中备用；S5、酶解：利用木瓜蛋白酶进行酶解，料液比为8％，酶解时间为2h，酶底比为0.3％，pH为7，温度为60℃。上述罗非鱼鳞促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的药物中的应用也在本专利技术的保护范围内。优选地，所述罗非鱼鳞促骨形成肽在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。优选地，所述药物包括药学上可接受的盐、载体和/或赋形剂。上述罗非鱼鳞促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能食品或保健品中的应用也在本专利技术的保护范围内。优选地，所述罗非鱼鳞促骨形成肽在制备奶粉、液态乳制品、钙片及补钙制剂或口服液中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的罗非鱼鳞促骨形成肽具有较好的促进成骨细胞增殖活性，可促进成骨细胞ALP表达，有利于成骨细胞的分化和矿化，且安全无毒。附图说明图1为EGFR几何与对接盒(PDBID:1IVO)；图2为APDPFRMY和EGFR之间的交互作用三维图；图3为APDPFRMY和EGFR相互作用2D图；其中，绿色虚线：氢键相互作用；数：键长；红堡：疏水相互作用；图4为不同浓度的APDPFRMY的增殖效果图；图5为TPERYY的ALP酶活效果图；图6为TPERYY的矿化效果图；图7为TPERYY的肽谱图具体实施方式下面结合实施例进一步阐述本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本专利技术的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本专利技术所要求保护的范围。实施例1罗非鱼鳞促骨形成肽的分离制备本实施例提供一种罗非鱼鳞促骨形成肽，其氨基酸序列为：APDPFRMY(Ala-Pro-Asp-Pro-Phe-Arg-Met-Tyr)。该罗非鱼鳞促骨形成肽可通过如下制备方法制备得到：(一)罗非鱼鳞的预处理(1)将罗非鱼鳞用蒸馏水重复洗三次，把杂质去除。(2)碱洗脱脂：将罗非本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种罗非鱼鳞促骨形成肽，其特征在于，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的氨基酸序列为：APDPFRMY。/n

【技术特征摘要】
1.一种罗非鱼鳞促骨形成肽，其特征在于，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的氨基酸序列为：APDPFRMY。


2.根据权利要求1所述罗非鱼鳞促骨形成肽，其特征在于，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的分子量为995.4534Da。


3.根据权利要求1所述罗非鱼鳞促骨形成肽，其特征在于，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的质荷比为498.7344。


4.根据权利要求1所述罗非鱼鳞促骨形成肽，其特征在于，所述罗非鱼鳞促骨形成肽与EGFR的氢键作用包括ARG285、GLN8、HIS409、LYS322、SER324或THR378中的一种或几种。


5.根据权利要求1所述罗非鱼鳞促骨形成肽，其特征在于，所述罗非鱼鳞促骨形成肽与EGFR的疏水相互作用包括ALA286、ASN86、ASP323、ASP344、GLN408、GLY317、GLY343...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗建银，黄文，陈冰冰，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44