本发明专利技术提供了靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向FGFR4的嵌合抗原受体CAR-FGFR4和靶向DR5的嵌合抗原受体CAR-DR5，CAR-FGFR4包括氨基端到羧基端顺次连接的靶向FGFR4单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区，CAR-DR5包括氨基端到羧基端顺次连接的靶向DR5单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区；靶向FGFR4的单链抗体包括以下中的至少一种：(a)如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH以及如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL；(b)如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH以及如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL。4所示的单链抗体轻链VL。4所示的单链抗体轻链VL。
【技术实现步骤摘要】
一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，是全世界范围内第二大癌症死亡原因，己经严重威胁到了人们的健康和生活。临床中常见的肝癌治疗方法主要有手术切除、肝移植、化学药物治疗和放射治疗等。然而，由于肝癌早期病症不明显因而不易被检测，大部分病人确诊时己处于中晚期，失去手术治疗和肝移植的机会。实际治疗中约有90％的肝癌患者需要接受药物治疗。现有常用的抗肿瘤药物虽然可以有效延长患者生存期，但在临床应用中普遍存在选择性低、毒副作用大等问题。即便是靶向药物也存在长期使用后容易诱发肿瘤耐药性的问题。例如2007年批准的多激酶抑制剂索拉菲尼，但仅仅将总生存期提高3个月。由此可见，临床上为肝癌寻找安全有效的疗法依然是个难题。
[0003]死亡受体5(DR5)又名肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAIL-R2)，在多种肿瘤组织高表达，尤其是肺癌、乳腺癌、卵巢癌、直肠癌、宫颈癌等，而在大多数正常细胞几乎不表达，成为理想的靶点。成纤维细胞生长因子受体家族有四个成员，FGFR1-4，其激酶域同源性高达74-92％。通过分析FGFR家族的结构发现在552号氨基酸上FGFR4与其他成员不同，FGFR4上是半胱氨酸，而其他成员在该位点是酪氨酸。可以尝试利用这半胱氨酸的特性来设计抑制剂，达到高选择性的靶向FGFR4。FGFR4在多种肿瘤中存在过表达，例如肝癌、乳腺癌、胃癌等。目前在制药产业领域，FGFR4的抑制剂H3B-6527已获得美国FDA授予的孤儿药资格。FGFR4选择性抑制剂基本都是基于Cys552的共价可逆或不可逆抑制剂，一旦这个位点突变很可能导致耐药情况的产生。
[0004]免疫细胞治疗是现有技术中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，其治疗肿瘤具有特异性强、几乎无毒副作用的巨大优势弥补了传统疗法的弊端，在国内外已经用于临床治疗恶性肿瘤，嵌合抗原受体T细胞技术(CAR-T)为当前过继性细胞回输治疗技术最新的免疫细胞技术之一，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到清除恶性肿瘤细胞的目的而受到广泛的关注和研究。目前还未有同时靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞的制备和研究。
技术实现思路
[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向FGFR4的嵌合抗原受体CAR-FGFR4和靶向DR5的嵌合抗原受体CAR-DR5，CAR-FGFR4专一性的靶向FGFR4，CAR-DR5专一性的靶向DR5，从而促进T细胞在患者体内的扩增，高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，有效抑制肿瘤细胞逃逸的发生，更好的维持嵌合抗原受体T细胞的活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本专利技术还提供了靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细
胞的制备方法和应用。
[0006]第一方面，本专利技术提供了一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向FGFR4的嵌合抗原受体CAR-FGFR4和靶向DR5的嵌合抗原受体CAR-DR5，所述CAR-FGFR4的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向FGFR4的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，所述CAR-DR5的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向DR5的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；
[0007]其中，所述靶向FGFR4的单链抗体的氨基酸序列包括以下中的至少一种：
[0008](a)如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列；
[0009](b)如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列。
[0010]在本专利技术中，所述靶向FGFR4的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列，或所述靶向FGFR4的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列，或所述靶向FGFR4的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列；和如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列。
[0011]在本专利技术中，如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH以及如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL顺次连接形成具有靶向FGFR4的单链抗体，如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH以及如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL顺次连接形成具有靶向FGFR4的单链抗体。
[0012]可选的，所述如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列和所述如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列通过第一连接肽连接。
[0013]可选的，所述如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列和所述如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列通过第二连接肽连接。
[0014]在本专利技术中，所述第一连接肽和所述第二连接肽用于连接单链抗体重链VH的氨基酸序列和单链抗体轻链VL的氨基酸序列，使所连接的单链抗体重链和轻链保持各自的空间构象，以维持整体单链抗体的功能和活性。在本专利技术中，所述第一连接肽和所述第二连接肽可以但不限于为以甘氨酸和丝氨酸为主构成的多肽序列，其中，甘氨酸的分子量最小，是侧链最短的氨基酸，可以增加侧链的柔韧性；丝氨酸是亲水性最强的氨基酸，可以增加肽链的亲水性。可选的，所述第一连接肽的氨基酸序列为GGGGSGGGGSGGGGS，所述第二连接肽的氨基酸序列为GGGGSGGGGSGGGGS。
[0015]在本专利技术中，单链抗体重链VH、单链抗体轻链VL和连接肽linker的氨基酸序列从氨基酸端到羧基端的连接顺序为VH-linker-VL和/或VL-linker-VH。
[0016]也就是说，所述靶向FGFR4的单链抗体的氨基酸序列包括以下情况中的至少一种：
[0017](i)从氨基酸端到羧基端依次包括：所述如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列、所述第一连接肽的氨基酸序列和所述如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列；
[0018](ii)从氨基酸端到羧基端依次包括：所述如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL
的氨基酸序列、所述第一连接肽的氨基酸序列和所述如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链V本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，包括靶向FGFR4的嵌合抗原受体CAR-FGFR4和靶向DR5的嵌合抗原受体CAR-DR5，所述CAR-FGFR4的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向FGFR4的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，所述CAR-DR5的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向DR5的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；其中，所述靶向FGFR4的单链抗体的氨基酸序列包括以下中的至少一种：(a)如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列；(b)如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列以及如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述如SEQ ID NO：1所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列和所述如SEQ ID NO：2所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列通过第一连接肽连接，所述如SEQ ID NO：3所示的单链抗体重链VH的氨基酸序列和所述如SEQ ID NO：4所示的单链抗体轻链VL的氨基酸序列通过第二连接肽连接。3.如权利要求1所述的靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述靶向DR5的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述靶向FGFR4的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：6-7所示的任一氨基酸序列。5.如权利要求1所述的靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CAR-FGFR4的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：8-9所示的任一氨基酸序列，所述CAR-DR5的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列。6.一种重组载体，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述的靶向FGFR4和DR5的嵌合抗原受体T细胞中所述CAR-FGFR4和所述CAR-DR5的编码基因。7.一种宿主细胞，其特征在于，包括如权利要求6所述的重组载体。8.一种靶向FGFR4和DR5的嵌合...
【专利技术属性】
技术研发人员：许晨光，张宏玲，温丽联，黎琴子，刘婉，
申请(专利权)人：深圳宾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。