表达基因、经基因修饰的受精卵的构建方法和小鼠模型的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种表达基因、经基因修饰的受精卵的构建方法和小鼠模型的构建方法，该经基因修饰的受精卵的构建方法包括以下步骤：利用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术，在小鼠的干扰素受体基因上，敲入表达人干扰素受体的表达基因，制备经基因修饰的受精卵。采用上述构建方法制得的受精卵制得的小鼠模型可以识别人干扰素，正常应答人干扰素的刺激。正常应答人干扰素的刺激。正常应答人干扰素的刺激。

【技术实现步骤摘要】
表达基因、经基因修饰的受精卵的构建方法和小鼠模型的构建方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种表达基因、经基因修饰的受精卵的构建方法和小鼠模型的构建方法。

技术介绍

[0002]据世界卫生组织(WHO)公布的数据，全球有20亿人感染乙型肝炎病毒(HBV)，其中有2.4亿人为慢性HBV感染者，HBV感染可引起各种急性和慢性肝脏疾病，每年全球约有60万人死于HBV相关的肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌。
[0003]对于慢性乙型肝炎的抗病毒治疗，目前已有两大类药物被批准应用于临床：一类靶向HBV从前基因组RNA(pgRNA)反转录到子代病毒DNA环节的小分子核苷(酸)类似物(NA)，NA可在短时间内完全抑制新病毒产生，但不能清除cccDNA，降低HBsAg作用有限；另一类药物是具有直接抗病毒和免疫调节的干扰素
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α(IFN
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α)及其聚乙二醇化形式((PegIFN
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α)。有研究表明，干扰素能增加抗病毒免疫反应，抑制病毒进入肝细胞，诱导HBV的cccDNA的部分降解，并能本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种经基因修饰的受精卵的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：利用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术，在野生型小鼠的I型干扰素受体基因上敲入表达基因，制备经基因修饰的受精卵，所述表达基因包括：第一功能区，所述第一功能区包括编码人I型干扰素受体1的胞外结构域的核酸片段、编码小鼠I型干扰素受体1的跨膜结构域的核酸片段和编码小鼠I型干扰素受体1的胞内结构域的核酸片段；第二功能区，所述第二功能区包括编码人I型干扰素受体2的胞外结构域的核酸片段、编码小鼠I型干扰素受体2的跨膜结构域的核酸片段、编码小鼠I型干扰素受体2的胞内结构域的核酸片段及转录终止子；及连接区，用于连接所述第一功能区与所述第二功能区，所述连接区包括编码具有自剪切功能的蛋白的核酸片段。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述制备经基因修饰的受精卵的步骤包括：根据靶位点，构建含有表达基因的同源重组载体，所述靶位点位于所述野生型小鼠的I型干扰素受体基因上；根据所述靶位点设计gRNA；及将所述同源重组载体、所述gRNA和Cas9蛋白导入所述野生型小鼠的受精卵中，制备经基因修饰的受精卵。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述靶位点位于小鼠的IFNAR2基因上的第二个外显子的起始密码子之后的区域。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述靶位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；及/或，所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；及/或，所述同源重组载体的同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.4所示。5.根据权利要求1～4任一项所述的构建方法，其特征在于，所述野生型小鼠为C57BL/6J小鼠。6.一种表达基因，其特征在于，包括：第一功能区，所述第一功能区包括编码人I型干扰素受体1的胞外结构域的核酸片段、编码小鼠I型干扰素受体1的跨膜结构域的核酸片段和编码小鼠I型干扰素受体1的胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：李锋，王亚萍，冯成千，李贤，
申请(专利权)人：广州福榕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：