吉西他滨类化合物与靶向NKG2D配体的CAR-T细胞联合制备治疗恶性肿瘤的药物制造技术

本发明专利技术提供了吉西他滨类化合物与靶向NKG2D配体的CAR

【技术实现步骤摘要】
吉西他滨类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合制备治疗恶性肿瘤的药物


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及吉西他滨类化合物与靶向NKG2D 配体的CAR
‑
T细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。

技术介绍

[0002]癌症等恶性疾病严重危害人类健康，嵌合抗原受体T(CAR
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T)细胞技术被认为是目前最有效的恶性肿瘤的治疗方式之一，它是将经过基因工程修饰的T淋巴细胞(可以表达特异性嵌合抗原受体)回输至人体，激活人体自身免疫系统，从而持续地杀伤恶性肿瘤细胞。而NKG2D属于C型凝集素样受体家族，是一种 II型跨膜糖蛋白，几乎在人体所有组织来源的肿瘤细胞上有不同程度的表达NKG2D配体，很少会出现在健康细胞的表面，因此靶向NKG2D配体的CAR
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T将能够极大提高对肿瘤细胞的识别和杀伤作用。
[0003]虽然CAR
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T细胞疗法在一些临床试验中取得了较好的效果，但是它在治疗过程中会产生较大的副作用(例如细胞因子释放综合征、神经毒性和脱靶效应等)，且对靶细胞的杀伤效果不足够强。此外，癌症患者的免疫系统往往比较弱，体内免疫细胞的数量较少、杀伤肿瘤细胞的能力并没有预想的强。因此，有必要进一步研究CAR
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T细胞疗法以增强其对肿瘤细胞的杀伤效果。
[0004]吉西他滨(Gemcitabine)是一种新的胞嘧啶核苷衍生物，属于抗代谢类抗癌药，其主要代谢物在细胞内掺入DNA，主要作用于G1/S期，在临床上，吉西他滨对多种实体肿瘤有效。目前，业界还未见吉西他滨与CAR
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T细胞在治疗肿瘤方面的联用报道。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了吉西他滨类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T 细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的新用途，二者的联用产生显著的协同杀死肿瘤细胞的作用。
[0006]第一方面，本专利技术提供了吉西他滨类化合物与靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。
[0007]本申请的申请人发现，吉西他滨类化合物可以上调恶性肿瘤表达NKG2D配体，进而明显增强靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞对恶性肿瘤细胞的识别、杀死效果，两者的联用表现出协同效应，可达到良好的治疗肿瘤效果，并可使靶向 NKG2D配体的CAR
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T细胞的用量降低、降低单独的CAR
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T细胞治疗导致的副作用。此外，吉西他滨类化合物为小分子有机化合物，价格便宜，能够降低CAR
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T 细胞的免疫治疗成本。
[0008]本专利技术中，所述吉西他滨类化合物可以包括吉西他滨、其互变异构体及其药学上可接受的盐，以及本领域技术人员能够通过简单的化学方法(如还原、取代等方法)对吉西他滨的骨架上的侧链基团进行修饰和/去除，而仍然保留增强 CAR
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T细胞杀伤功能的各种衍生物中的一种或多种。
[0009]可选地，所述吉西他滨类化合物包括吉西他滨(CAS号是95058
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4，结构式如下式(Ⅰ)所示)、盐酸吉西他滨(CAS号是122111
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03
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9，结构式如下式 (Ⅱ)所示)、3'
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表吉西他滨(吉西他滨的A异构体，CAS号是103882
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5，结构式如下式(Ⅲ)所示)、1'
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吉西他滨异构体盐酸盐(CAS号是122111
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05
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1，结构式如下式(Ⅳ)所示)、吉西他滨磷酸盐、吉西他滨二磷酸盐、吉西他滨三磷酸盐、地西他滨(CAS号是2353
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5，)中的一种或多种，但不限于此。
[0010][0011]其中，所述恶性肿瘤包括白血病、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、脑胶质瘤、结肠癌、胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、胰腺癌、宫颈癌和前列腺癌中的一种或多种，但不限于此，只有是可表达NKG2D配体的肿瘤即可。将吉西他滨类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联用后，特别是对胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、胰腺癌、宫颈癌和前列腺癌等实体肿瘤的治疗效果更显著。
[0012]可选地，所述靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞的给药方式为注射，例如，具体包括静脉注射、动脉注射、皮下注射、皮内注射、鞘内注射或肌内注射。可以将CAR
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T细胞溶解或悬浮在适合于注射给药中可接受载体中的溶液，包括等渗无菌的注射水溶液和非水溶液。而吉西他滨类化合物的常见给药方式也为注射，但二者的具体注射方式可以相同或者不同。在一些实施方式中，靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞与吉西他滨类化合物的给药方式均为静脉注射。
[0013]当将吉西他滨类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合使用时，二者可以是通过注射的方式先后给药或同时给药。优选地，所述吉西他滨类化合物先给药，所述靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞后给药，这样可以先通过吉西他滨类化合物激发患恶性肿瘤的患者
体内产生较多NKG2D配体，进而增强靶向NKG2D 配体的CAR
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T细胞对恶性肿瘤细胞的识别、治疗效果；且不会影响靶向NKG2D 配体的CAR
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T细胞自身的细胞活性。
[0014]本申请一些实施方式中，所述靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞具有靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体CAR
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NKG2D，其中，所述CAR
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NKG2D包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；所述靶向NKG2D配体的单链抗体的氨基酸序列包括如 SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
[0015]其中，所述靶向NKG2D配体的单链抗体为人源化单链抗体，可以避免引起人机体的免疫反应，具有较高的安全性。可选地，所述靶向NKG2D配体的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。
[0016]在本专利技术一实施方式中，所述胞外铰链区为CD8α铰链区；所述跨膜区为CD 8跨膜区；所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的4
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1BB信号区和CD3 ζ信号区。即，所述CAR
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NKG2D的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、CD8α铰链区、CD8跨膜区、4
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1BB信号区和CD3 ζ信号区的氨基酸序列。可选地，所述CAR
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NKG2D的氨基酸序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.吉西他滨类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述吉西他滨类化合物包括吉西他滨、吉西他滨的互变异构体及其药学上可接受的盐中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞具有靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体CAR
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NKG2D，其中，所述CAR
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NKG2D包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；所述靶向NKG2D配体的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶向NKG2D配体的嵌CAR
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T细胞中所用的T细胞来自自体T细胞、异体T细胞或iPSC诱导的T细胞。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述吉西他滨类化合物与所述靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞的给药方式均为注射，且所述吉西他滨类化合物先给药，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘茂玄，许晨光，陈倩，刘婉，
申请(专利权)人：深圳宾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：