丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D配体的CAR-T细胞联合制备治疗恶性肿瘤的药物制造技术

本发明专利技术提供了丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D配体的CAR

【技术实现步骤摘要】
丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合制备治疗恶性肿瘤的药物


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D 配体的CAR
‑
T细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。

技术介绍

[0002]癌症等恶性疾病严重危害人类健康，嵌合抗原受体T(CAR
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T)细胞技术被认为是目前最有效的恶性肿瘤的治疗方式之一，它是将经过基因工程修饰的T淋巴细胞(可以表达特异性嵌合抗原受体)回输至人体，激活人体自身免疫系统，从而持续地杀伤恶性肿瘤细胞。而NKG2D属于C型凝集素样受体家族，是一种 II型跨膜糖蛋白，几乎在人体所有组织来源的肿瘤细胞上有不同程度的表达NK G2D配体，很少会出现在健康细胞的表面，因此靶向NKG2D配体的CAR
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T将能够极大提高对肿瘤细胞的识别和杀伤作用。
[0003]虽然CAR
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T细胞疗法在一些临床试验中取得了较好的效果，但是它在治疗过程中会产生较大的副作用(例如细胞因子释放综合征、神经毒性和脱靶效应等)，且对靶细胞的杀伤效果不足够强。此外，癌症患者的免疫系统往往比较弱，体内免疫细胞的数量较少、杀伤肿瘤细胞的能力并没有预想的强。因此，有必要进一步研究CAR
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T细胞疗法以增强其对肿瘤细胞的杀伤效果。
[0004]丙戊酸钠(Sodium Valproate，简写为VPA)是一种不含氮的广谱抗癫痫药，近年来也被报道有抗肿瘤作用。然而，目前业界还未见丙戊酸钠类化合物与靶向 NKG2D配体的CAR
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T细胞在治疗肿瘤方面的联用报道。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T 细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的新用途，二者的联用产生显著的协同杀死肿瘤细胞的作用。
[0006]第一方面，本专利技术提供了丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。
[0007]本申请的申请人发现，丙戊酸钠类化合物可以上调恶性肿瘤表达NKG2D配体，进而明显增强靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞对恶性肿瘤细胞的识别、杀死效果，两者的联用表现出协同效应，可达到良好的治疗肿瘤效果，并可使靶向 NKG2D配体的CAR
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T细胞的用量降低、降低单独的CAR
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T细胞治疗导致的副作用。此外，丙戊酸钠类化合物为小分子有机化合物，价格便宜，能够降低CAR
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T 细胞的免疫治疗成本。
[0008]本专利技术中，所述丙戊酸钠类化合物可以包括丙戊酸钠及其衍生物。其中，丙戊酸钠衍生物包括能够通过简单的化学方法(如还原、取代等方法)对骨架上的侧链基团进行修饰和/去除，而仍然保留增强嵌合抗原受体T细胞杀伤功能的各种衍生物，还包括以上各种物质的异构体、水合物等。
[0009]可选地，所述丙戊酸钠类化合物包括丙戊酸钠(CAS号是1069
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5)、丁酸钠、甲基戊酸钠等中的一种或多种，但不限于此。
[0010]其中，所述恶性肿瘤包括白血病、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、脑胶质瘤、结肠癌、胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、胰腺癌、宫颈癌和前列腺癌中的一种或多种，但不限于此，只有是可表达NKG2D配体的肿瘤即可。将丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联用后，特别是对胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、胰腺癌、宫颈癌和前列腺癌等实体肿瘤的治疗效果更显著。
[0011]可选地，所述靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞的给药方式为注射，例如，具体包括静脉注射、动脉注射、皮下注射、皮内注射、鞘内注射或肌内注射。可以将CAR
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T细胞溶解或悬浮在适合于注射给药中可接受载体中的溶液，包括等渗无菌的注射水溶液和非水溶液。而丙戊酸钠类化合物的常见给药方式包括口服、注射等。
[0012]当将丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合使用时，二者可以是先后给药或同时给药，二者的给药方式可以相同或不同。例如，先将所述丙戊酸钠类化合物口服或注射给药，再将所述靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞注射给药，这样可以先通过丙戊酸钠类化合物激发患恶性肿瘤的患者体内产生较多 NKG2D配体，进而增强靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞对恶性肿瘤细胞的识别、治疗效果；且不会影响靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞自身的细胞活性。
[0013]本申请一些实施方式中，所述靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞具有靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体CAR
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NKG2D，其中，所述CAR
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NKG2D包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；所述靶向NKG2D配体的单链抗体的氨基酸序列包括如 SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
[0014]其中，所述靶向NKG2D配体的单链抗体为人源化单链抗体，可以避免引起人机体的免疫反应，具有较高的安全性。可选地，所述靶向NKG2D配体的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。
[0015]在本专利技术一实施方式中，所述胞外铰链区为CD8α铰链区；所述跨膜区为CD 8跨膜区；所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的4
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1BB信号区和CD3 ζ信号区。即，所述CAR
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NKG2D的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、CD8α铰链区、CD8跨膜区、4
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1BB信号区和CD3 ζ信号区的氨基酸序列。可选地，所述CAR
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NKG2D的氨基酸序列包括如SEQ I D NO：2所示的氨基酸序列。进一步可选地，所述CAR
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NKG2D的编码基因包括如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
[0016]进一步地，所述CAR
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NKG2D的编码基因包括从5
’
端到3
’
端顺次连接的信号肽的编码基因、靶向NKG2D配体的单链抗体的编码基因、胞外铰链区的编码基因、跨膜区的编码基因和胞内信号区的编码基因。此时，所述CAR
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NKG2D的编码基因可以包括如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。与SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列相比，SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列中多了信号肽的编码基因。其中，信号肽的编码基因可较好地指导CAR
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NKG2D表达到T细胞表面，但本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.丙戊酸钠类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述丙戊酸钠类化合物包括丙戊酸钠、丁酸钠、甲基戊酸钠中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞具有靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体CAR
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NKG2D，其中，所述CAR
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NKG2D包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；所述靶向NKG2D配体的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶向NKG2D配体的嵌CAR
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T细胞中所用的T细胞来自自体T细胞、异体T细胞或iPSC诱导的T细胞。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶向NKG2D配体的C...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘茂玄，许晨光，戴昆，
申请(专利权)人：深圳宾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：