芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR-T细胞联合制备治疗恶性肿瘤的药物制造技术

本发明专利技术提供了芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR

Rutin compounds combined with car-t cells targeting NKG2D ligands to prepare drugs for the treatment of malignant tumors

【技术实现步骤摘要】
芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
‑
T细胞联合制备治疗恶性肿瘤的药物


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
‑
T细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。

技术介绍

[0002]癌症等恶性疾病严重危害人类健康，嵌合抗原受体T(CAR
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T)细胞技术被认为是目前最有效的恶性肿瘤的治疗方式之一，它是将经过基因工程修饰的T淋巴细胞(可以表达特异性嵌合抗原受体)回输至人体，激活人体自身免疫系统，从而持续地杀伤恶性肿瘤细胞。而NKG2D属于C型凝集素样受体家族，是一种II型跨膜糖蛋白，几乎在人体所有组织来源的肿瘤细胞上有不同程度的表达NKG2D配体，很少会出现在健康细胞的表面，因此靶向NKG2D配体的CAR
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T将能够极大提高对肿瘤细胞的识别和杀伤作用。
[0003]虽然CAR
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T细胞疗法在一些临床试验中取得了较好的效果，但是它在治疗过程中会产生较大的副作用(例如细胞因子释放综合征、神经毒性和脱靶效应等)，且对靶细胞的杀伤效果不足够强。此外，癌症患者的免疫系统往往比较弱，体内免疫细胞的数量较少、杀伤肿瘤细胞的能力并没有预想的强。因此，有必要进一步研究CAR
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T细胞疗法以增强其对肿瘤细胞的杀伤效果。
[0004]芦丁(Rutin)是一种黄酮醇型黄酮类化合物，又称为芸香甙或维生素P。芦丁被报道有多种药理活性，包括抗氧化、抗炎、抗病毒、抗血栓、保护血管等功效。目前，业界还未见芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞在治疗肿瘤方面的联用报道。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的新用途，二者的联用产生显著的协同杀死肿瘤细胞的作用。
[0006]第一方面，本专利技术提供了芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。
[0007]本申请的申请人发现，芦丁类化合物可以上调恶性肿瘤表达NKG2D配体，进而明显增强靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞对恶性肿瘤细胞的识别、杀死效果，两者的联用表现出协同效应，可达到良好的治疗肿瘤效果，并可使靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞的用量降低、降低单独的CAR
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T细胞治疗导致的副作用。此外，芦丁类化合物为小分子有机化合物，价格便宜，能够降低CAR
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T细胞的免疫治疗成本。
[0008]本专利技术中，所述芦丁类化合物可以包括芦丁及其衍生物。其中，芦丁衍生物包括能够通过简单的化学方法(如还原、取代等方法)对骨架上的侧链基团进行修饰和/去除，而仍然保留增强嵌合抗原受体T细胞杀伤功能的各种衍生物，还包括以上各种物质的药学上可接受的盐、异构体、金属络合物等。
[0009]可选地，所述芦丁类化合物包括芦丁(CAS号是153
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18
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4，结构式如下式(Ⅰ)所示)、
曲克芦丁(CAS号是7085
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55
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4，结构式如下式(Ⅱ)所示)、芦丁铬、槲皮素(CAS号是117
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39
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5，结构式如下式(Ⅱ)所示)等中的一种或多种，但不限于此。
[0010][0011][0012]其中，所述恶性肿瘤包括白血病、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、脑胶质瘤、结肠癌、胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、胰腺癌、宫颈癌和前列腺癌中的一种或多种，但不限于此，只有是可表达NKG2D配体的肿瘤即可。将芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联用后，特别是对胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、胰腺癌、宫颈癌和前列腺癌等实体肿瘤的治疗效果更显著。
[0013]可选地，所述靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞的给药方式为注射，例如，具体包括静脉注射、动脉注射、皮下注射、皮内注射、鞘内注射或肌内注射。可以将CAR
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T细胞溶解或悬浮在适合于注射给药中可接受载体中的溶液，包括等渗无菌的注射水溶液和非水溶液。而芦丁类化合物的常见给药方式包括口服或注射等。例如，曲克芦丁通常以其注射液的形式给药，芦丁、芦丁铬及槲皮素可以以口服的片剂给药。
[0014]当将芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合使用时，二者可以是先后给药或同时给药，二者的给药方式可以相同或不同。例如，先将所述芦丁类化合物口服或注射给药，再将所述靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞注射给药，这样可以先通过芦丁类化合物激发患恶性肿瘤的患者体内产生较多NKG2D配体，进而增强靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞对恶性肿瘤细胞的识别、治疗效果；且不会影响靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞自身的细胞活性。
[0015]本申请一些实施方式中，所述靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞具有靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体CAR
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NKG2D，其中，所述CAR
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NKG2D包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；所述靶向NKG2D配体的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
[0016]其中，所述靶向NKG2D配体的单链抗体为人源化单链抗体，可以避免引起人机体的
免疫反应，具有较高的安全性。可选地，所述靶向NKG2D配体的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。
[0017]在本专利技术一实施方式中，所述胞外铰链区为CD8α铰链区；所述跨膜区为CD8跨膜区；所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的4
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1BB信号区和CD3ζ信号区。即，所述CAR
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NKG2D的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、CD8α铰链区、CD8跨膜区、4
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1BB信号区和CD3ζ信号区的氨基酸序列。可选地，所述CAR
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NKG2D的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。进一步可选地，所述CAR
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NKG2D的编码基因包括如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
[0018]进一步地，所述CAR
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NKG2D的编码基因包括从5
’
端到3
’
端顺次连接的信号肽的编码基因、靶向NKG2D配体的单链抗体的编码基因、胞外铰链区的编码基因、跨膜区的编码基因和胞内信号区的编码基因。此时，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.芦丁类化合物与靶向NKG2D配体的CAR
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T细胞联合在制备治疗恶性肿瘤的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述芦丁类化合物包括芦丁、曲克芦丁、芦丁铬、槲皮素中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体T细胞具有靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体CAR
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NKG2D，其中，所述CAR
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NKG2D包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向NKG2D配体的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；所述靶向NKG2D配体的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶向NKG2D配体的嵌CAR
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T细胞中所用的T细胞来自自体T细胞、异体T细胞或iPSC诱导的T细胞。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述靶向NKG2D配体的CAR
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘茂玄，许晨光，
申请(专利权)人：深圳宾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：