一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白及其医药用途制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体提供了一种人白细胞介素10‑Fc融合蛋白，所述融合蛋白是由人白细胞介素10通过连接肽与免疫球蛋白IgG的Fc片段融合而成；其中，所述Fc片段选自人IgG1、IgG2或IgG4中的一种；所述人白细胞介素10的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。本发明专利技术是由人IL‑10与人免疫球蛋白Fc片段通过特定的连接肽融合而成，延长了人IL‑10在体内的半衰期，并增加了其在体内的稳定性，此外，本发明专利技术提供的人白细胞介素10‑Fc融合蛋白可用于免疫疾病和癌症的治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白及其医药用途
本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白及其医药用途。
技术介绍
人白细胞介素10(IL-10)基因位于1q31-32上，全长5.1kb，包含5个外显子。IL-10基因由178个氨基酸组成，人类和鼠类的IL-10基因有75％的氨基酸序列是一致的，人类IL-10是一个35KD的二聚体，由两个单体通过非共价键形式结合，在单体内有两个二硫键来维持其结构和生物学活性。目前已知所有的淋巴细胞均能合成IL-10，体内最重要的来源主要是单核巨噬细胞和T辅助细胞，此外，树突状细胞，B细胞，NK细胞，细胞毒性T细胞，肥大细胞以及中性粒细胞和嗜酸性细胞也能合成IL-10基因。多年来，人们对IL-10的认识主要集中在免疫抑制方面，认为IL-10可以直接抑制效应T细胞增殖和迁移能力并下调相关细胞因子的产生，在诱导肿瘤的免疫逃逸方面起到重要作用。近年来，不断有研究表明IL-10具有免疫活化作用，其免疫活化作用对于肿瘤的抑制起到了至关重要的作用。Mumm等研究发现聚乙二醇化IL-10对移植瘤有排斥作用，并可提高颗粒酶B和IFN-γ的表达。IL-10是人体中天然存在的免疫生长因子，能刺激免疫系统中一种被称为CD8+T细胞的特殊白细胞的存活、扩增和杀伤潜力，CD8+T细胞可以识别并杀死癌细胞，IL-10激活CD8+T细胞中磷酸化的STAT1和STAT3，从而诱导CD8+T细胞的增殖和IFN-γ、细胞毒性蛋白穿孔素及颗粒蛋白酶的表达；IFN-γ可以诱导肿瘤细胞和单核巨噬细胞中MHC-Ⅰ类抗原提呈分子的表达，协助CD8+T细胞杀死大部分抗原特异性肿瘤细胞；激活CD8+T细胞中的TCR可以有效地诱导抗细胞凋亡信号和细胞增殖信号，CD8+T细胞的存活和扩增有望改善患者的预后和生存率。重组人IL-10在体内半衰期只有2个小时，很快会被清除，这严重影响了其在疾病治疗中的应用。为了克服重组人IL-10半衰期短的问题，目前有些研究机构采用PEG化修饰方法延长其在体内的半衰期，但是PEG化修饰位点较多，所以人IL-10经过PEG化修饰后产物不均一，这给生产工艺和质量控制带来了很大的难度。因此，急需开发一种既能够有效延长重组人IL-10半衰期，而且能够得到稳定的均一产物，便于工艺生产和质量控制的人白细胞介素10-Fc融合蛋白及其医药用途。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的人IL-10半衰期短，人IL-10经过PEG化修饰后产物不均一等问题，本专利技术通过基因工程技术提供了一种将人IL-10与免疫球蛋白Fc片段融合在一起，并保留了IL-10生物活性，极大延长了IL-10在生物体内的半衰期的人白细胞介素10-Fc融合蛋白及其医药用途。本专利技术具体技术方案如下：本专利技术提供了一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白，所述融合蛋白是由人白细胞介素10通过连接肽与免疫球蛋白IgG的Fc片段融合而成；其中，所述Fc片段选自人IgG1、IgG2或IgG4中的一种；所述人白细胞介素10的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示。本专利技术将人白细胞介素10与免疫球蛋白Fc片段融合，不仅保留了人白细胞介素10的生物学活性，而且能够通过免疫球蛋白Fc片段有效延长了半衰期，克服了人白细胞介素10半衰期短的缺陷，本专利技术的Fc片段选自人IgG1、IgG2或IgG4，其中IgG2和IgG4使用野生型序列，人IgG的四种亚型中，IgG1和IgG3亚型的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC作用)和补体依赖的细胞毒性作用(CDC作用)较强，而IgG2和IgG4亚型的ADCC作用和CDC作用相对较弱，人白细胞介素10-Fc融合蛋白并不需要ADCC和CDC作用，相反，ADCC和CDC作用会带来一些不必要的副作用，因此IgG2和IgG4的Fc片段使用野生型氨基酸序列；此外，本专利技术通过连接肽与免疫球蛋白IgG的Fc片段连接，不仅保证了大分子融合蛋白的稳定性，而且能够保证得到均一的融合蛋白产物，便于生产和质量控制。优选的，所述Fc片段为人IgG1的Fc部分。优选的，所述Fc片段的氨基酸序列选自SEQIDNo:2或SEQIDNo:3。进一步的，所述连接肽通式为[GlyGlyGlyGlyX]n；其中，所述X为Ser或Ala，所述n为1-6的整数。优选的，所述X优选Ser。优选的，所述n为6。连接肽的结构设计能够保证药物分子的生物活性。本专利技术还提供了一种多核苷酸序列或组合，所述多核苷酸序列或组合编码所述人白细胞介素10-Fc融合蛋白的氨基酸序列。本专利技术进一步提供了一种重组DNA表达载体，所述重组DNA表达载体包含所述多核苷酸序列或组合。本专利技术还提供了一种转染所述重组DNA表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞和哺乳动物细胞。本专利技术还提供了一种药物或药物组合物，所述药物或药物组合物包含所述人白细胞介素10-Fc融合蛋白。本专利技术还提供了一种所述人白细胞介素10-Fc融合蛋白用于制备治疗免疫疾病和癌症药物中的应用。本专利技术的有益效果如下：首先，本专利技术提供的人白细胞介素10-Fc融合蛋白在保留了人白细胞介素10生物活性的同时，通过与免疫球蛋白IgG的Fc片段融合，延长了人白细胞介素10在生物体内的半衰期，增加了人白细胞介素10在体内的稳定性，能够长时间抑制肿瘤生长，有利于其在疾病治疗中的应用，其次，从纯化工艺和生产角度而言，本专利技术采用基因工程技术进行人白细胞介素10-Fc融合蛋白的制备，通过连接肽将人白细胞介素10与免疫球蛋白IgG的Fc片段融合，提高了大分子融合蛋白的稳定性，产品均一性较好，克服了IL-10PEG化带来的生产工艺和质量控制的麻烦；此外，本专利技术还公开了所述的IL-10融合蛋白可用于相关疾病的治疗，所述的疾病包括免疫疾病和癌症等，免疫疾病包括但不限于多发性硬化症、银屑病、风湿性关节炎、克罗恩病等；癌症包括但不限于胰腺癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、结直肠癌、乳腺癌等肿瘤。附图说明图1为本专利技术人白细胞介素10-Fc融合蛋白分子结构示意图；图2为本专利技术人白细胞介素10和人白细胞介素10-Fc融合蛋白表达载体；图3为本专利技术人白细胞介素10和人白细胞介素10-Fc融合蛋白的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；图4为本专利技术人白细胞介素10和人白细胞介素10-Fc融合蛋白刺激小鼠肥大细胞MC/9增殖；图5为本专利技术人白细胞介素10-Fc融合蛋白对SK-BR-3肿瘤细胞的杀伤；图6为本专利技术人白细胞介素10-Fc融合蛋白在小鼠H1975肿瘤模型中的药效作用。具体实施方式下面结合以下实施例对本专利技术作进一步详细说明。实施例1本专利技术实施例1提供了一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白，融合蛋白是由人白细胞介素10通过连接肽与免疫球蛋白IgG的Fc片段融合而成；其中，Fc片段为人IgG1的Fc部分；人白细胞介素10的氨基酸序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是由人白细胞介素10通过连接肽与免疫球蛋白IgG的Fc片段融合而成；其中，所述Fc片段选自人IgG1、IgG2或IgG4中的一种；/n所述人白细胞介素10的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是由人白细胞介素10通过连接肽与免疫球蛋白IgG的Fc片段融合而成；其中，所述Fc片段选自人IgG1、IgG2或IgG4中的一种；
所述人白细胞介素10的氨基酸序列如SEQIDNo:1所示。


2.如权利要求1所述的人白细胞介素10-Fc融合蛋白，其特征在于，所述Fc片段为人IgG1的Fc部分。


3.如权利要求2所述的人白细胞介素10-Fc融合蛋白，其特征在于，所述Fc片段的氨基酸序列选自SEQIDNo:2或SEQIDNo:3。


4.如权利要求1所述的人白细胞介素10-Fc融合蛋白，其特征在于，所述连接肽通式为[GlyGlyGlyGlyX]n；
其中，所述X为Ser或Ala，所述n为1-6的整数；
优选的，所述X优选Ser。

【专利技术属性】
技术研发人员：白义，张稳，周建华，
申请(专利权)人：北京东方百泰生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11