一种用于检测鼠疫耶尔森菌的荧光PCR试剂及方法技术

本发明专利技术提供一种检测鼠疫耶尔森菌的荧光PCR试剂及方法。本发明专利技术提供的鼠疫耶尔森菌荧光PCR检测试剂以鼠疫耶尔森菌染色体上的dam基因和pPCP1质粒上的pla基因作为检测靶标，对大部分菌株有较高的检测灵敏度，又确保个别菌株不会因pla基因缺失而被漏检。该试剂所用的引物、探针序列是基于最新的鼠疫耶尔森菌核酸序列信息设计筛选所得，具有良好的包容性、特异性和反应性能，能保证检测的准确性。优选地，本发明专利技术运用冷冻干燥技术将鼠疫耶尔森菌荧光PCR检测试剂制成冻干型试剂，常温下稳定，无需冷链运输和保存，从而避免了常规液体荧光PCR检测试剂因保存温度变化或反复冻融而失效的风险，适应长途运输和冷链条件差的地区的使用需要，使用时直接加核酸样本即可上机检测。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测鼠疫耶尔森菌的荧光PCR试剂及方法
本专利技术涉及病原微生物检测技术，具体地说涉及鼠疫耶尔森菌的核酸检测。
技术介绍
鼠疫是我国传染病防治法规定的甲类传染病，其病原体为鼠疫耶尔森菌(Yersiniapestis)。鼠疫依发病部位不同可分为腺鼠疫、败血型鼠疫、肺鼠疫、肠鼠疫、脑膜炎型鼠疫、眼鼠疫、皮肤鼠疫等，其中以腺鼠疫最常见。鼠疫的主要传播途径有：(1)蚤类叮咬。鼠疫的最主要传染源是啮齿类动物，鼠疫耶尔森菌可通过蚤类叮咬传染给人类和其他动物。人类鼠疫的首发病例多由寄生于家鼠的印鼠客蚤(Xenopsyllacheopis)叮咬所致。鼠疫耶尔森菌经皮肤进入人体，沿淋巴循环和血循环扩散，引起腺体坏死和败血症，即腺鼠疫和败血型鼠疫。(2)接触传播。鼠疫耶尔森菌可以通过伤口，包括如手指的倒刺等细小的伤口等进入人体，然后经淋巴管或血液引起腺鼠疫或败血型鼠疫。(3)飞沫传播。鼠疫患者呼吸道中的鼠疫耶尔森菌可经呼吸、咳嗽飞沫进行传播，吸入一定数量的鼠疫耶尔森菌后，可引起肺鼠疫。(4)食物传播。鼠疫耶尔森菌可通过食物，主要是未煮熟的鼠疫病死动物，感染本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测鼠疫耶尔森菌的荧光PCR试剂，含有Tris-HCl缓冲液、氯化钾、氯化镁、dNTPs、Taq DNA聚合酶，其特征在于，还含有下述用于检测鼠疫耶尔森菌dam基因和pla基因的引物探针组合：/n检测dam基因的正向引物序列为5’-ATCCAGCCGAAAACCAGTTGT-3’，反向引物的序列为5’-GGCGCGGAAATTAGTCATCA-3’，探针的序列为5’-TCGCGCCAGCAGAACCAAATCC-3’，所述的探针的5’端和3’端分别用荧光报告基团和荧光淬灭基团修饰；/n检测pla基因的正向引物的序列为5’-GTTAATACCAAATATATCCCCTGACAGC-3...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测鼠疫耶尔森菌的荧光PCR试剂，含有Tris-HCl缓冲液、氯化钾、氯化镁、dNTPs、TaqDNA聚合酶，其特征在于，还含有下述用于检测鼠疫耶尔森菌dam基因和pla基因的引物探针组合：
检测dam基因的正向引物序列为5’-ATCCAGCCGAAAACCAGTTGT-3’，反向引物的序列为5’-GGCGCGGAAATTAGTCATCA-3’，探针的序列为5’-TCGCGCCAGCAGAACCAAATCC-3’，所述的探针的5’端和3’端分别用荧光报告基团和荧光淬灭基团修饰；
检测pla基因的正向引物的序列为5’-GTTAATACCAAATATATCCCCTGACAGC-...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎绍基，林镜中，黄俊辉，朱碧莹，刘钰涵，
申请(专利权)人：深圳市赛格诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44