一种区分奇异变形杆菌和沙门氏菌的RPA引物及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种区分奇异变形杆菌和沙门氏菌的RPA引物及检测方法。区分奇异变形杆菌和沙门氏菌的RPA引物由针对奇异变形杆菌毒力基因ureR的引物和针对沙门氏菌dnaN的引物组成；所述的针对奇异变形杆菌毒力基因ureR的引物为：上游引物ureR‑F：SEQ ID NO.1，下游引物ureR‑R：SEQ ID NO.2；针对沙门氏菌dnaN的引物为：上游引物dnaN‑F：SEQ ID NO.3，下游引物dnaN‑R：SEQ ID NO.4。本发明专利技术采用RPA扩增技术同时检测和区分这两种细菌，用时更短，更灵敏，无需PCR等昂贵设备，便于基层和大批量样本的快速检测使用。

【技术实现步骤摘要】
一种区分奇异变形杆菌和沙门氏菌的RPA引物及检测方法
本专利技术涉及分子生物学应用
，涉及一种区分奇异变形杆菌和沙门氏菌的RPA引物及检测方法。
技术介绍
沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌，在自然界分布广泛，主要通过受污染的肉蛋乳类水果蔬菜等食物和水源感染人类，可引起人得胃肠炎、伤寒、败血症等多种疾病。沙门氏菌血清型众多，达2500种。奇异变形杆菌是一种重要的条件致病菌，是仅次于大肠埃希菌的泌尿系统感染的主要病原菌，可引起败血症、食物中毒、腹膜炎、脑膜炎等。奇异变形杆菌和沙门氏菌生化培养特征相似，且具有共同抗原，常常发生血清交叉凝集反应，因此采用常规血清检测方法无法正确区分两者。食品卫生指标中沙门氏菌是必检项目。奇异变形杆菌也是常见导致食品腐败的细菌和沙门氏菌检验中的常见干扰菌，但目前针对奇异变形杆菌的分子生物学检测方法很少。RPA技术(重组酶聚合酶扩增)是2006年由英国TwistDx公司研发的一种等温核酸扩增技术。跟传统PCR技术相比，RPA技术有以下优点：1、无需PCR仪等昂贵设备，DNA扩增反应在37℃下恒温进行，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种区分沙门氏菌和奇异变形杆菌的RPA检测引物，其特征在于，由针对奇异变形杆菌毒力基因ureR的引物和针对沙门氏菌dnaN的引物组成；所述的针对奇异变形杆菌毒力基因ureR的引物为：上游引物ureR-F：SEQ ID NO.1，下游引物ureR-R：SEQ ID NO.2；针对沙门氏菌dnaN的引物为：上游引物dnaN-F：SEQ ID NO.3，下游引物dnaN-R：SEQ ID NO.4。/n

【技术特征摘要】
1.一种区分沙门氏菌和奇异变形杆菌的RPA检测引物，其特征在于，由针对奇异变形杆菌毒力基因ureR的引物和针对沙门氏菌dnaN的引物组成；所述的针对奇异变形杆菌毒力基因ureR的引物为：上游引物ureR-F：SEQIDNO.1，下游引物ureR-R：SEQIDNO.2；针对沙门氏菌dnaN的引物为：上游引物dnaN-F：SEQIDNO.3，下游引物dnaN-R：SEQIDNO.4。


2.权利要求1所述的RPA检测引物在制备沙门氏菌和奇异变形杆菌的鉴别试剂中的应用。


3.权利要求1所述的RPA检测引物在非诊断目的的区分沙门氏菌和奇异变形杆菌中的应用。


4.一种非诊断目的的区分沙门氏菌和奇异变形杆菌的RPA检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)制备待检样本的DNA样本；
2)利用权利要求1中所述的引物对ureR-F/ureR-R以及dnaN-F/dnaN-R分别对DNA样本进行RPA反应；
3)在RPA反应完毕后直接进行琼脂糖凝胶电泳检测，或对反应产物进行纯化后进行琼脂糖凝胶电泳检测，利用ureR引物检测具...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐长波，解华东，李睿，卢洁元，胡荣蓉，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32