一种基于荧光RMA法联合检测常见下呼吸道感染细菌的引物探针组、试剂盒及其检测方法技术

本申请属于下呼吸道感染细菌的检测，具体为一种基于荧光RMA法联合检测常见下呼吸道感染细菌的试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括扩增反应试剂、缓冲液、醋酸镁、标准阳性质粒、无菌双蒸水；所述扩增反应试剂包括检测流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、嗜肺军团杆菌、金黄色葡萄球菌的引物和探针、大肠杆菌RecA蛋白、UvsY 蛋白、单链结合蛋白GP32、Bst聚合酶、核酸外切酶III、聚环氧乙烷、海藻糖、甘露醇、ATP、dNTPs、肌酸激酶和磷酸肌酸。

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光RMA法联合检测常见下呼吸道感染细菌的引物探针组、试剂盒及其检测方法
本申请属于下呼吸道感染细菌的检测，具体为一种基于荧光RMA法联合检测常见下呼吸道感染细菌的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
下呼吸道感染(LRTI)是最常见的感染性疾患，包括急性气管/支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等。细菌性下呼吸道感染是最常见的下呼吸道感染，也是最常见的感染性疾病之一，其中临床常见的下呼吸道感染细菌有流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、卡他莫拉杆菌、百日咳杆菌、铜绿假单胞杆菌、肺炎克雷伯菌等。LRTI以抗生素治疗为主，但治疗前必须确定所引起下呼吸道感染的病原体，因此，LRTI病原体快速检测十分重要。目前临床常用的下呼吸道病原菌检测方法有痰涂片革兰氏染色镜检、痰培养、血清学检测、PCR法等。革兰氏染色镜检方法简单，但难以发现轻中度社区获得性肺炎的病原体且阳性结果的判定缺乏标准。痰培养是目前最常用的诊断方法，但由于人体口咽部存在正常菌群，痰培养得到的细菌不定是致病菌。血清学检测也是检测下呼吸道感染细菌的常用方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于荧光RMA法联合检测流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、嗜肺军团杆菌、金黄色葡萄球菌的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组为根据流感嗜血杆菌的外膜蛋白基因ompP6，肺炎链球菌的溶血素基因ply，嗜肺军团杆菌的巨噬细胞感染增强蛋白基因mip，金黄色葡萄球菌的甲氧西林耐药辅助基因femB基因序列设计的引物和探针，其中(1)HI引物和探针序列为：/nHI-F：/n5’-CGCAGCATATTTAAATGCAACGCCAGCTGCTAA-3’；/nHI-R：/n5’-CCAAGAATTAGTACGCTAACACTGCACGACGGTT-3’；/nHI-P：/n5’-CATCGCATTAGGACA...

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光RMA法联合检测流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、嗜肺军团杆菌、金黄色葡萄球菌的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组为根据流感嗜血杆菌的外膜蛋白基因ompP6，肺炎链球菌的溶血素基因ply，嗜肺军团杆菌的巨噬细胞感染增强蛋白基因mip，金黄色葡萄球菌的甲氧西林耐药辅助基因femB基因序列设计的引物和探针，其中(1)HI引物和探针序列为：
HI-F：
5’-CGCAGCATATTTAAATGCAACGCCAGCTGCTAA-3’；
HI-R：
5’-CCAAGAATTAGTACGCTAACACTGCACGACGGTT-3’；
HI-P：
5’-CATCGCATTAGGACAACGTCGTGCAGATGCAG(FAM-dT)(THF)AAAGG(BHQ-dT)TATTTAGCAGGT(C3-spacer)-3’。
(2)SP引物和探针序列为：
SP-F：
5’-CTGGAGCACTTCTCGTAGTGGATGAGACCTTGT-3’；
SP-R：
5’-TGATGCCACTTAGCCAACAAATCGTTTACCGCT-3’；
SP-P：
5’-TCCCACTCTTCTTGCGGTTGATCGTGCTCCGA(HEX-dT)GAC(THF)(BHQ-dT)ATAGTATTGATTTGC(C3-spacer)-3’。
(3)LP引物和探针序列为：
LP-F：
5’-TATGAGTGGCGCTCAATTGGCTTTAACCGAACA-3’；
LP-R：
5’-CCTGCTGGCATCAATTGTAAAGCCTCTGTCCAT-3’；
LP-P：
5’-CAAGCCAGGTGTTGTTGTATTACCAAGCGG(ROX-dT)(T...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫文芳，包建民，陈大为，陈龙，张瑶，
申请(专利权)人：济南国益生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37