一种对6个血清型霍乱弧菌的实时荧光PCR检测方法及应用技术

本发明专利技术涉及对霍乱弧菌O14、O22、O34、O37、O59、O140血清型使用基于MGB探针的实时荧光TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系进行分析。本发明专利技术以霍乱弧菌O抗原基因簇特异基因为靶基因，设计并筛选了用于霍乱弧菌的O抗原分型的引物及MGB探针，并建立了相应的实时荧光PCR（RT‑PCR）检测方法，为利用分子生物学手段对部分致病型霍乱弧菌的O抗原分型提供一条可信的途径。利用本发明专利技术的RT‑PCR检测方法可对粪便、呕吐物、河水、井水、海水、生鲜食品、各种材料用具标本中的6个血清型的霍乱弧菌进行准确检测，具有高灵敏度、高特异性及快速检测等诸多优点。

【技术实现步骤摘要】
一种对6个血清型霍乱弧菌的实时荧光PCR检测方法及应用
本专利技术属于细菌检测方法
，涉及用于霍乱弧菌6个O抗原血清型的实时荧光PCR检测方法及应用。
技术介绍
霍乱弧菌，革兰氏阴性菌，包括两个生物型:古典生物型(Classicalbiotype)和埃尔托生物型(EL-Torbio-type)，菌体弯曲呈弧状或逗点状，菌体一端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞，在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形，光滑，透明。霍乱弧菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、半乳糖等产酸产气，迟缓发酵乳糖；能分解色氨酸产生吲哚，同时能还原硝酸盐为亚硝酸盐。霍乱弧菌通过产生肠毒素引起烈性肠道传染病霍乱，可分离于粪便、呕吐物、河水、井水、海水、生鲜食品、各种材料用具标本中。随着抗生素和免疫抑制剂的广泛应用耐药细菌呈现上升趋势，但是在血清水平上，利用创伤抗血清进行鉴定受到变异、可用性和特异性的限制，所以需要一个更具体可行的分子分型方案。已知细菌表面多糖对不同的血清有特异性，如O抗原或荚膜，而根据O抗原的多样性可以对霍乱弧菌的不同菌株进行分型鉴定。>TaqMan-MG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对霍乱弧菌O14、O22、O34、O37、O59、O140血清型进行检测的Taqman特异性引物，其特征在于具有SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种对霍乱弧菌O14、O22、O34、O37、O59、O140血清型进行检测的Taqman特异性引物，其特征在于具有SEQIDNO:1-SEQIDNO:12所示的核苷酸序列。


2.一种对霍乱弧菌O14、O22、O34、O37、O59、O140血清型进行检测的特异MGB探针，其特征是位于权利要求1中Taqman特异性引物的内部，且探针含有5'报告染料（FAM）和3'非荧光猝灭剂（NF...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘斌，穆会乾，王婧，郭玺，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12