一株耐盐碱阿根廷假单胞菌及其活菌制剂与应用制造技术

本发明专利技术公开了一株耐盐碱阿根廷假单胞菌及其活菌制剂与应用。所述阿根廷假单胞菌(Pseudomonas argentinensis)PAPM‑9已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.20182。阿根廷假单胞菌PAPM‑9耐盐碱能力强，具有产NH

【技术实现步骤摘要】
一株耐盐碱阿根廷假单胞菌及其活菌制剂与应用
本专利技术涉及一株耐盐碱阿根廷假单胞菌及其活菌制剂与应用，属于农业生物

技术介绍
番茄亦称“番柿”，俗称“西红柿”。茄科，番茄属。一年生或多年生草本，原产南美洲，我国普遍栽培，一般于冬春保护地育苗，春季栽培为主，冬季温室栽培。番茄果实营养丰富，含多种维生素，可作蔬菜或水果，亦可制成罐头等食品。软腐病一直是制约番茄高产优质栽培的关键因素之一，在全国各地都有发生。它在田间、贮运期以至市场上都能引起番茄腐烂，损失比较严重，产量损失可达35％-55％，储藏损失可达21％左右。软腐病主要由胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜软腐变种(Erwiniacarotovorasubsp.Carotovora(Jones)Bergeyetal.)引起的，主要侵染茎和果实。茎发病多出现在生长期，近地面茎部先出现水渍状污绿色斑块，继扩大的圆形或不规则形褐斑，斑周显浅色窄晕环，病部微隆起。果实感染病主要在成熟期，初期病斑为圆形褪绿小白点，继变为污褐色斑。随果实着色，成熟度增加及细菌繁殖为害，果皮病斑渐扩展到全果，但外皮仍保持完整，内部果肉腐烂水溶，恶臭，被盛于皮囊中，故称囊腐。长期以来，番茄软腐病主要通过化学法防治，同时结合选育抗病品种、加强栽培管理等技术来进行预防。化学防治以大量使用噻菌铜、中生菌素、农用链霉素、氯溴异氰尿酸、叶枯唑等化学药物为主，虽然取得了较好的防控效果，但化学农药的过量使用不仅可使病原菌逐步产生抗药性，而且对人类健康、食品安全和环境保护造成巨大的潜在威胁。因此，发展生物防治技术，减量化学农药的使用，是现代农业发展的必然趋势。生物防治是利用有益生物或其代谢产物来防治病虫害的方法。其特点是不污染环境、对人和其他生物安全、节约能源、保持生态平衡，是发展绿色食品、保护人身健康的重要手段。目前，蜡状芽孢杆菌、哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、淡紫灰链孢、灰色链霉菌等有益微生物已用于番茄软腐病的生物防治，但由于防治效果有限，未能在农业生产中大面积推广。盐碱地是我国重要的土地资源，我国盐碱地和盐碱障碍耕地总面积超过5亿亩，其中具有农业利用潜力的多达2亿亩，占中国耕地面积的10％左右。番茄具有一定的耐盐碱能力，是盐碱地广为栽培的蔬菜作物之一。盐碱地番茄软腐病的生物防治，除要求生防菌株具有较好的抗病促生效果外，还要求其具有较强的耐盐碱能力，能够在盐碱土壤中定植。因此，筛选耐盐碱抗病促生菌株，具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株耐盐碱阿根廷假单胞菌(Pseudomonasargentinensis)PAPM-9及其活菌制剂与应用。阿根廷假单胞菌PAPM-9菌株分离自盐碱地番茄根际土壤，耐盐碱能力强，具有产NH3、解磷等能力，对番茄软腐病具有良好的防治作用，且能促进番茄生长。本专利技术的目的采用如下技术方案实现：一株具有抗病促生作用的耐盐碱阿根廷假单胞菌(Pseudomonasargentinensis)PAPM-9，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)的保藏编号为CGMCCNo.20182，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2020年07月03日。所述耐盐碱阿根廷假单胞菌PAPM-9菌株的菌落及菌体特征：在NA培养基上于37℃培养48h，菌落直径约0.5-0.8mm，黄色半透明，圆形，表面光滑，隆起，湿润，粘稠，有光泽，质地均匀，边缘整齐；菌体呈短杆状，如图1所示。所述耐盐碱阿根廷假单胞菌PAPM-9菌株的生理生化特征：革兰氏阴性杆状菌；过氧化氢酶试验阳性，脲酶试验阳性，柠檬酸盐利用试验阳性，丙二酸盐利用试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，淀粉水解试验阴性，V-P试验阴性，硝酸盐还原试验阳性，D-葡萄糖发酵试验阴性，D-甘露醇发酵试验阴性，乳糖发酵试验阴性，麦芽糖发酵试验阴性。本专利技术还提供了上述耐盐碱阿根廷假单胞菌PAPM-9在产NH3、解磷，防治番茄软腐病及促进番茄生长方面的用途。本专利技术还公开了一种以阿根廷假单胞菌PAPM-9为主要有效成分的活菌制剂。所述阿根廷假单胞菌PAPM-9活菌制剂的制备方法：将所述阿根廷假单胞菌进行扩大培养后，以体积比2-5％的接种量转接入发酵培养基中，36-38℃培养24-28h，获得阿根廷假单胞菌PAPM-9发酵液。所述发酵培养基的配方为：豆粕粉10g、淀粉10g、葡萄糖2g、酵母浸粉1g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、复合酶制剂0.1g、水1000mL，初始pH7.5。所述复合酶制剂的组成为碱性蛋白酶50％、中性蛋白酶50％。所述阿根廷假单胞菌PAPM-9发酵液中加入没食子酸丙酯(PG)0.01-0.03％(w/w)、生化黄腐酸粉1-3％(w/w)、矿源黄腐酸钾1-3％(w/w)、尿素1-2％(w/w)、磷酸氢二钾1-3％(w/w)和卡松0.03-0.08％(w/w)，搅拌均匀，获得活菌制剂。本专利技术还提供了上述的活菌制剂在产NH3、解磷，防治番茄软腐病及促进番茄生长方面的用途。本专利技术的有益效果：本专利技术阿根廷假单胞菌PAPM-9分离自盐碱地土壤，耐盐碱能力较强，且对番茄软腐病病原菌具有较强的抑制作用，对番茄生长具有促进作用，可用于生产生物肥料，特别是盐碱地专用微生物肥料，用于番茄软腐病的生物防治，可减少病害发生，提高番茄产量和质量。附图说明图1为阿根廷假单胞菌PAPM-9菌株的菌体形态；图2为阿根廷假单胞菌PAPM-9菌株培养物在加入Nessler’s试剂后的图片；从图中可以看出：产生黄色沉淀；图3为阿根廷假单胞菌PAPM-9菌株在有机磷培养基上的解磷圈图片，图中内环为菌落，外环为解磷透明圈。具体实施方式下面结合实例对本专利技术作进一步说明。实施例1：阿根廷假单胞菌PAPM-9的筛选(1)耐盐碱菌株的筛选阿根廷假单胞菌PAPM-9于2018年6月分离自番茄根际土壤。土壤取样于山东省滨州市滨城区，为中度盐碱土壤。具体分离方法为：土样混匀，称取5g，放入盛有95mL无菌水和10粒玻璃珠的三角瓶中，于37℃、180rpm振荡30min。取土壤悬液1mL进行10-1—10-7梯度稀释，然后取10-5、10-6、10-7三个稀释度涂布至含选择培养基的平板上，于37℃倒置培养2d。再分别挑取单菌落划线至含选择培养基的平板上，于37℃倒置培养2d。然后挑取单菌落转接至保藏培养基试管斜面上，于37℃培养2d，长满菌苔后，置于4℃冰箱中保存备用。共筛选出耐盐碱菌株38株。所述选择培养基的配方为：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl30g、蒸馏水1000mL、pH8.0，121℃灭菌20min。所述保藏培养基的配方为：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl10g、蒸馏水1000mL、pH7.5，121℃灭菌20min。(2)抑菌圈法筛选番茄软腐病致病菌的拮抗菌株将200mlLB培养基融化，冷却到45℃左右时，加入5ml的番茄本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株耐盐碱阿根廷假单胞菌(Pseudomonas argentinensis)PAPM-9，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.20182。/n

【技术特征摘要】
1.一株耐盐碱阿根廷假单胞菌(Pseudomonasargentinensis)PAPM-9，所述菌株的保藏编号为CGMCCNo.20182。


2.权利要求1所述的耐盐碱阿根廷假单胞菌PAPM-9在产NH3、解磷或者防治番茄软腐病方面的用途。


3.一种以权利要求1所述的阿根廷假单胞菌PAPM-9为主要有效成分的活菌制剂。


4.权利要求3所述的活菌制剂的制备方法，其特征是，将所述阿根廷假单胞菌PAPM-9进行扩大培养后，以体积比2-5％的接种量转接入发酵培养基中，36-38℃培养24-28h，获得阿根廷假单胞菌PAPM-9发酵液，加入没食子酸丙酯0.01-0.03％(w/w)...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙中涛，辛寒晓，刘丽英，安良聪，赵升远，孙国科，陈君君，
申请(专利权)人：山东佐田氏生物科技有限公司，德州八虎生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37