肌萎缩侧索硬化症及脊髓相关病症的治疗制造技术

本公开涉及编码靶向SOD1的多核苷酸的AAV，其可用于治疗肌萎缩性侧索硬化(ALS)和用于治疗包括ALS的脊髓相关病症的递送方法。于治疗包括ALS的脊髓相关病症的递送方法。于治疗包括ALS的脊髓相关病症的递送方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肌萎缩侧索硬化症及脊髓相关病症的治疗
[0001]相关申请的引用
[0002]本申请要求在2018年7月2日提交的题为“ALS及脊髓相关病症的治疗”的美国临时专利申请第62/693,040号和2018年10月16日提交的题为“ALS及脊髓相关病症的治疗”的美国临时专利申请第62/746,104号的权益，其每一个的内容通过引用整体并入本文。
[0003]序列表的引用
[0004]本申请与作为ASCII文本文件的电子格式的序列表一起提交。序列表作为ASCII文本文件提供，标题为20571070PCT_SEQLST，在2019年7月2日创建，其大小为15,822字节。序列表的全部内容通过引用并入本文。


[0005]本公开涉及用于设计、制备、生产和/或配制多核苷酸的组合物、方法和过程，所述多核苷酸包括AAV载体、小干扰RNA(siRNA)双链体、shRNA、microRNA或其前体，其靶向或编码靶向超氧化物歧化酶1(SOD1)基因的分子，以干扰SOD1基因表达和/或SOD1酶产生。在一些实施方案中，将多核苷酸插入重组腺相关病毒(AAV)载体。
[0006]还公开了在患有与脊髓相关的疾病和/或其它病症的受试者中抑制SOD1或改变与脊髓相关疾病或病症有关的任何基因的表达的方法。所述方法包括至少通过实质内(intraparenchymal)递送至脊髓的途径，将所述至少一种多核苷酸施用至患有与脊髓相关的病症(例如，神经退化疾病)的受试者。在这些实施方案中，所述疾病是运动神经元病，更具体地说，所述疾病是肌萎缩性侧索硬化(ALS)。

技术介绍

[0007]肌萎缩性侧索硬化(ALS)，也称为Lou Gehrig氏病，是一种致命的进行性神经退化疾病，特征在于初级运动皮质、脑干和脊髓中的上和下运动神经元(MN)的显著丧失。上(例如，皮层)和下运动神经元(例如，脊髓)正常情况下将信息从大脑传送到肌肉以产生随意运动。当这些神经元退化和/或死亡时，传向肌肉的信息的丧失导致肌肉逐渐变弱和/或萎缩，并且不能开始或控制随意运动，直到最终患有ALS的个体丧失肌肉强度和运动、说话、进食甚至呼吸的能力。大多数患者将需要某种形式的呼吸辅助以生存，并且即使如此，大多数ALS患者在诊断的2
‑
5年内由于呼吸衰竭而死亡。在疾病进展期间，一些患者(例如FTD
‑
ALS)也可能发展为额颞痴呆。
[0008]根据ALS协会，每年在美国大约5,600人被诊断为患有ALS。ALS的发病率是每100,000人中发生两例，据估计，在任何给定时间可能有多达30,000名美国人患有该疾病。
[0009]已经描述了两种形式的ALS：一种是偶发性ALS(sALS)，其是美国最常见的ALS形式，占所有诊断病例的90
‑
95％；另一种是家族性ALS(fALS)，其发生在主要具有显性遗传的家族谱系中，并且仅占美国所有病例的约5至10％。sALS和fALS在临床上是不可区分的。
[0010]病理学研究已经将许多细胞过程与疾病发病机理联系起来，例如ER应激增加、自由基(即活性氧物质(ROS))产生、线粒体功能障碍、蛋白质聚集、细胞凋亡、炎症和谷氨酸兴
奋性中毒，特别是在运动神经元(MN)中。
[0011]ALS的成因复杂且异质。通常，ALS被认为是一种复杂的遗传疾病，其中多个基因与环境暴露的组合使人易感。已经发现了十几个与ALS有关的基因，包括SOD1(Cu
2+
/Zn
2+
超氧化物歧化酶)、TDP
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43(TARDBP，TAR DNA结合蛋白
‑
43)、FUS(融合在肉瘤中/在肉瘤中转位)、ANG(血管生成素)、ATXN2(Ataxin
‑
2)、含缬酪肽的蛋白(VCP)、OPTN(Optineurin)和染色体9中非编码GGGGCC六核苷酸重复的扩展、开放阅读框72(C9ORF72)。然而，运动神经元退化的确切机制仍难捉摸。
[0012]目前，没有ALS治愈性治疗。直到最近，唯一FDA批准的药物是利鲁唑，其拮抗谷氨酸应答以减少ALS的病理发展。然而，对于早期ALS患者，仅报道了大约三个月的寿命延长，且对于晚期ALS患者没有观察到治疗益处，这表明对于该患者群缺乏治疗选项(Bensimon G等人,J Neurol.2002,249,609
–
615)。2017年，FDA批准了Radicava(依达拉奉)用于治疗ALS，这个批准是22年首次。Radicava通过静脉内给药，并作为自由基清除剂，减少ALS患者体内的氧化应激，并从而减缓疾病的发展。在137名患者的临床3期试验(NCT01492686)中，Radicava与服用安慰剂的那些患者相比减缓了身体功能的衰退，这是通过ALS功能评级量表修订版(ALS Functional Rating Scale
‑
Revised，ALSFRS
‑
R)的评分确定的(Writing group；Edaravone(MCI
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186)ALS 19Study Group Lancet Neurol.2017Jul；16(7):505
‑
512)。Radicava的批准被认为是在ALS治疗方面的进步，然而它仍然不能治愈。仍需要可有效预防和/或显著阻碍疾病进展的新治疗策略。
[0013]Cu
2+
/Zn
2+
超氧化物歧化酶I型(SOD1)基因中的突变是fALS最常见的成因，占所有fALS病例的约20
‑
30％。最近的报道表明SOD1突变也可能与所有sALS病例的约4％相关(Robberecht和Philip,Nat.Rev.Neurosci.,2013,14,248
‑
264)。SOD1相关的fALS很可能不是由正常SOD1活性的丧失引起的，而是由毒性功能的获得引起的。突变的SOD1相关的fALS毒性的一个假设提出，异常的SOD1酶引起小分子如过氧亚硝酸盐或过氧化氢产生破坏性自由基。突变的SOD1神经毒性的其它假设包括蛋白酶体活性抑制、线粒体损伤、RNA加工破坏和细胞内聚集体形成。突变的SOD1变体和/或野生型SOD1在ALS中的异常积累形成了被鉴定为病理性内含物的不溶性原纤维聚集体。聚集的SOD1蛋白可诱导细胞，特别是运动神经元的线粒体应激(Vehvilainen P等人,Front Cell Neurosci.,2014,8,126)和其它毒性。
[0014]这些发现表明，SOD1可以是家族性和偶发性ALS的潜在治疗靶标。可以减少ALS患者中枢神经系统中产生的SOD1蛋白(无论是野生型还是突变型)的治疗可以改善患者中的ALS症状，例如运动神经元退化以及肌肉无力和萎缩。旨在防止野生型和/或突变的SOD1蛋白聚集形成的试剂和方法可防止疾病进展，并可改善ALS症状。近年来，RNA干扰(RNAi)介导的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抑制细胞中SOD1基因表达的方法，其包括在一个或多个位点通过实质内递送向受试者施用包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，所述AAV载体包含位于两个反向末端重复(ITR)之间的用于抑制或阻抑细胞中SOD1表达的核酸序列，其中所述核酸序列包含有义链序列和反义链序列，其中所述有义链序列包含与SEQ ID NO：7的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链序列包含与SEQ ID NO：8的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且其中所述有义链序列和反义链序列共享长度为至少四个核苷酸的互补区域。2.如权利要求1所述的方法，其中SOD1的表达被抑制或阻抑。3.如权利要求2所述的方法，其中所述SOD1是野生型SOD1、具有至少一个突变的突变SOD1或者野生型SOD1和具有至少一个突变的突变SOD1二者。4.如权利要求2所述的方法，其中SOD1的表达被抑制或阻抑约20％至约100％。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中所述核酸序列包含siRNA双链体的有义链序列和反义链序列。6.如权利要求1
‑
5所述的方法，其中位于两个反向末端重复(ITR)之间的所述核酸序列包括由SEQ ID NO：25组成的所述ITR。7.如权利要求1
‑
5任一项所述的方法，其中所述互补区域长度为至少17个核苷酸。8.如权利要求7所述的方法，其中所述互补区域的长度在19至21个核苷酸之间。9.如权利要求8所述的方法，其中所述互补性区域的长度为19个核苷酸。10.如权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其中所述有义链序列和所述反义链序列独立地为30个核苷酸或更少。11.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述AAV载体包含位于两个反向末端重复(ITR)之间的用于抑制或阻抑细胞中SOD1表达的核酸序列，其中所述核酸序列包含有义链序列和反义链序列，其中所述有义链序列包含与SEQ ID NO：7的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链序列包含与SEQ ID NO：8的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且其中所述有义链序列和反义链序列共有长度为至少四个核苷酸的互补区域。12.一种多核苷酸序列，其包含SEQ ID NO：9。13.一种多核苷酸序列，其由SEQ ID NO：25组成。14.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述AAV载体包含载体基因组序列，所述载体基因组序列包含包装在AAV衣壳中的SEQ ID NO：25。15.如权利要求14所述的腺相关病毒(AAV)载体，其中所述AAV衣壳血清型选自AAVrh10和AAV9。16.如权利要求14所述的腺相关病毒(AAV)载体，其中所述载体基因组是自身互补的(scAAV)。17.一种治疗和/或改善需要治疗的受试者的神经退化或脊髓相关疾病的方法，所述方法包括在多于一个位点通过实质内递送向所述受试者施用治疗有效量的包含腺相关病毒(AAV)载体的组合物，所述AAV载体包含位于两个反向末端重复(ITR)之间用于抑制或阻抑细胞中与所述神经退化或脊髓相关疾病相关的基因的表达的核酸序列，其中所述核酸序列包含有义链序列和反义链序列，其中所述有义链序列包含至少15个连续核苷酸，并且所述
反义链序列包含至少15个连续核苷酸，并且其中所述有义链序列和反义链序列共有长度为至少四个核苷酸的互补区域。18.如权利要求17中任一项所述的方法，其中所述互补区域的长度是至少17个核苷酸。19.如权利要求18所述的方法，其中所述互补区域的长度在19至21个核苷酸之间。20.如权利要求19所述的方法，其中所述互补区域的长度为19个核苷酸。21.如权利要求17所述的方法，其中所述有义链序列和所述反义链序列独立地为30个核苷酸或更少。22.如权利要求17所述的方法，其中所述AAV载体包含选自由以下组成的组的血清型：AAV1、AAV2、AAV2G9、AAV3、AAV3a、AAV3b、AAV3
‑
3、AAV4、AAV4
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4、AAV5、AAV6、AAV6.1、AAV6.2、AAV6.1.2、AAV7、AAV7.2、AAV8、AAV9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、AAV9.9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV16.3、AAV24.1、AAV27.3、AAV42.12、AAV42
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1b、AAV42
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2、AAV42
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3a、AAV42
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3b、AAV42
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4、AAV42
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5a、AAV42
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5b、AAV42
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6b、AAV42
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8、AAV42
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10、AAV42
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11、AAV42
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12、AAV42
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13、AAV42
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15、AAV42
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aa、AAV43
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1、AAV43
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12、AAV43
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20、AAV43
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21、AAV43
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23、AAV43
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25、AAV43
‑
5、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV1
‑
7/rh.48、AAV1
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8/rh.49、AAV2
‑
15/rh.62、AAV2
‑
3/rh.61、AAV2
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4/rh.50、AAV2
‑
5/rh.51、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3
‑
9/rh.52、AAV3
‑
11/rh.53、AAV4
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8/r11.64、AAV4
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9/rh.54、AAV4
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19/rh.55、AAV5
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3/rh.57、AAV5
‑
22/rh.58、AAV7.3/hu.7、AAV16.8/hu.10、AAV16.12/hu.11、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV106.1/hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/hu.61、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV52/hu.19、AAV52.1/hu.20、AAV58.2/hu.25、AAVA3.3、AAVA3.4、AAVA3.5、AAVA3.7、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAV
‑
DJ、AAV
‑
DJ8、AAVF3、AAVF5、AAVH2、AAVrh.72、AAVhu.8、AAVrh.68、AAVrh.70、AAVpi.1、AAVpi.3、AAVpi.2、AAVrh.60、AAVrh.44、AAVrh.65、AAVrh.55、AAVrh.47、AAVrh.69、AAVrh.45、AAVrh.59、AAVhu.12、AAVH6、AAVLK03、AAVH
‑
1/hu.1、AAVH
‑
5/hu.3、AAVLG
‑
10/rh.40、AAVLG
‑
4/rh.38、AAVLG
‑
9/hu.39、AAVN721
‑
8/rh.43、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、AAVcy.5、AAVCy.5R1、AAVCy.5R2、AAVCy.5R3、AAVCy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、AAVhu.13、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AAVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、AAVhu.52、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVhu.14/9、AAVhu.t 19、AAVrh.2、AAVrh.2R、AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh.13R、AAVrh.14、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.46、AAVrh.48、
AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.56、AAVrh.57、AAVrh.58、AAVrh.61、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.67、AAVrh.73、AAVrh.74、AAVrh8R、AAVrh8R A586R突变体、、AAVrh8R R533A突变体、AAAV、BAAV、山羊AAV、牛AAV、AAVhE1.1、AAVhEr1.5、AAVhER1.14、AAVhEr1.8、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhEr1.35、AAVhEr1.7、AAVhEr1.36、AAVhEr2.29、AAVhEr2.4、AAVhEr2.16、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、AAVhEr2.36、AAVhER1.23、AAVhEr3.1、AAV2.5T、AAV
‑
PAEC、AAV
‑
LK01、AAV
‑
LK02、AAV
‑
LK03、AAV
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LK04、AAV
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‑
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‑
PAEC2、AAV
‑
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pre
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miRNA
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101、AAV
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8h、AAV
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‑
2、AAV穿梭100
‑
1、AAV穿梭100
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3、AAV穿梭100
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7、AAV穿梭10
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2、AAV穿梭10
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6、AAV穿梭10
‑
8、AAV穿梭100<...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：沃雅戈治疗公司，
类型：发明
国别省市：