用于治疗与葡萄糖神经酰胺酶制造技术

本公开涉及无论在体外和

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗与葡萄糖神经酰胺酶
β
缺陷相关的神经病症的组合物和方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求
2020
年7月
27
日提交的美国临时申请号
63/057,265
的优先权
。
前述申请的全部内容特此以引用的方式并入本文中
。
[0003]序列表
[0004]本申请与电子格式的序列表一起提交
。
标题为
135333
‑
00120_SL.txt
的序列表文档创建于
2021
年7月
23
日，并且大小为
6,773,307
字节
。
序列表的电子格式的信息以全文引用的方式并入本文中
。
专利

[0005]本文描述了涉及多核苷酸，例如编码葡萄糖神经酰胺酶
β
(GBA)
蛋白和肽的多核苷酸的组合物和方法，所述多核苷酸用于治疗帕金森病
(Parkinson Disease
，
PD)
和相关病症，包括戈谢病
(Gaucher Disease)
和路易体痴呆
(
统称为“GBA
相关病症”)。
在一些实施方案中，组合物可以在腺相关病毒
(AAV)
载体中递送
。
在其它实施方案中，本文所描述的组合物可以用于治疗有需要的受试者，诸如经诊断患有
GBA
相关病症或由
GBA
蛋白的量和
/
或功能缺陷引起的其它疾患的人类受试者，或作为研究此种疾病或疾患的细胞或动物模型中的疾病或疾患的研究工具
。

技术介绍

[0006]溶酶体酸性葡萄糖神经酰胺酶，通常称为葡糖脑苷脂酶或
GCase
，即
D
‑
葡糖基
‑
N
‑
酰基鞘胺醇葡糖水解酶，是在糖脂代谢中重要的溶酶体膜蛋白
。
所述酶由葡萄糖神经酰胺酶
β
(GBA)
基因
(Ensembl Gene ID
编号
ENSG00000177628)
编码
。
这种酶与鞘脂激活蛋白
A(Saposin A)
和鞘脂激活蛋白
C(Saposin C)
一起催化葡萄糖神经酰胺水解为神经酰胺和葡萄糖
。
参见
Vaccaro
，
Anna Maria
等，
Journal of Biological Chemistry 272.27(1997)
：
16862
‑
16867
，其内容以全文引用的方式并入本文中
。
[0007]已知
GBA
中的突变导致人类受试者的疾病
。
纯合或复合杂合
GBA
突变导致戈谢病
(“GD”)。
参见
Sardi
，
S.Pablo
，
Jesse M.Cedarbaum
和
Patrik Brundin.Movement Disorders 33.5(2018)
：
684
‑
696
，其内容以全文引用的方式并入本文中
。
戈谢病是最普遍的溶酶体储积症之一，据估计在一般人群中的标准化出生发病率为
0.4
至
5.8
个人
/100,000
人
。
杂合
GBA
突变可以导致
PD。
实际上，
GBA
突变在7‑
10
％的总
PD
患者中发生，使得
GBA
突变成为最重要的
PD
遗传风险因素
。PD
‑
GBA
患者的溶酶体酶
β
‑
葡糖脑苷脂酶
(GCase)
水平降低，导致糖鞘脂葡萄糖神经酰胺
(GluCer)
的积累增加，进而与
α
‑
突触核蛋白聚集加剧和伴随的神经症状相关联
。
在一些情况下，戈谢病和
PD
，以及其它溶酶体储积症，包括路易体病
(
诸如路易体痴呆
)
和相关疾病在
GBA
基因中共享共同的病因
。
参见
Sidransky
，
E.
和
Lopez
，
G.Lancet Neurol.2012
年
11
月；
11(11)
：
986
‑
998
，其内容以全文引用的方式并入
。
对于此类疾病存在有限的治疗选项
。
[0008]因此，仍然长期需要开发用于治疗
PD
和其它
GBA
相关病症以及改善罹患
GBA
相关病症的患者的
GCase
蛋白缺陷的药物组合物和方法
。

技术实现思路

[0009]本公开通过提供用于治疗患者的
GCase
缺陷的基于
AAV
的组合物和方法来解决这些挑战
。
本文公开了针对基于
AAV
的
GCase
基因递送以减轻功能丧失并改善细胞内脂质运输的组合物和方法
。
所述组合物和方法可用于改善溶酶体糖脂代谢，并且减缓
、
停止或逆转受试者
(
例如，具有
GBA
基因突变的受试者
)
的
PD
和
GBA
相关病症
(
例如，路易体痴呆
(DLB)、
戈谢病
(GD))
的神经退化和其它症状
。
β
‑
葡糖脑苷脂酶
(GBA)
蛋白在本文中有时也称作
GCase
蛋白
。
[0010]因此，在一个方面，本公开提供了一种包含编码
GBA
蛋白的转基因的经分离
(
例如，重组
)
的核酸，其中编码
GBA
蛋白的核苷酸序列包含与
SEQ ID NO
：
1773
的核苷酸序列至少
88
％
(
例如，至少
89、90、92、95、96、97、98
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种包含编码
β
‑
葡糖脑苷脂酶
(GBA)
蛋白的转基因的经分离
(
例如，重组
)
的核酸，其中编码所述
GBA
蛋白的核苷酸序列包含与
SEQ ID NO
：
1773
的核苷酸序列至少
90
％同一的核苷酸序列
。2.
如权利要求1所述的经分离的核酸，其中编码所述
GBA
蛋白的核苷酸序列包含
SEQ ID NO
：
1773
的核苷酸序列，或与
SEQ ID NO
：
1773
至少
95
％同一的核苷酸序列
。3.
如权利要求1或2所述的经分离的核酸，所述核酸还包含编码
miR
结合位点的核苷酸序列，所述
miR
结合位点降低表达相应
miRNA
的细胞或组织中由所述核酸编码的所述
GBA
蛋白的表达，任选地其中所述经编码的
miRNA
结合位点与
DRG、
肝脏
、
造血系统或它们的组合的细胞或组织中表达的
miRNA
互补，例如，完全互补或部分互补
。4.
一种经分离
(
例如，重组
)
的病毒基因组，所述病毒基因组包含含有编码
GBA
蛋白的转基因的核酸，并且还包含编码
miR
结合位点的核苷酸序列，所述
miR
结合位点调节
(
例如，降低
)DRG、
肝脏
、
造血谱系或它们的组合的细胞或组织中所述经编码的
GBA
蛋白的表达
。5.
如权利要求3所述的经分离的核酸或如权利要求4所述的病毒基因组，其中所述经编码的
miR
结合位点包括
miR183
结合位点
、miR122
结合位点
、miR
‑
142
‑
3p
或它们的组合，任选地其中：
(i)
所述经编码的
miR183
结合位点包含
SEQ ID NO
：
1847
的核苷酸序列，或与其具有至少
85
％
、90
％
、92
％
、95
％
、97
％
、98
％或
99
％序列同一性的核苷酸序列；或具有
SEQ ID NO
：
1847
的至少一个
、
两个
、
三个
、
四个
、
五个
、
六个或七个修饰但不超过十个修饰的核苷酸序列；
(ii)
所述经编码的
miR122
结合位点包含
SEQ ID NO
：
1865
的核苷酸序列，或与其具有至少
85
％
、90
％
、92
％
、95
％
、97
％
、98
％或
99
％序列同一性的核苷酸序列；或具有
SEQ ID NO
：
1865
的至少一个
、
两个
、
三个
、
四个
、
五个
、
六个或七个修饰但不超过十个修饰的核苷酸序列；和
/
或
(iii)
所述经编码的
miR
‑
142
‑
3p
结合位点包含
SEQ ID NO
：
1869
的核苷酸序列，或与其具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、92
％
、95
％
、97
％
、98
％或
99
％序列同一性的核苷酸序列；或具有
SEQ ID NO
：
1869
的至少一个
、
两个
、
三个
、
四个
、
五个
、
六个或七个修饰但不超过十个修饰的核苷酸序列
。6.
如权利要求1‑3中任一项所述的经分离的核酸，或如权利要求4或5所述的病毒基因组，其中所述核酸进一步编码增强元件，其中经编码的增强元件包含以下一者
、
两者或全部：
(a)
鞘脂激活蛋白原多肽
、
鞘脂激活蛋白
C
多肽或其功能片段或变体，任选地包含
SEQ ID NO
：
1789、1758、1750、1752、1754、1756
‑
1758、1784
或
1785
的氨基酸序列，相对于
SEQ ID NO
：
1789、1758、1750、1752、1754、1756
‑
1758、1784
或
1785
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列；或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
(b)
细胞穿透肽，任选地包含
SEQ ID NO
：
1794、1796
或
1798
中的任一者的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1794、1796
或
1798
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列；或
(c)
溶酶体靶向序列，任选地包含
SEQ ID NO
：
1800、1802、1804、1806
或
1808
中的任一者
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1800、1802、1804、1806
或
1808
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列
。7.
一种包含编码
GBA
蛋白和增强元件的转基因的经分离
(
例如，重组
)
的核酸，其中经编码的增强元件包含以下一者
、
两者或全部：
(a)
鞘脂激活蛋白
C
多肽或其功能片段或变体，任选地包含
SEQ ID NO
：
1789
或
1758
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
(b)
细胞穿透肽，任选地包含
SEQ ID NO
：
1794、1796
或
1798
中的任一者的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1794、1796
或
1798
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列；或
(c)
溶酶体靶向序列，任选地包含
SEQ ID NO
：
1800、1802、1804、1806
或
1808
中的任一者的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1800、1802、1804、1806
或
1808
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列
。8.
如权利要求6或7所述的经分离的核酸，或如权利要求6所述的病毒基因组，其中：
(i)
所述经编码的增强元件包含
SEQ ID NO
：
1789
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1789
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列；
(ii)
编码所述增强元件的核苷酸序列包含
1787
的核苷酸序列，或与其至少
85
％同一的核苷酸序列或核苷酸序列；
(ii)
所述经编码的增强元件包含
1802
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1802
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列；
(iii)
编码所述增强元件的核苷酸序列包含
1801
的核苷酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1801
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的核苷酸序列；
(iv)
所述经编码的增强元件包含
1794
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1794
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列；或
(v)
编码所述增强元件的核苷酸序列包含
1793
的核苷酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1793
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的核苷酸序列
。9.
如权利要求7或8所述的经分离的核酸，或如权利要求4‑6或8中任一项所述的病毒基因组，其中编码所述
GBA
蛋白的核苷酸序列包含
SEQ ID NO
：
1773、1777
或
1781
中的任一者的核苷酸序列，或与其至少
90
％
(
例如，至少
92
％
、95
％
、97
％
、98
％或
99
％
)
同一的核苷酸序列
。10.
如权利要求6‑9中任一项所述的经分离的核酸，或如权利要求6或8‑9中任一项所述的病毒基因组，其中所述经编码的增强元件和所述经编码的
GBA
蛋白直接连接
(
例如，在无连接子的情况下
)
或经由经编码的连接子连接
。11.
如权利要求
10
所述的经分离的核酸或病毒基因组，其中：
(i)
所述经编码的连接子包含
SEQ ID NO
：
1854、1855、1843、1845
中的任一者的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1854、1855、1843、1845
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的氨基酸序列；
(ii)
编码所述连接子的核苷酸序列包含表2的核苷酸序列中的任一者，或相对于表2的序列具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的核苷酸序列；
(iii)
编码所述连接子的核苷酸序列包含
SEQ ID NO
：
1724、1726、1729
或
1730
中的任一者的核苷酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1724、1726、1729
或
1730
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代
(
例如，保守取代
)
的核苷酸序列；
(iv)
所述经编码的连接子包含弗林蛋白酶裂解位点；
(v)
所述经编码的连接子包含
T2A
多肽；
(vi)
所述经编码的连接子包含
(Gly4Ser)n
连接子，其中
n
是1‑
10
，例如，
n
是
3、4
或5；和
/
或
(vii)
所述经编码的连接子包含
(Gly4Ser)3
连接子
。12.
如权利要求6‑
11
中任一项所述的经分离的核酸，或如权利要求6或8‑
11
中任一项所述的病毒基因组，其中：
(i)
编码所述增强元件的核苷酸序列位于相对于编码所述
GBA
蛋白的核苷酸序列的5′
处；和
/
或
(ii)
编码所述增强元件的核苷酸序列位于相对于编码所述
GBA
蛋白的核苷酸序列的3′
处
。13.
如权利要求1‑3或5‑
12
中任一项所述的经分离的核酸，或如权利要求4‑6或8‑
12
中任一项所述的病毒基因组，其进一步编码信号序列，任选地其中：
(i)
所述经编码的信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
或
1857
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；和
/
或
(ii)
编码所述信号序列的核苷酸序列位于相对于编码所述
GBA
蛋白的核苷酸序列的5′
处；和
/
或相对于所述经编码的增强元件的5′
处
。14.
如权利要求1‑3或5‑
13
中任一项所述的经分离的核酸，或如权利要求4‑6或8‑
13
中任一项所述的病毒基因组，其中：
(i)
所述核酸按5′
至3′
的顺序包含：编码信号序列的核苷酸序列，所述核苷酸序列包含
SEQ ID NO
：
1850
的核苷酸序列，或与其至少
85
％同一的核苷酸序列；以及编码
GBA
蛋白的核苷酸序列，所述核苷酸序列包含
SEQ ID NO
：
1773
的核苷酸序列，或与其至少
85
％同一的核苷酸序列；或
(ii)
所述核酸按5′
至3′
的顺序编码：信号序列，所述信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；以及
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列
。15.
如权利要求7‑
13
中任一项所述的经分离的核酸，或如权利要求4‑6或8‑
13
中任一项所述的病毒基因组，其中所述核酸按5′
到3′
的顺序编码：
(i)
信号序列，所述信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；以及增强元件，所述增强元件包含
SEQ ID NO
：
1800
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1800
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；
ID NO
：
1854
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1854
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；
T2A
多肽，所述
T2A
多肽包含
SEQ ID NO
：
1855
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1855
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；第二信号序列，所述第二信号序列包含
SEQ ID NO
：
1857
的核苷酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1857
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；以及增强元件，所述增强元件包含
SEQ ID NO
：
1789
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
(ix)
第一信号序列，所述第一信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；弗林蛋白酶裂解位点，所述弗林蛋白酶裂解位点包含
SEQ ID NO
：
1854
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1854
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；
T2A
多肽，所述
T2A
多肽包含
SEQ ID NO
：
1855
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1855
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；第二信号序列，所述第二信号序列包含
SEQ ID NO
：
1857
的核苷酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1857
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；以及增强元件，所述增强元件包含
SEQ ID NO
：
1758
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
(x)
信号序列，所述信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；连接子，所述连接子包含
SEQ ID NO
：
1845
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1845
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；以及增强元件，所述增强元件包含
SEQ ID NO
：
1796
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
(xi)
信号序列，所述信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；增强元件，所述增强元件包含
SEQ ID NO
：
1794
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1794
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；连接子，所述连接子包含
SEQ ID NO
：
1845
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1845
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；以及
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
(xii)
信号序列，所述信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；以及增强元件，所述增强元件包含
SEQ ID NO
：
1808
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1808
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；
(xiii)
第一信号序列，所述第一信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；第一增强元件，所述第一增强元件包含
SEQ ID NO
：
1802
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；弗林蛋白酶裂解位点，所述弗林蛋白酶裂解位点包含
SEQ ID NO
：
1854
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1854
具有至少一个
、
两
个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；
T2A
多肽，所述
T2A
多肽包含
SEQ ID NO
：
1855
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1855
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；第二信号序列，所述第二信号序列包含
SEQ ID NO
：
1857
的核苷酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1857
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；以及第二增强元件，所述第二增强元件包含
SEQ ID NO
：
1789
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
(xiv)
第一信号序列，所述第一信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；连接子，所述连接子包含
SEQ ID NO
：
1845
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1845
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；第一增强元件，所述第一增强元件包含
SEQ ID NO
：
1798
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1798
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；弗林蛋白酶裂解位点，所述弗林蛋白酶裂解位点包含
SEQ ID NO
：
1854
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1854
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；
T2A
多肽，所述
T2A
多肽包含
SEQ ID NO
：
1855
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1855
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；第二信号序列，所述第二信号序列包含
SEQ ID NO
：
1857
的核苷酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1857
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；以及增强元件，所述增强元件包含
SEQ ID NO
：
1789
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；或
(xv)
第一信号序列，所述第一信号序列包含
SEQ ID NO
：
1853
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；第一增强元件，所述第一增强元件包含
SEQ ID NO
：
1802
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；
GBA
蛋白，所述
GBA
蛋白包含
SEQ ID NO
：
1775
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列；连接子，所述连接子包含
SEQ ID NO
：
1845
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1845
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；第一增强元件，所述第一增强元件包含
SEQ ID NO
：
1798
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1798
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；弗林蛋白酶裂解位点，所述弗林蛋白酶裂解位点包含
SEQ ID NO
：
1854
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1854
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；
T2A
多肽，所述
T2A
多肽包含
SEQ ID NO
：
1855
的氨基酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1855
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；第二信号序列，所述第二信号序列包含
SEQ ID NO
：
1857
的核苷酸序列，或相对于
SEQ ID NO
：
1857
具有至少一个
、
两个或三个但不超过四个修饰，例如取代的氨基酸序列；以及增强元件，所述增强元件包含
SEQ ID NO
：
1789
的氨基酸序列，或与其至少
85
％同一的氨基酸序列
。16.
一种经分离
(
例如，重组
)
的病毒基因组，所述病毒基因组包含可操作地连接至如权利要求1‑3或7‑
15
中任一项所述的核酸的启动子
。17.
如权利要求4‑6或7‑
15
所述的病毒基因组，所述病毒基因组还包含可操作地连接至包含编码所述
GBA
蛋白的所述转基因的所述核酸的启动子，其中所述启动子包含组织特异性启动子或泛在启动子
。18.
如权利要求
16
或
17
所述的病毒基因组，其中所述启动子包含：
(i)
鸡
β
‑
肌动蛋白
(CBA)
启动子和
/
或其衍生物
CAG、EF
‑
1a
启动子
、CMV
立即早期增强子和
/
或启动子
、
β
葡萄糖醛酸苷酶
(GUSB)
启动子
、
泛素
C(UBC)
启动子
、
神经元特异性烯醇酶
(NSE)、
血小板源性生长因子
(PDGF)
启动子
、
血小板源性生长因子
B
链
(PDGF
‑
β
)
启动子
、
细胞间粘附分子
2(ICAM
‑
2)
启动子
、
突触蛋白
(Syn)
启动子
、
甲基
‑
CpG
结合蛋白
2(MeCP2)
启动子
、Ca2+/
钙调蛋白依赖性蛋白激酶
II(CaMKII)
启动子
、
代谢型谷氨酸受体
2(mGluR2)
启动子
、
神经丝轻
(NFL)
或重
(NFH)
启动子
、
β
‑
球蛋白小基因
n
β2启动子
、
前脑啡肽原
(PPE)
启动子
、
脑啡肽
(Enk)
和兴奋性氨基酸转运子
2(EAAT2)、
神经胶质纤维酸性蛋白
(GFAP)
启动子
、
髓鞘碱性蛋白
(MBP)
启动子
、
心血管启动子
(
例如，
α
MHC、cTnT
和
CMV
‑
MLC2k)、
肝脏启动子
(
例如，
hAAT、TBG)、
骨骼肌启动子
(
例如，结蛋白
、MCK、C512)
或其片段
(
例如，截短
)
或功能变体；和
/
或
(ii)SEQ ID NO
：
1832、1833、1834、1835、1836、1839、1840
中的任一者的核苷酸序列，或与其至少
95

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：沃雅戈治疗公司，
类型：发明
国别省市：