一种猪流行性腹泻病毒株及其灭活疫苗与干扰素联合免疫方法技术

本发明专利技术提供了一种猪流行性腹泻病毒株、灭活疫苗及其与干扰素的疫苗组合物，属于病毒及免疫技术领域。本发明专利技术采用的中国流行性腹泻病毒PEDV‑CH‑HB1801株属于当前国内流行的GII亚型病毒，用其制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性和稳定性，接种猪只后，能够刺激机体产生较高水平的中和抗体。另外本发明专利技术采用灭活毒株与猪基因工程干扰素联合免疫后，免疫原性好，可对临床流行毒株产生保护力，具有实际和广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种猪流行性腹泻病毒株及其灭活疫苗与干扰素联合免疫方法
本专利技术属于病毒及免疫
，具体而言，涉及一种猪流行性腹泻病毒株、灭活疫苗及其与干扰素的疫苗组合物。
技术介绍
猪流行性腹泻(Porcineepifemicdiarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepifemicdiarrheavirus，PEDV)感染引起的一种急性肠道疾病。PEDV可感染各个年龄阶段的猪，其中一周龄以内的仔猪感染最为严重，主要表现呕吐、水样腹泻、脱水等症状，病死率达90％以上。剖检感染猪可见其空肠和回肠部分肠绒毛萎缩、脱落，肠道壁变薄、透明。一周龄以上猪只虽然感染后死亡率不高，但仍出现腹泻、脱水、消瘦等症状，饲料回报率显著降低，猪只抵抗力下降，易继发其他病原感染，给猪群健康和猪场经济效益均带来十分不利的影响。2010年冬季，我国南方猪场开始大规模爆发PED并快速蔓延至全国各地猪场。在该次疫情中，一周龄以内的仔猪死亡率高达100％，给养猪业造成了巨大的经济损失，市场猪肉供应及居民消费指数均受到严重影响。此后，PEDV变异毒株不断出现，导致其感染率和死亡率居高不下，已成为危害我国养猪业健康发展的重要病原之一。疫苗接种免疫是目前猪场主要依赖的PED防控手段。因此，快速研制出免疫原性好、保护力强、安全性高的疫苗是当前PED防治亟待解决的问题。1984年PED在我国陆续报道以后，猪场开始使用接种PEDVCV777毒株制成的弱毒苗或二联灭活苗进行预防，对猪场预防猪病毒性腹泻产生了较好的保护效果。2010年疫苗接种未能产生较好的保护效果，PED再次爆发流行，猪场流行毒株不断发生变异，相比原来疫苗毒株已经发生了较大变异。对已公布的我国流行毒株的基因组序列进行分析发现，我国流行毒株基因型十分丰富，其中GII-a亚型毒株最多，GII-c亚型近几年开始频繁出现。然而，现有的疫苗毒株如CV777和DR13等，均为GI亚型毒株，这表明现行疫苗毒株与我国流行毒株已经不太匹配。因此，利用符合我国流行趋势的毒株制备疫苗才能满足当前PEDV的防控需求。
技术实现思路
针对目前PEDV经典疫苗CV777株无法对国内猪流行性腹泻提供足够的保护力，本专利技术的目的在于提供一种灭活疫苗PEDV-CH-HB-1801株及其与猪基因工程干扰素联合免疫的方法，该流行毒株制得的疫苗及免疫方法能够对流行毒株产生较好的保护力，而且具有较大的经济效益和应用前景。本专利技术人前期从湖北省某腹泻仔猪小肠样品中分离到一株疑似PEDV的流行毒株，成功在Vero细胞上繁殖扩增后，通过PCR、血清中和实验、动物感染回归实验进行了鉴定，结果证明该病毒为PEDV病毒，命名为PEDV-CH-HB-1801，随后通过高通量测序，获得了该病毒的全基因组序列，全基因组序列分析表明PEDV-CH-HB-1801株与疫苗株CV777同源性仅为96.06％；其中，S蛋白的核苷酸和氨基酸同源性仅为93.76％和93.44％。全基因组进化树也表明CV777属于GI亚型，而本专利技术的PEDV-CH-HB-1801株与多数中国分离毒株同属于GII亚型。动物感染回归实验表明，PEDV-CH-HB-1801株具有较强的致病性，感染率100％，被感染动物出现小肠肠壁变薄等症状。动物免疫保护实验结果表明，PEDV-CH-HB-1801株灭活疫苗能对动物体起到一定的保护作用。本专利技术的第一个目的是通过以下技术方案予以实现的：一种猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株，其生物保藏号为CCTCCNO:V202090。保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉市武汉大学，保藏时间为2020年12月9日。需要说明的是，序列表中：SEQIDNO.1为猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株S基因COE中和表位的编码氨基酸序列；SEQIDNO.2为猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株S基因SS2中和表位的编码氨基酸序列；SEQIDNO.3为猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株SS6基因COE中和表位的编码氨基酸序列；SEQIDNO.4为猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株S基因2C10中和表位的编码氨基酸序列。将本专利技术的猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株制备成灭活疫苗后，对当前流行毒株引起的腹泻具有良好的保护力；同时由该毒株制备的疫苗安全性和稳定性高，对猪体无害。因此，本专利技术的第二个目的在于提供上述猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株在制备猪流行性腹泻病毒疫苗中的应用。另外，本专利技术还提供一种疫苗组合物，该疫苗组合物含有有效量的上述猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株的抗原；所述猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株的抗原包括减毒全病毒抗原、灭活全病毒抗原、亚单位抗原或合成肽抗原。进一步优选地，上述的疫苗组合物，其中所述猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株的抗原为所述猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株的灭活全病毒抗原；所述灭活全病毒抗原含量为灭活前≥107.0TCID50/ml。进一步地，本专利技术提供一种猪流行性腹泻病毒灭活疫苗与猪基因工程干扰素的联合免疫方法，所述联合免疫方法为同时肌肉注射猪流行性腹泻病毒灭活疫苗组合物与猪基因工程干扰素。本专利技术人将该灭活疫苗添加猪基因工程干扰素联合免疫后，机体对PEDV感染抵抗力明显提升。因此，本专利技术所述的疫苗组合物中还含有干扰素。所述的干扰素选自如下的一种或两种以上：α干扰素、β干扰素、γ干扰素，所述的干扰素选用常规商业化的猪基因工程干扰素。再进一步优选地，本专利技术的疫苗组合物还含有黄芪多糖，黄芪多糖的加入可以进一步提高疫苗组合物对PEDV感染的抵抗力。当上述疫苗组合物中活性成分由灭活全病毒抗原与干扰素组成时，其中的灭活全病毒抗原灭活前≥107.0TCID50/mL，干扰素稀释浓度≥50万IU/mL。当上述疫苗组合物中活性成分由灭活全病毒抗原、干扰素和黄芪多糖组成时，其中的灭活全病毒抗原灭活前≥107.0TCID50/mL，干扰素稀释浓度≥50万IU/Ml，黄芪多糖浓度≥10mg/mL。最后，本专利技术还提供一种制备上述疫苗组合物的方法，该方法包括如下步骤：(1)培养增殖所述的猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株；(2)灭活所述步骤(1)所述增殖的猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株；(3)加入干扰素和佐剂，乳化；或者加入干扰素、黄芪多糖和佐剂，乳化。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术采用的中国流行性腹泻病毒CH-HB1801株属于当前国内流行的GII亚型病毒，用其制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性和稳定性，接种猪只后，能够刺激机体产生较高水平的中和抗体。另外，本专利技术提供一种猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株灭活疫苗与猪基因工程干扰素的联合免疫方法，灭活毒株对猪只安全无副反应，灭活株制成疫苗安全有效，与猪基因工程干扰素联本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株，其生物保藏号为CCTCC NO:V202090。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株，其生物保藏号为CCTCCNO:V202090。


2.权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株在制备猪流行性腹泻病毒疫苗中的应用。


3.一种疫苗组合物，其特征在于，该疫苗组合物含有有效量的权利要求1所述猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株的抗原；所述猪流行性腹泻病毒CH-HB-1801株的抗原包括减毒全病毒抗原、灭活全病毒抗原、亚单位抗原或合成肽抗原。


4.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其特征在于，所述猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株的抗原为所述猪流行性腹泻病毒PEDV-CH-HB-1801株的灭活全病毒抗原；所述灭活全病毒抗原含量为灭活前≥107.0TCID50/ml。


5.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其特征在于，该疫苗组合物还含有干扰素。


6.根据权利要求5所述的疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁婉，周丹娜，田永祥，杨克礼，郭锐，袁芳艳，刘泽文，高婷，刘威，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42