一种人呼吸道合胞病毒毒株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人呼吸道合胞病毒毒株及其应用，涉及病毒免疫领域。通过连续传代筛选获得了4株人呼吸道合胞病毒高毒性突变株，经过基因序列测定确定均为A亚型hRSV。该人呼吸道合胞病毒高毒性突变株遗传稳定性好，免疫动物后，免疫原性强。因此，该人呼吸道合胞病毒高毒性突变株可以用于减毒株的选育，筛选安全且免疫活性有效的减毒株，可以应用于感染小鼠并导致小鼠死亡，借此构建致死型hRSV感染动物模型，用于hRSV疫苗和抗hRSV药物的筛选评价。

【技术实现步骤摘要】
一种人呼吸道合胞病毒毒株及其应用
本专利技术涉及病毒免疫领域，具体而言，涉及一种人呼吸道合胞病毒毒株及其应用。
技术介绍
目前，人呼吸道合胞病毒(humanRespiratorySyncytialVirus，hRSV)尚无疫苗。而疫苗的研发面临如下的难题：感染者的年龄普遍较小(5岁以下)，导致疫苗的使用极为慎重；病毒有多种方式逃避宿主天然免疫；缺乏自然感染诱导的持久保护性免疫；在20世纪60年代研发的福尔马林灭活全病毒疫苗，在自然感染中接种疫苗的儿童出现以肺泡炎为标志的疾病加重症状，即疾病增强作用(enhancedRSVdisease,ERD)，住院率明显增加，甚至引起死亡；此外，动物模型不能完全拟合人体内病毒的发病机制也影响了疫苗的研发。目前，唯一获得许可预防hRSV感染的药物是帕利珠单抗，帕利珠单抗是针对该病毒F蛋白的人源化小鼠单克隆抗体，该疗法对早产儿和患有慢性疾病的婴儿较安全有效，但使用也十分局限，该疗法针对的对象必须是具有严格指征的高危人群(儿童)，且成本很高，在我国没有应用。此外，现有药物(利巴韦林)存在毒性高、病毒变异快、病毒的耐药性增加等问题。现代医学仍不能开发安全而有效的hRSV疫苗或抗病毒药物，研发的一大瓶颈是缺乏能够拟合病毒在人体感染的合适动物模型。因该病毒亦可引起儿童或老年人、免疫力低下成年人的重症感染甚至死亡，因此筛选高毒性突变株hRSV尤为关键，从而借此构建致死性hRSV感染动物模型，用于hRSV疫苗和抗hRSV药物的筛选评价。鉴于此，特提出本专利技术。r>
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种人呼吸道合胞病毒毒株及其应用以解决上述技术问题。本专利技术是这样实现的：一种人呼吸道合胞病毒毒株，毒株为A亚型毒株，人呼吸道合胞病毒毒株选自如下毒株中的至少一种：毒株1、毒株2、毒株3和毒株4；毒株1保藏编号为CCTCCNO：V201746；毒株2保藏编号为CCTCCNO：V201755；毒株3保藏编号为CCTCCNO：V202033；毒株4保藏编号为CCTCCNO：V202034。针对目前尚无人呼吸道合胞病毒毒株疫苗问世，专利技术人筛选获得了一种高毒性突变株hRSV。该人呼吸道合胞病毒毒株包括4个毒株。4株病毒均可引起BALB/c小鼠感染后死亡，解决了hRSV疫苗研发中缺乏致死型动物模型的问题，为hRSV疫苗和抗hRSV药物的筛选评价提供了优秀的动物模型平台。专利技术人通过在小鼠中连续传代一株临床分离的hRSV(KI株)，累积病毒突变后获得了4株hRSV高毒性突变株。KI株参照KeZhang,etal.CompletegenomesequencesofonehumanRespiratorySyncytialAntigenicGroupAVirusfromChinaanditsfourmouse-adaptedisolates记载的分离出的人类呼吸道合胞病毒株。高毒株hRSV的筛选方法参照高毒性人呼吸道合胞病毒鼠适应株的筛选，中国病原生物学杂志记载的动物连续传代法的具体步骤。专利技术人筛选获得的4株hRSV高毒性突变株均具有突变位点。具体地，4株hRSV高毒性突变株均保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。毒株1保藏名称为人呼吸道合胞病毒A亚型R87-4-18，保藏编号为CCTCCNO：V201746，保藏时间为2019年1月10日；毒株2保藏名称为人呼吸道合胞病毒A亚型R88-1-23，保藏编号为CCTCCNO：V201755，保藏时间为2019年1月10日；毒株3保藏名称为人呼吸道合胞病毒A亚型R100-3，保藏编号为CCTCCNO：V202033，保藏时间为2020年9月21日；毒株4保藏名称为人呼吸道合胞病毒A亚型R100-5，保藏编号为CCTCCNO：V202034，保藏时间为2020年9月21日。毒株1的全基因组序列为SEQIDNO.1所示，毒株2的全基因组序列为SEQIDNO.2所示，毒株3的全基因组序列为SEQIDNO.3所示，毒株4的全基因组序列为SEQIDNO.4所示。上述人呼吸道合胞病毒毒株在制备人呼吸道合胞病毒减毒株中的应用。例如，可以预期的，以本专利技术提供的上述人呼吸道合胞病毒毒株作为母株进行减毒株的选育，并且可以用于后续的减毒培育以及将来的规模化生产，从而进一步用于减毒活疫苗的开发。另外，还可以将本专利技术提供的毒株中的部分序列用于开发组分疫苗。上述人呼吸道合胞病毒毒株在制备用于治疗或预防呼吸道合胞病毒感染药物中的应用。在一种实施方式中，上述药物为疫苗。在一种实施方式中，上述药物为减毒活疫苗或蛋白组分疫苗。一种杂交瘤细胞，杂交瘤细胞是以上述的人呼吸道合胞病毒毒株作为免疫原对动物进行免疫制得。上述动物为小鼠。在一种实施方式中，上述小鼠为BALB/c小鼠。例如将上述的人呼吸道合胞病毒毒株对小鼠进行免疫，将骨髓瘤细胞与免疫小鼠的免疫B淋巴细胞进行融合，在培养基中培养选择杂交瘤细胞。一种抗血清，抗血清是以上述的人呼吸道合胞病毒毒株作为免疫原对动物进行免疫制得。例如皮下免疫动物后，在动物的颈动脉和/或眼底采血并收集血清。优选地，动物为小鼠、猴、兔或羊。在其他实施方式中，上述免疫动物可以选自马、鸡、驴或猪。在一种实施方式中，上述小鼠为BALB/c小鼠。一种抗体，抗体是以上述的人呼吸道合胞病毒毒株作为免疫原对动物进行免疫制得。动物为小鼠、猴、兔或羊。在其他实施方式中，上述免疫动物可以选自马、鸡、驴或猪。在一种实施方式中，上述小鼠为BALB/c小鼠。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过连续传代筛选获得了4株人呼吸道合胞病毒高毒性突变株，经过基因序列测定确定均为A亚型hRSV。该人呼吸道合胞病毒高毒性突变株遗传稳定性好，免疫动物后，免疫原性强。因此，该人呼吸道合胞病毒高毒性突变株可以用于减毒株的选育，筛选安全且免疫活性有效的减毒株，可以应用于感染小鼠并导致小鼠死亡，借此构建致死型hRSV感染动物模型，用于hRSV疫苗和抗hRSV药物的筛选评价。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为连续传代培养的操作流程示意图；图2为小鼠感染HRSV-A-GZ08-0(野生株)、HRSV-A-GZ08-18(高毒株)和R87-4-18(高毒株)后的体重变化和存活情况；图3为R87-4-18(高毒株)与HRSV-A-GZ08-18的基因组比对结果图；图4为小鼠感染R88-1-23后的体重变化和存活情况；图5为R88-1-23与HRSV-A-GZ08-18的基因组比对结果图；图6为小鼠感染R100-3后的体重变化和存活情况；图7为R1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人呼吸道合胞病毒毒株，其特征在于，所述毒株为A亚型毒株，所述人呼吸道合胞病毒毒株选自如下毒株中的至少一种：毒株1、毒株2、毒株3和毒株4；/n所述毒株1保藏编号为CCTCC NO：V201746；所述毒株2保藏编号为CCTCC NO：V201755；所述毒株3保藏编号为CCTCC NO：V202033；所述毒株4保藏编号为CCTCC NO：V202034。/n

【技术特征摘要】
1.一种人呼吸道合胞病毒毒株，其特征在于，所述毒株为A亚型毒株，所述人呼吸道合胞病毒毒株选自如下毒株中的至少一种：毒株1、毒株2、毒株3和毒株4；
所述毒株1保藏编号为CCTCCNO：V201746；所述毒株2保藏编号为CCTCCNO：V201755；所述毒株3保藏编号为CCTCCNO：V202033；所述毒株4保藏编号为CCTCCNO：V202034。


2.根据权利要求1所述的人呼吸道合胞病毒毒株，其特征在于，所述毒株1的全基因组序列为SEQIDNO.1所示，所述毒株2的全基因组序列为SEQIDNO.2所示，所述毒株3的全基因组序列为SEQIDNO.3所示，所述毒株4的全基因组序列为SEQIDNO.4所示。


3.一种如权利要求1或2所述的人呼吸道合胞病毒毒株在制备人呼吸道合胞病毒减毒株中的应用。


4.一种如权利要求1或2所述的人呼吸道合胞病毒毒株在制备用于治...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗语思，张科，沈祥春，陶玲，
申请(专利权)人：贵州医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：贵州;52