一种熟地黄中类黑精及其应用制造技术

本发明专利技术涉及熟地黄类黑精的制备方法及其应用，该方法以熟地黄为原料，纯水回流提取，经80%乙醇沉淀，去上清液，将沉淀溶解，60℃下D202树脂吸附6 h，采用稀盐酸洗脱，透析得到熟地黄类黑精。本发明专利技术通过药效学实验发现，熟地黄类黑精具有促进骨髓造血功能恢复功能，可用于与造血功能缺失的相关疾病的治疗用途，包括慢性再生障碍性贫血，失血性贫血，化疗后骨髓抑制等。

【技术实现步骤摘要】
一种熟地黄中类黑精及其应用
本专利技术属于化学医药领域，涉及熟地黄类黑精的制备和医药用途。
技术介绍
熟地黄为玄参科植物地黄Rehmanniaeglutinosa(Gaertn.)DC.的根茎经蒸制加工炮制而成，炮制过后的熟地黄药性由清转补，由寒转温，起到了滋阴补血，填精益髓的功效。现代临床研究同样证实熟地黄及其制剂具有改善慢性再生障碍性贫血等造血功能障碍相关疾病。熟地黄中含有单糖，寡糖，多糖，苯乙醇苷，呋喃醛衍生物等多种化学成分，其中粗多糖组分被认为是熟地黄补血功效的主要物质基础。由于粗多糖组分分离方法和效率的局限，多糖组分中可能混杂大量非多糖类物质，因此，熟地黄补血功效的物质基础仍不确切。类黑精是糖类等羰基化合物与氨基酸或蛋白质等氨基化合物之间通过美拉德反应而生成的一类聚合度不等的高分子混合物，且具备明显的褐变特征。类黑精广泛存在于食品与药材的储藏与热处理过程中，具有抗氧化，抗菌，抗肿瘤等多种药理活性。地黄在经清蒸或酒蒸为熟地黄后，外观颜色由棕黄色转变为黑色，并生成大量的5-羟甲基糠醛等美拉德反应中间产物，提示蒸制过程中可能产生大量的类黑精物质。然而，由于类黑精物质极性与分子量较大，在地黄的水提醇沉过程中易与多糖等物质共沉淀，因此，粗多糖组分中可能混杂大量类黑精物质，其是否为熟地黄补血的功效物质基础有待考究。本专利技术建立分离制备熟地黄类黑精方法，通过组分“敲出-敲入”策略，首次考察并发现了类黑精为熟地黄补血的主要物质基础。
技术实现思路
本专利技术的目的为提供熟地黄类黑精的用途，及操作简便，成本低的熟地黄类黑精的提取分离方法。一种熟地黄类黑精，其特征在于按如下方法制备获得，具体步骤如下A、取熟地黄饮片加水煎煮，提取液回收溶剂至每1mL浓缩液有1g生药材，加入无水乙醇调节乙醇浓度为80％，搅拌，静置，沉淀，弃去上清，沉淀加水溶解；B、经离子交换树脂处理，获得稀酸洗脱液，调节pH至中性，浓缩，透析，冷冻干燥获得熟地黄类黑精。所述的一种熟地黄类黑精，其特征在于，步骤A中所述的煎煮提取方法为：以药材8-12倍量水，煎煮提取40-60min，过滤，加入6-8倍量水，煎煮提取30-60min。所述的一种熟地黄类黑精，其特征在于，步骤B中加入D202强碱型阴离子交换树脂，恒温吸附条件为摇床速率60-120r/min，温度40-60℃，吸附时间为2-6h而后将树脂与溶液装柱，纯水洗脱，浓缩，采用稀酸溶液洗脱至洗脱液无色，收集洗脱液，加入碱液，调节pH为中性，浓缩，置于500Da透析袋中，流水透析3d，浓缩，制备得到熟地黄类黑精，-20℃保存备用；其中所述的稀酸为盐酸溶液，所述碱液为NaOH溶液。所述的一种熟地黄类黑精，其特征在于，步骤B中所述的树脂用量与熟地黄生药量比为2:1-10:1。所述的一种熟地黄类黑精，其特征在于，稀酸浓度为0.5-0.1mol/L。所述的一种熟地黄类黑精，其特征在于，透析袋分子量为500Da。所述的熟地黄为玄参科植物Rehmanniaeglutinosa(Gaertn.)DC.的新鲜块根，经晒至八成干后得生地黄，后采用绍兴黄酒“九蒸九晒”制得熟地黄，即生地黄加入30％黄酒拌匀，置于蒸锅隔水蒸制6h，取出晒至外皮粘液晒干，后反复蒸制9次获得熟地黄。所述熟地黄类黑精在制备治疗或预防造血功能障碍药物中的应用。具体来说所述的熟地黄类黑精由如下方法制备获得，其具体步骤如下：(1)取熟地黄药材，剪碎，加入10倍量纯水浸泡1h，而后煎煮40min，过滤并收集提取液，再次加入8倍量纯水煎煮30min，合并两次滤液，旋转蒸发浓缩，相当于每1mL浓缩液中有1g生药材。(2)取上述提取物置于烧杯中，加入无水乙醇，调整乙醇浓度为80％，置于4℃冰箱中静置24h，反复2次，沉淀用80％乙醇洗涤后，冷冻干燥，得到熟地黄大分子部位，备用。(3)取熟地黄大分子部位冻干粉，加水溶解，加入D202大孔树脂，于摇床中动态吸附6h，将树脂与溶液装柱，纯水洗脱4个柱体积，后采用HCl溶液洗脱至洗脱液无色，收集洗脱液，加入NaOH溶液，调节pH为中性，旋转蒸发浓缩，置于500Da透析袋中，流水透析3d，浓缩，制备得到熟地黄类黑精组分。优选地，步骤(2)乙醇浓度为80％。优选地，步骤(3)D202强碱阴离子交换树脂吸附。优选地，步骤(3)摇床转速120r/min。优选地，步骤(3)摇床温度为60℃。优选地，步骤(3)HCl溶液洗脱。优选地，步骤(3)透析袋规格500Da。所述熟地黄类黑精为片剂，胶囊剂，丸剂，水剂或颗粒剂等口服制剂。有益效果本专利技术首次发现熟地黄类黑精在用于制备治疗或预防造血功能障碍药物中的用途。药理实验结果表明，熟地黄类黑精组分能显著提高骨髓抑制小鼠外周血中白细胞计数，红细胞计数及血红蛋白含量，同时显著改善骨髓有核细胞数，表明熟地黄类黑精促进造血功能强。附图说明图1为熟地黄大分子部位不同组分的HPGPC-ELSD-DAD图谱(A：HPLC-ELSD检测；B：HPLC-DAD检测，波长为420nm；HMW：大分子部位组，F1：F1组分，F2：类黑精组分)图2为熟地黄提取物中F2组分(类黑精)的元素分析。图3为熟地黄提取物中F2组分(类黑精)的紫外-可见光分析图谱。图4为熟地黄提取物中F2组分(类黑精)的傅里叶红外变换光谱分析。图5为熟地黄提取物不同化学组分对环磷酰胺诱导的血虚小鼠外周血象的影响(A：外周白细胞计数；B：外周红细胞计数；C：血红蛋白含量；D：外周血小板计数；E：红细胞压积；Control:空白组，Model：模型组，PRR：熟地黄提取物组，HMW：大分子部位组，F1：F1组分，F2：类黑精组，F1+F2：F1组分与类黑精联用组，rhG-CSF：重组人粒细胞刺激因子注射液组；n＝8-10；#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001，与空白组比较；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组比较)图6为熟地黄提取物不同化学组分对环磷酰胺诱导的血虚小鼠有核细胞数的影响(Control:空白组，Model：模型组，PRR：熟地黄提取物组，HMW：大分子部位组，F1：F1组分，F2：类黑精组分，F1+F2：F1组分与类黑精联用组，rhG-CSF：重组人粒细胞刺激因子注射液组；n＝8；###p<0.001，与空白组比较；*p<0.05，与模型组比较)具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。实施例1：熟地黄类黑精的提取分离及化学表征一、实验仪器与试剂1260infitiny高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；Alltech3300ELSD检测器(美国Grace公司)；DAD检测器(安捷伦科技有限公司)；元素分析仪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种熟地黄类黑精，其特征在于按如下方法制备获得，具体步骤如下/nA、取熟地黄饮片加水煎煮，提取液回收溶剂至每1 mL浓缩液有1 g 生药材，加入无水乙醇调节乙醇浓度为80%，搅拌，静置，沉淀，弃去上清，沉淀加水溶解；/nB、经离子交换树脂处理，获得稀酸洗脱液，调节pH至中性，浓缩，透析，冷冻干燥获得熟地黄类黑精。/n

【技术特征摘要】
1.一种熟地黄类黑精，其特征在于按如下方法制备获得，具体步骤如下
A、取熟地黄饮片加水煎煮，提取液回收溶剂至每1mL浓缩液有1g生药材，加入无水乙醇调节乙醇浓度为80%，搅拌，静置，沉淀，弃去上清，沉淀加水溶解；
B、经离子交换树脂处理，获得稀酸洗脱液，调节pH至中性，浓缩，透析，冷冻干燥获得熟地黄类黑精。


2.根据权利要求1所述的一种熟地黄类黑精，其特征在于，步骤A中所述的煎煮提取方法为：以药材8-12倍量水，煎煮提取40-60min，过滤，加入6-8倍量水，煎煮提取30-60min。


3.根据权利要求1所述的一种熟地黄类黑精，其特征在于，步骤B中加入D202强碱型阴离子交换树脂，恒温吸附条件为摇床速率60-120r/min，温度40-60°C，吸附时间为2-6h而后将树脂与溶液装柱，纯水洗脱，浓缩，采用稀酸溶液洗脱至洗脱液无色，收集洗脱液，加入碱液，调节pH为中性，浓缩，置于500Da透析袋中，流水透析3d，浓缩，制备得到熟地黄...

【专利技术属性】
技术研发人员：余伯阳，戚进，龚普阳，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32