CTLA4-Ig融合蛋白制剂制造技术

本发明专利技术公开了融合蛋白的稳定药物制剂，其中所述制剂包含缓冲剂、糖醇/多元醇、氨基酸和表面活性剂，并且其中所述制剂不包含蔗糖。另外，所述制剂也可不包含盐。公开的融合蛋白制剂是也适合冻干的液体制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CTLA4-Ig融合蛋白制剂
本专利技术涉及融合蛋白分子的稳定制剂。具体地，本专利技术公开了稳定的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4-免疫球蛋白(CTLA4-Ig)融合蛋白制剂，其中该制剂包含缓冲系统和稳定剂。
技术介绍
在过去的二十年中，重组DNA技术已导致许多蛋白质的商业化，特别是抗体治疗剂和融合蛋白分子。融合蛋白，特别是Fc融合蛋白分子(其中人免疫球蛋白(Ig)的Fc部分与受体的特定部分缀合)变得重要，因为它们在治疗多种肿瘤疾病和免疫疾病中的广泛应用。依那西普(TNFR-IgFc)、阿柏西普(VEGFR-IgFc)和阿巴西普和贝拉西普(CTLA4-IgFc)是属于食品和药物管理局(FDA)批准的治疗多种疾病的那些Fc融合蛋白。融合蛋白分子的有效性主要取决于稳定性、给药途径以及它们的剂型和浓度。这进而使得这些蛋白质分子被适当配制以保持稳定性和活性成为必要。通常，蛋白质(特别是Fc融合蛋白)典型地在溶液中是不稳定的，并且对pH、温度和氧化敏感，因此会在溶液中经历各种共价和非共价反应、修饰或降解。较常见的蛋白质降解途径包括聚集、脱酰胺和/或氧化，并且已知这些降解途径受pH、温度和储存条件包括制剂条件和赋形剂的影响。因此，这些途径导致溶液中蛋白质的物理和化学不稳定性。治疗性蛋白质中的聚集特别令人关注，因为它通常会导致一段时间内的生物活性降低/活性丧失，并且当向患者给药时可能具有免疫原性。在融合蛋白的情况下，聚集是显著的，因为它们涉及两种或更多种蛋白质的融合，是大且复杂的结构，并且与简单的多肽或抗体相比倾向于以快速的速率形成聚集物。除了聚集以外，多聚体蛋白的不稳定性的另一种类型(特别是在两种或更多种蛋白质融合的区域发生)是片段化/截断，这可能是脱酰胺、氧化、异构化和/或水解的结果。脱酰胺可发生在天冬酰胺或谷氨酰胺残基，从而导致蛋白质的一个或多个电荷变体。融合蛋白的氧化主要涉及甲硫氨酸残基，并且通常受外部因素影响，例如暴露于光和过渡金属离子或赋形剂的降解产物(例如，聚山梨酸酯降解产生的过氧化氢)。已知在治疗性蛋白质分子中这些氧化产物和电荷变体的存在会增加不稳定性，并因此降低蛋白质的生物活性。因此，必须开发合适的一种或多种制剂组分的混合物，以使治疗性(融合)蛋白分子对许多物理和化学不稳定性诱导因素稳定。此外，开发的制剂应在储存条件下保持胶体稳定性，因为其可以衡量并确保蛋白质分子在平衡时在水溶液中保持悬浮。存在许多种类的赋形剂，例如糖和糖醇、氨基酸和表面活性剂，其可用于稳定蛋白质和融合蛋白分子。然而，在配制蛋白质时，赋形剂的选择受多种其他因素(例如它们与制剂中的蛋白质和其他组分的相容性，(预期的)给药方式和治疗性蛋白质的剂量等)的控制。因此，制剂开发背后的挑战涉及筛选和选择合适的缓冲条件和赋形剂(包括其浓度)，以获得稳定制剂。此外，还期望所开发的制剂在室温下是稳定的并且适合以冻干或液体形式给药。专利技术概述本专利技术公开了融合蛋白分子的稳定药物制剂，所述制剂包含缓冲剂、多元醇、氨基酸和表面活性剂，其中所述融合蛋白是CTLA4-Ig分子。具体地，本专利技术公开了CTLA4-Ig融合蛋白的稳定药物制剂，所述制剂包含缓冲剂、多元醇、氨基酸和表面活性剂，其中所述制剂不包含蔗糖。上述公开的CTLA4-Ig融合蛋白的稳定制剂可任选地不含氯化钠。另外，本专利技术公开了减少制剂中CTLA4-Ig融合蛋白的聚集和/或片段化的方法，其包括添加组氨酸和多元醇。本专利技术还公开了增加包含组氨酸和甘露醇的CTLA4-Ig融合蛋白制剂的稳定性的方法，其中所述组氨酸和甘露醇组分也在工艺步骤(特别是在切向流过滤工艺步骤(制剂步骤之前的步骤))中添加。在该工艺中的这样的添加为制剂赋予了显著的稳定性。公开的所述制剂中的CTLA4-Ig融合蛋白在较低以及较高浓度(从10mg/ml至200mg/ml)和在多种温度下都是稳定的，包括在30℃下稳定至少两周。所述制剂包含低于约10％的处于聚集物形式的融合蛋白分子，且优选包含低于7.5％的处于聚集物形式的融合蛋白分子。另外，多元醇和氨基酸的组合为存在于制剂中的融合蛋白分子赋予了胶体稳定性。专利技术详述定义术语“融合蛋白”是指通过将两个不同的多肽的全部或部分融合(即连接)而形成的蛋白质。通常，融合蛋白是使用重组DNA技术通过将编码两个多肽的多核苷酸端到端(endtoend)连接而制备的。术语“CTLA4-Ig”或“CTLA4-Ig分子”或“CTLA4Ig分子”可互换地使用，并且是指蛋白质分子，其包含具有CTLA4细胞外结构域或其部分的多肽，和免疫球蛋白恒定区或其部分。细胞外结构域和免疫球蛋白恒定区可以是野生型、突变体或经修饰的，是哺乳动物的，包括人或小鼠。多肽还可以包含另外的蛋白质结构域。CTLA4-Ig分子也可以指多肽的多聚体形式，例如二聚体、四聚体和六聚体。CTLA4-Ig分子还能够与CD80和/或CD86结合。术语“稳定”制剂是指如下制剂，其中在制剂中的抗体在储存时保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性。稳定性研究提供了一段时间内在多种环境因素影响下抗体质量的证据。ICH的“Q1A：新药原料和产品的稳定性测试”指出了来自加速稳定性研究的数据可用于评价抗体运输过程中可能发生的高于或低于标记储存条件的短期偏移的影响。有多种分析方法可用于测量药物制剂中融合蛋白的物理和化学降解。如果融合蛋白在肉眼检查颜色和/或透明度、或通过UV光散射、或通过体积排阻色谱测量时基本上未显示出聚集、沉淀和/或变性迹象，则所述融合蛋白在药物制剂中“保持了其物理稳定性”。当融合蛋白显示无产物变体形成或最小量的产物变体形成时，则称所述融合蛋白在药物制剂中“保持了其化学稳定性”，所述产物变体可包括由于对融合蛋白的化学修饰(如脱氨、氧化等)而导致的变体。诸如离子交换色谱和疏水离子色谱等的分析方法可用于研究化学产物变体。可以通过体积排阻色谱法(SEC)分离CTLA4Ig分子的单体、二聚体和高分子量(HMW)物质。SEC根据分子大小分离分子。随分子沿着色谱柱的长度方向迁移，通过差异的分子排阻或包含来实现分离。因此，分离度作为色谱柱长度的函数而增加。为维持融合蛋白的适当活性，期望减少产物的聚集物形成或片段化(单体/低分子量物质)，并因此将二聚体含量控制在目标值。二聚体是融合蛋白中存在的主要形式，并且在体积排阻色谱法中作为主要峰洗脱。可以使用装备有TSKG3000SWXL(300mm×7.8mm)和TSKG3000SWXL(40mm×6.0mm)色谱柱(TosohBioscience,Montgomery,Pa.)的2695AllianceHPLC(Waters,Milford,Mass.)分离CTLA4Ig分子样品。蛋白质的胶体稳定性提供了关于在含水环境中蛋白质分子与自身的相互作用以及与周围分子之间的相互作用的信息。溶液中蛋白质分子胶体稳定性的常见指标或预测指标是通过动态光散射(DLS)技术测量的扩散系数(kD)值。扩散系数值越本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CTLA4-Ig融合蛋白的稳定药物制剂，所述制剂包含缓冲剂、多元醇、氨基酸和表面活性剂，并且其中所述制剂不包含蔗糖。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180525 IN 2018410196061.CTLA4-Ig融合蛋白的稳定药物制剂，所述制剂包含缓冲剂、多元醇、氨基酸和表面活性剂，并且其中所述制剂不包含蔗糖。


2.如权利要求1所述的制剂，其中CTLA4-Ig融合蛋白与多元醇的比率为1:0.7或更低，CTLA4-Ig融合蛋白与氨基酸的比率为1:0.1或更低。


3.如权利要求1所述的制剂，其中CTLA4-Ig融合蛋白制剂的浓度为约20mg/ml至约200mg/ml。


4.如权利要求1所述的制剂，其中所述制剂的pH为6.0至8.0，优选6.5至7.5。


5.如权利要求1所述的制剂，其中所述制剂的粘度低于15cp，优选低于10cp。


6.如权利要求1所述的制剂，其中所述制剂中的融合蛋白在30℃下稳定至少两周，并且包含低于约10％的处于聚集物形式的融合蛋白分子，且优选包含低于7.5％的...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·贾亚拉曼，L·卡纳卡杜尔加姆，
申请(专利权)人：雷迪博士实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：印度;IN